Maalaa toukokuun Grünwald-Giemsan säätiö, tekniikka ja käyttötarkoitukset



Maalaa Grünwald-Giemsa o Pappenheim on värjäysmenetelmä, joka sekoittaa Giemsan ja May Grünwaldin reagenssit. Sitä käytetään normaalien ja epänormaalien verisolujen erilaistumiseen perifeerisen veren ja luuytimen tahroissa sekä histologisten osien ja sytologisten näytteiden värjäämisessä.

Molemmat reagenssit - Gemsa ja May Grünwald - ovat peräisin Romanowsky-tyyppisestä värjäyksestä, joka perustuu happo- ja emäksisten väriaineiden yhdistelmään..

Giemsa paransi tekniikkaa stabiloimalla eosiinin, metyleenisinisen ja sen johdannaisten seos glyserolilla. Toisaalta toukokuussa Grünwald käyttää eosiinia ja metyleenisinisä, käyttäen liuottimena metanolia. Tämä strateginen yhdistelmä on antanut erinomaisia ​​tuloksia.

Vaikka solumorfologian havainnon suhteen toimii samoin kuin Giemsa- ja Wright-värit, tämä tekniikka parantaa aiempia malleja, Chagas-tautia, leishmaniaasia ja trikomoniaa aiheuttavien loisten värin hienosäätöä.

Lisäksi se on osoittautunut erittäin käyttökelpoiseksi tekniikaksi siittiöiden nesteen sytologiseen tutkimukseen. Se on korostettu paitsi osoittamalla siittiöiden morfologisia ominaisuuksia, mutta myös mahdollistaa erottamisen suurella tehokkuudella olevien leukosyyttien, epiteelisolujen ja spermatogeneesin solujen kanssa.

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Väriaineiden valikoima
  • 2 Tekniikka
    • 2.1 Materiaalit
    • 2.2 Väkevöity liuos May Grünwald
    • 2.3 Giemsa-väriaine
    • 2.4 Puskuriliuoksen valmistus pH: ssa 7,2
    • 2.5 Verenvärin tai luuytimen värjäysmenetelmä
    • 2.6 Sperma-nesteen laajennettu väritysmenetelmä
    • 2.7 Tärkeitä tietoja
  • 3 Käyttö
    • 3.1 Emättimen sytologia
    • 3.2 Sperminäyte
  • 4 Viitteet

perusta

Tekniikka seuraa Romanowskin tahrojen perustaa, jossa happoväriaineilla on selektiivinen affiniteetti solujen peruskomponentteja kohtaan ja happamat komponentit houkuttelevat emäksisiä värejä.

Muulla tavalla selitetty, sekä solurakenteilla että väriaineilla on positiivisia tai negatiivisia sähkövarauksia; samoja maksuja hylätään ja erilaisia ​​maksuja houkutellaan.

Esimerkiksi emäksiset värit, kuten metyleenisiniset, ovat positiivisesti varautuneita ja negatiivisesti varautuneita rakenteita houkuttelevat. Siksi tämä väriaine peittää ytimiä, joissa on runsaasti DNA: ta ja RNA: ta, joilla on negatiivisesti varautuneita fosfaattiryhmiä.

RNA: ta sisältävien mononukleaaristen valkosolujen segmentoitujen basofiilien ja sytoplasmien rakeet värjätään myös.

Samoin happoväriaine sisältää negatiivisen varauksen, minkä vuoksi se liittyy positiivisesti varautuneisiin rakenteisiin, kuten erytrosyytteihin ja segmentoitujen eosinofiilien rakeisiin. Mitä tulee segmentoitujen neutrofiilien rakeisiin, nämä kiinnittävät molemmat väriaineet.

Erilaisia ​​väriaineita

Tässä tekniikassa ortokromaattisten väriaineiden ja metakromatikoiden välisten reaktioiden yhdistelmä on olemassa. Ortokromaattiset aineet (eosiini ja metyleenisiniset) sitoutuvat solurakenteeseen, johon ne liittyvät, ja tarjoavat stabiilin värin, joka ei muutu.

Toisaalta metakromaattiset aineet (metyleenisinisen taivaansininen A ja taivaansininen B johdannaiset) vaihtelevat alkuperäisen värinsä, kun ne on sidottu tiettyyn rakenteeseen, ja saattaa olla jopa erilaisia ​​sävyjä.

Lopuksi May Grünwald -ratkaisun toteuttama vaihe edellyttää veden läsnäoloa, koska ilman sitä väriaine tunkeutuu rakenteisiin, mutta sitä ei kiinnitetä. Jotta tämä tapahtuisi, väriaineen tulee muuttua polaariseksi tai ionisoituneeksi ja siten pystyä saostumaan ja liittymään niihin liittyviin rakenteisiin.

tekniikka

tarvikkeet

- Diat dioille.

- Värisiltoja.

- May-Grünwaldin ratkaisu.

- Giemsa tahraa.

- Tislattu vesi.

Väkevöity liuos May Grünwald

Meidän on punnittava 0,25 g eosiini-metyleenisinistä (May Grünwaldin mukainen väriaine) ja liuotettava 100 ml: aan metanolia. Sitten seos sekoitetaan 1 tunti ja jätetään seisomaan 24 tuntia. Valmis aika, se suodattaa.

Tekniikan soveltamiseksi May Grünwald -väriaine tulisi laimentaa seuraavasti: 200 ml: aan laimennettua väriainetta mitataan 30 ml väkevää liuosta, lisätään 20 ml puskuriliuosta ja 150 ml tislattua vettä, joka on säädetty arvoon 7,2-7,3. . Sitten se sekoitetaan ja suodatetaan.

Konsentroitu Giemsa-väriaine

Punnitaan 0,5 g atsur-eosiini-metyleenisinisä (Giemsa-väriaine), liuotetaan 50 ml: aan metanolia ja asetetaan 50 ml glyseriiniä seokseen.

Tekniikan suorittamiseksi laimenna 1:10 puskuriliuoksella ja anna sen levätä 10 minuuttia. Se voidaan tarvittaessa suodattaa.

Puskuriliuoksen valmistaminen pH: ssa 7,2

Ne on punnittava:

- 40 mg kaliumdi-vetyfosfaattia (KH2PO4).

- 151 mg di-natriumvetyfosfaatti-12-hydraattia (Na2HP04).

Molemmat yhdisteet liuotetaan 100 ml: aan vettä.

Verenvärjäys tai luuytimen värjäys

On olemassa kaksi tapaa: klassinen ja nopea.

Klassinen tila

  1. Peitä tahrat 2 tai 3 minuuttia laimennetulla May-Grünwald-liuoksella.
  2. Pese puskuroidulla tislatulla vedellä edellisen ratkaisun poistamiseksi.
  3. Peitä sama puskuroitu pesuliuos ja jätä 1 minuutti. Ajatuksena on, että edellinen väriaine kiinnitetään rakenteisiin ja että samanaikaisesti solut hydratoidaan.
  4. Lisätään 12 tippaa laimennettua Giemsa-tinktuuria puskuroituun veteen ja puhalletaan sekoittumaan ja homogenoitumaan. Anna seistä 15 tai 20 minuuttia.
  5. Pese tahrat puskuroidulla tislatulla vedellä ja laita se kuivaksi.
  6. Tarkenna ja tarkkaile optisessa mikroskoopissa verisoluja, jotka on värjätty käyttämällä 40X-tavoitetta. Tarvittaessa 100X voidaan käyttää.

Nopea tila

  1. Peitä kasvot toukokuun Grünwald-väriaineella, joka on laimennettu 1 minuutiksi.
  2. Pese puskuroidulla tislatulla vedellä.
  3. Peitä puskuroitu vesi ja anna seistä 1 minuutti.
  4. Laimennetaan Giemsa-väriaine ja jätetään 5 minuutin ajan.
  5. Pese puskuroidulla tislatulla vedellä ja anna sen kuivua.

Tässä kuvatut tekniikat ovat ohjaava opas, mutta on otettava huomioon, että menettelyt ja väriaineet vaihtelevat reagensseja toimittavan kaupallisen talon mukaan. On suositeltavaa noudattaa jokaisen kaupallisen talon tarkasti ilmoittamia ohjeita.

Siittiöiden nestemäinen laajennettu väritystekniikka

1 - Peitä levitys ohut kerros May Grünwald -liuosta 4 minuutin ajan.

2- Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.

3 Aseta laimennetun Giemsa-kerroksen (1:10) tislattuun veteen 15 minuuttia.

4- Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.

5- Anna kuivua ja tarkkailla mikroskoopin alla.

Tärkeitä tietoja

Menetelmässä vaaditaan, että reagenssien ja pesuliuosten pH: n on säädettävä arvoon 7,2-7,3, niin että solujen rakenteiden väriaineiden affiniteetit eivät vääristä ja eivät muuta odotettua lopullista väriä.

sovellukset

Tätä tekniikkaa käyttävät kliiniset laboratoriot perifeerisen veren ja luuytimen, kudososien ja sytologioiden tahrojen tahraamiseen.

Hematologisella alalla tämä tekniikka on elintärkeää solujen poikkeavuuksien tutkimuksessa muodon, koon ja lukumäärän suhteen. Se on erittäin arvokas väline tiettyjen sairauksien, kuten leukemian ja anemian, diagnosoimiseksi.

Lisäksi se tarjoaa erinomaisen hyödyllisyyden, kun haetaan parasiitteja hematologisilla aloilla (Plasmodium sp ja Trypanosoma cruzi) tai histologinen (Leishmanias sp).

Emättimen sytologia

Mitä tulee emättimen sytologiaan, tämä tekniikka on erityisen edullinen havainnointia varten Trichomonas vaginalis. Tämä on tärkeä havainto, koska sen läsnäolo simuloi syöpäkuvia in situ jotka sitten häviävät, kun loinen on eliminoitu.

Siittiöiden näyte

Se on ollut ihanteellinen työkalu sperma-näytteiden tutkimiseen, koska se tarjoaa arvokasta tietoa siittiöiden laadusta.

Sen tarjoamien tietojen on koskettava pääasiassa lukumäärää ja morfologiaa sekä samanaikaisesti mahdollisesti esiintyviä ja elintärkeitä soluja, kuten sukusoluja, leukosyyttejä ja epiteelisoluja..

Tämän analyysin avulla on mahdollista kuvata pään, kaulan, keskikappaleen ja pääosan spermien havaittuja poikkeavuuksia.

Lisäksi ne voivat myös auttaa osoittamaan hemospermian tapauksia (punasolujen esiintymistä siemennesteessä) ja leukospermiaa tai pyospermiaa (leukosyyttien määrän lisääntyminen siemennesteessä).

viittaukset

  1. Costamagna S, Prado M. Tuoreen testin, May Grünwald-Giemsa- ja Gram-värien ja viljelyvälineiden validointi Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Saatavana: scielo.
  2. Merck KGaA -laboratorio. Voidaanko Grünwaldin eosiini metyleenisinisellä mikroskoopilla.
  3. "May-Grünwald-Giemsa tahraa." Wikipedia, vapaa tietosanakirja. 15.11.2018, 14:37 UTC. 8. tammikuuta 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratorion lasikemikaalit Panreac. Reagenssit histologisia tekniikoita, hematologiaa ja mikrobiologiaa varten. Saatavilla osoitteessa: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Suositus veren värjäysten värjäykseen veriarvojen lukemista varten. Kansallinen ja referenssilääketieteellinen laboratorio. Chilen kansanterveyslaitos.
  6. Sarabia L. Spermiogrammi WHO: n kriteerien mukaisesti. Kehityksen anatomian ja biologian ohjelma. Lääketieteellinen tiedekunta Chilen yliopisto Saatavilla osoitteessa: pp.centramerica.com