Wrightin tahra-pohja, materiaalit, tekniikka ja käyttötarkoitukset



Wrigth's tahra on väritystekniikka, jonka amerikkalainen patologi James Homer Wright loi vuonna 1902 Romanowskin tahrasta. Kuten Romanowskin tahra oli epävakaa, Wrigth sisällytti metanolin liuottimeksi ja kiinteäksi.

Tämä väritys on moniväristä, mikä tarkoittaa, että se tuottaa useita värejä sen rakenteen mukaan, jonka väriaine absorboi. Tätä värjäysmenetelmää on käytetty laajasti erilaisten valkosolujen lukumäärän suorittamiseksi ja punasolujen, verihiutaleiden ja leukosyyttien morfologian tutkimiseksi perifeerisessä veressä ja luuytimessä..

Sen käyttö on erittäin tärkeää, koska eri solulinjoissa on havaittavissa poikkeavuuksia, mikä helpottaa sellaisten sairauksien kuten leukemian tai bakteeri- tai loistauditartuntojen diagnosointia..

Ehkä nämä ovat yleisimpiä sovelluksia, joissa tätä tekniikkaa käytetään, mutta ne eivät ole ainoita. Se on myös käyttökelpoinen muissa näytteissä kuin veressä ja luuytimessä, kuten esimerkiksi nenän purkautumista, ulosteen limaa, sylkeä, ihoa..

indeksi

  • 1 Wrightin tahran säätäminen
  • 2 Materiaalit
    • 2.1 Valmistelu
    • 2.2 Puskuroitu puskuriliuos
    • 2.3 Väriaineen suorittamiseen tarvittavat lisäaineet
  • 3 Wrightin tahran komponentit
    • 3.1 Metanoli
    • 3.2 Iskunvaimennin
    • 3.3 Eosiini (Y)
    • 3.4 Metyleenisininen
  • 4 Tekniikka
  • 5 Apuohjelma
    • 5.1 Hematologia
    • 5.2 Nenän eritys
    • 5.3 Parasitologia
    • 5.4 Hengitystieinfektiot
    • 5.5 Bakteriologia
    • 5.6 Mycology
  • 6 Miten Wrightin tahra havaitsee verinäytteen rakenteita??
  • 7 Suositukset hyvästä värjäyksestä
  • 8 Yleisiä virheitä Wrigth-värityksessä
    • 8.1 Erittäin vaalea värjäys
    • 8.2 Väriaineen saostumat
    • 8.3 Maalaa erittäin punertavan tai sinisen värin kanssa
  • 9 Tallennustila
  • 10 Viitteet

Wrightin tahra-pohja

Wrightin tahra syntyi Romanowskin tahrasta, joka koostuu metyylialkoholin liuoksesta hapan väriaineesta (eosiini Y) ja emäksisestä (metyleenisinisestä) ja sen hapetustuotteista.

Wrightin tahroissa käytettyjen väriaineiden seos aiheuttaa vaikutuksen, joka tunnetaan nimellä Romanowsky, eli se antaa kauniin violetin värin leukosyyttien ja neutrofiilisten rakeiden ytimille, kun taas punaiset verisolut värjätään vaaleanpunaisiksi..

Wrightin värille tyypillisiä värialueen antamisesta vastaavat komponentit ovat sininen B ja eosiini Y. Havaittu vaikutus riippuu väriaineiden sitoutumisesta kemiallisten rakenteiden ja sinisen B: n ja eosiinin Y vuorovaikutuksiin..

Tiettyjen solutyyppien happamat rakenteet, kuten nukleiinihapot, ydinproteiinit ja reaktiivinen epäkypsä sytoplasma, korjaavat sinisen B: n (perusväri).

Vaikka perusrakenteet, kuten hemoglobiini, segmentoitujen eosinofiilien rakeet, muiden solurakenteiden joukossa, kiinnittävät eosiini Y: n (happoväriaineen).

Värjäytymisen tulokseen voivat vaikuttaa erilaiset tekijät, kuten Wright-väriaineen pH, puskuri ja pesuliuos; sekä värjäys- ja kiinnitysaika.

Siksi kukin reagenssien valmistusvaihe on ratkaiseva ja se on tehtävä huolehtimalla jokaisesta yksityiskohdasta.

tarvikkeet

Wright-väritys. 100 ml: aan tarvitaan:

Punnitaan 0,3 g Wright-väriainetta, mitataan 97 ml metanolia ja 3 ml glyserolia.

valmistelu

Laita laastiin raskas määrä Wrightin väriainetta ja lisää hitaasti glyseroli, kunnes jauhe on täysin liuennut..

Sitten lisätään metanolia, sekoitetaan ja kaadetaan keltaiseen pulloon.

Ennen liuoksen käyttöä ravistellaan kevyesti ja suodattamalla.

Puskuroitu puskuri

Litrassa tislattua vettä, 3,76 g dinatriumhydrofosfaattia (Na2HKO4   2H20) ja 2,1 g kaliumdivetyfosfaattia (KH)2PO4).

Sekoita hyvin, kunnes kaikki sisällytetyt reagenssit ovat liuenneet. Säädä pH arvoon 7,2. Kaada lasipurkkiin ja säilytä huoneenlämmössä.

Väriaineen suorittamiseen tarvittavat lisämateriaalit

Lisäksi tarvitaan muita materiaaleja väritystekniikan toteuttamiseksi, nämä ovat: esineet, jotka sisältävät esineitä tai peittävät esineitä, värityssilta, pisetas vedellä tai pesupuskurilla, sekuntikello väritysaikojen ottamiseksi ja jotkut kuivausaineet (imukykyinen paperi, sideharso tai puuvilla).

Wright-värjäyskomponentit

metanoli

Alkoholi (metanoli) toimii veren tahran kiinnittymisenä liukumaan.

Pohjimmiltaan se on pelkistävä reagenssi, dehydraattori ja koagulantin kiinnitysaine. Sen vuoksi sen tehtävänä on koaguloida proteiineja ja tehdä niistä liukenemattomia, mutta ilman niiden denaturointia.

Metanoli on yleisimmin käytetty reagenssi, joka korjaa levitteet kaikissa laboratorioissa, koska se tuottaa parempia tuloksia kuin etanolilla saadut. Ihanteellinen pitoisuus on 99%.

Iskunvaimennin

Puskurin (puskuroidun liuoksen) tehtävänä on säätää tai ylläpitää värin pH: ta, koska pH, joka on säädetty arvoon 7,2, on välttämätön solurakenteiden absorboimiseksi väriaineita oikein.

Toisaalta metanolin kiinnityksen kulku kuivaa solut ja puskuri auttaa hydratoimaan ne.

Eosin (Y)

Eosiinilla on affiniteetti peruskomponentteihin, koska se on happoväri. Kaksi eosiinityyppiä ovat hyvin samankaltaisia, joten kumpaakaan näistä voidaan käyttää, jolloin saadaan sama tulos.

Yksi on nimeltään eosiini Y, keltainen eosiini tai tetrabromofluoresceiini ja toinen eosiini B, sinertävä erytrosiini B tai dibromodinitrofluoresiini. Eosiini Y on kuitenkin yleisimmin käytetty.

Tämän väriaineen tärkein ominaisuus on sen negatiivinen napaisuus, mikä tekee siitä houkuttelevia solurakenteita, joilla on positiivinen varaus.

Metyleenisininen

Se on perusväritys. Sen pääominaisuus on metakromasia, toisin sanoen kaikki rakenteet eivät värjää samanvärisiä, se riippuu niiden rakenteiden kemiallisesta koostumuksesta, jotka ovat värjättyjä.

Jotkut kääntyvät vaaleiksi tai tummansinisiksi ja toiset tumman violetiksi tai vaalealle lilaksi.

tekniikka

1-Suorita näytteen leviäminen niin, että ohut kalvo jää joko liukumaan tai peitelevyyn.

2-Anna ilmakuivua noin 2 tuntia.

3-Aseta kuiva tahra värjäyssillalle tai värjäysalustalle, kun näyte leviää ylöspäin.

4-Peitä arkki Wright-väriaineen pisaroittain, kunnes se peittää koko pinnan. Jätä 5 - 8 minuuttia.

5 -Väriaineen on peitettävä liukukappale kokonaan ilman, että se valuu reunojen yli. Jos väriaikana se alkaa haihtua, lisää pisaroita tulisi sijoittaa.

6-Sitten lisätään yhtä suuri määrä iskunvaimenninta, puhalletaan vähän, kunnes näkyviin tulee tyypillinen metallinen kiilto. Ota 10-15 minuuttia.

7-Pese vesijohtovedellä ja aseta pehmeä jet, kunnes levy näyttää vaaleanpunaiselta.

8-Alkoholilla kyllästetyllä sideharsolla poistetaan liukun takaosaan kiinnitetty väriaine.

9-Anna jauheen kuivua hyvin ennen upotusöljyn asettamista näkyviin mikroskoopissa.

hyödyllisyys

hematologian

Se soveltuu erinomaisesti perifeerisen veren tahrojen tahrottamiseen, paksujen verisärkien tutkimiseen ja luuytimen näytteiden solujen tutkimiseen.

Tämän väriaineyhdistelmän kemiallisten ominaisuuksien vuoksi solurakenteet voidaan helposti tunnistaa, koska ne pystyvät erottamaan läsnä olevat erilaiset solutyypit.

Nenän eritys

Tämä tekniikka on erittäin käyttökelpoinen nenän erityksen solujen (epiteelisolut, segmentoidut eosinofiilit, polymorfonukleaariset) tunnistamiseksi allergisen nuhan diagnosoinnissa.

parasitologia

Tässä mielessä se on ollut hyödyllinen Leishmania sp ihon haavaumien ihonalaisen solukudoksen histiosyyttien sisällä. Samoin sitä käytetään leukosyyttien tunnistamiseen ulostenäytteistä (ulosteen leusogrammi).

Tässä tapauksessa lääkärille on mielenkiintoista tietää, onko ulosteessa läsnä oleva leukosytoosi polymorfonukleaarinen tai mononukleaarinen. Tämä löydös ulosteen leogrammissa ohjaa, onko se bakteeri- tai virusinfektio.

Toisaalta veressä kiertävät loiset löytyvät punasoluista tai vapaudesta plasmassa. Halutut loiset ovat Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii ja eläinlääketieteessä se on hyödyllistä etsittäessä Theileria equi ja Babesia caballi, vauvojen aiheuttavat tekijät, erityisesti hevoseläimissä.

Wright ja Giemsa tahra voivat erottaa hemoparasiitit normaaleista solukomponenteista. Tätä varten voit käyttää kahta erilaista levitystä:

Hienot venyvät

Veri leviää kuin ohut kalvo liukumaan. Värjätty Wrightin tahralla, paljastaen ytimen ja sytoplasman ominaisuudet.

Paksu pisara

Tätä menetelmää käytetään parasiittien läsnäolon tutkimiseen suuremmassa määrässä verta.

Tätä varten levylle asetetaan suuri veren pisara. Kun olet siellä, sinun pitäisi defibrinoitua ja tehdä suurempia ja suurempia ympyröitä keskeltä ulospäin toisen liukukappaleen reunan avulla.

Lopuksi, jotta voidaan tarkkailla loisia paksussa levityksessä, erytrosyytit täytyy lysoida vedellä.

Hengitystieinfektiot

Hengitysteiden tasolla tämä tekniikka on myös käyttökelpoinen, koska sputuminäytteissä läsnä olevat solut, keuhkoputkien tai keuhkoputkien pesu ovat tärkeitä diagnoosin määrittämiseksi..

Samoin voidaan erottaa polymorfonukleaariset solut ja mononukleaariset solut.

bakteerioppi

Tämän tekniikan käyttö bakteriologiassa on rajallinen, koska se ei ole hyvä bakteerien värjäykseen, minkä vuoksi niiden värjäykseen käytetään muita erikoistuneita väritystekniikoita..

Sitä on kuitenkin käytetty etsimään epiteelisoluja, joissa on Chlamydia trachomatis virtsaputken tai endokervikaalisen limakalvon tahroissa, vaikka on tunnustettava, että se ei ole paras tapa tähän.

On myös mahdollista tarkkailla spiraalityyppisiä bakteereja punasolujen joukossa Borrelia burgdorferi tartunnan saaneilla potilailla, sekä moraaleilla tai inkluusiokappaleilla Ehrlichia sp lymfosyyttien, monosyyttien tai neutrofiilien sytoplasmassa.

mykologian

Histoplasma capsulatum on patogeeninen sieni, joka on usein diagnosoitu mikroskooppisesti eri kudosnäytteiden avulla, värjätty Wrightin tahnalla.

Miten verinäytteen rakenteet havaitaan Wrightin tahran avulla?

Suositukset hyvästä värjäyksestä

Verinäytteiden pidennykset tulisi ilmakuivattaa spontaanisti. Maalien tulisi olla mahdollisimman ohuita väriaineen paremman kiinnittymisen aikaansaamiseksi ja ylikuormitusten välttämiseksi.

Laadukkaalle värjäykselle on suositeltavaa tehdä värjäys kahden tunnin kuluessa levityksen valmistuksesta. Toisaalta ihanteellinen näyte on kapillaariveri ilman antikoagulanttia.

Jos kuitenkin käytetään laskimoveriä, sitä tulisi käyttää EDTA-antikoagulanttina eikä hepariinina, koska viimeksi mainittu voi deformoida solurakenteita.

Valmistetun väriaineen häviäminen on säilytettävä kuivissa paikoissa, jotta estetään valmisteen värjäytyminen.

Pesuprosessin aikana suositellaan neutraaliin pH-arvoon säädetyn veden käyttöä.

Lopuksi on suositeltavaa testata laboratoriossa käytettyjä värjäysmenetelmiä niin usein.

Tämä tapahtuu värjäämällä näytteitä tai laajennettuja kuvioita laadunvalvonnaksi. Tämä vaihe on tärkeä, sillä näin varmistetaan, että värjäys valmistetaan oikein ja väriaineet ovat hyvin standardoituja.

Jos kuvioarkki on huonosti värjätty, on ongelmia, jotka on ratkaistava.

Yleisiä virheitä Wrigth-värityksessä

Erittäin vaalea värjäys

Erittäin vaaleat tahrat, jotka johtuvat yleensä hyvin lyhyestä värjäytymisajasta tai erittäin liioitellusta pesusta. Se korjataan pidentämällä kontaktiaikaa väriaineen kanssa tai pienentämällä pesuaikaa.

Väriaine saostuu

Väriaine- saostumien likaantumisessa voi olla useita syitä, mutta yleisimpiä syitä ovat: suodattamattoman väriaineen käyttö, värjäys epätasaisilla värisilloilla, likaiset levyt, joissa on pölyä tai rasvaa. Viimeistele värjäys.

Maalaa erittäin punertavaa tai sinistä väriä

Puskuri vastaa väriaineen pH: sta. Väriaineet, joiden pH on alle ilmoitetun (hapon), aiheuttavat hyvin punaisia ​​tahroja.

Jos väriaineen pH on edellä (emäksinen), saadaan erittäin sinertävä tahra.

Tallennustila

Reagenssi on säilytettävä huoneenlämmössä.

viittaukset

  1. Gutiérrez V. Wright-värjäysmenetelmän ja Elisan testin vertaileva tutkimus Ehrlichiosis-kaninan diagnosoimiseksi San Pedro Sulan kaupungissa Hondurasissa. 2008. Opinnäytetyö hakea eläinlääkäriosaston nimeä. San Carlos de Guatemalan yliopisto.
  2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Perusvärjäys mikrobiologian laboratoriossa. Tutkimus vammaisuudesta. 2014; 3 (1): 10-18.
  3. "Wrightin tahra." Wikipedia, vapaa tietosanakirja. 18. toukokuuta 2018, 12:05 UTC. 8. joulukuuta 2018, 20:37
  4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Taajuus Babesia spp. montería, Córdoba (Kolumbia). Rev. udcaactual divulg cient.  2013; 16 (2): 451 - 458.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen.
  6. Retamales E, Mazo V. Chilen kansanterveyslaitos. Suositukset veren tahrojen värjäykseen veriarvojen lukemista varten.