Kinyounin värjäysperusta ja -tekniikat



Kinyoun-värjäys Se on väritystekniikka, jota käytetään happo-nopeiden bakteerien ja happojen loisten tahraamiseen. Se syntyi Ziehl-Neelsenin värin muuttamisesta; Molempia tekniikoita tulkitaan samalla tavalla, mutta ne eroavat kahdesta osasta: pääreagenssin valmistuksessa ja siinä, että Kinyoun-tekniikka ei käytä lämpöä.

Tästä syystä sitä kutsutaan myös kylmämodifioiduksi Ziehl-Neelseniksi tai Kinyoun kylmävärjäykseksi. Se on tarkoitettu värjäykseen Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, epätyypilliset mykobakteerit, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ja Cyclosporas cayetanensis.

On syytä mainita, että Nocardias värjäytyy heikosti tällä tekniikalla, koska ne ovat osittain haponkestävää alkoholia, joten tällä genrellä on muutettu metodologiaa.

Kinyounin kylmätekniikka puolestaan ​​yhdistettiin Didierin modifioimaan trikromitekniikkaan kokkidien havaitsemiseksi (Cryptosporidium parvum ja Isospora belli) ja mikrosporidian itiöt (Enterocytozoon bieneusi ja Encephalitozoon intestinalis).

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Tekniikka
    • 2.1 Materiaalit
    • 2.2 Kinyoun fenicated fuchsinin valmistus
    • 2.3 Alkoholihapon valmistus
    • 2.4 Metyleenisinisen kontrastivärin valmistus
    • 2.5 Kinyoun-värjäystekniikka
    • 2.6 Erityinen Kinyoun-tekniikka Nocardiasille
    • 2.7 Didierin muokkaama fenolisen ja trikromifuksiinin yhdistetty tekniikka
    • 2.8 Laadunvalvonta
  • 3 Kinyoun-tekniikka verrattuna Ziehl-tekniikkaan -Neelsen
  • 4 Viite

perusta

Tärkein värjäysreagenssi on karbolifuksiini tai fuksiinifenicada, jolla on ominaisuus, että se sitoutuu vahamaisen soluseinän sisällä oleviin karbolihappoihin, joissa on runsaasti mykobakteerien ja tiettyjen loisten lipidejä (mykolihappoja)..

Tämä liitos ei ole hapon värjäytymisen vastainen; siksi mikro-organismit on määritelty haponkestäväksi alkoholiksi.

Toisin kuin Ziehl-Neelsen-tekniikka - joka kiinnittää väriaineen lämmön kautta - Kinyoun-tekniikassa tämä vaihe ei ole välttämätön, koska tähän tekniikkaan valmistettu fenolifuksiini-liuos sisältää suuren fenolipitoisuuden..

Fenoli liuottaa soluseinän lipidimateriaalin, joka sallii karbolifuksiinin värin pääsyn. Sen jälkeen, kun väriaine tunkeutuu, se pysyy kiinteänä huolimatta alkoholin hapolla pesemisesta.

Tällä tavoin haponkestävät mikro-organismit ottavat tyypillisen punaisen värin, kun taas kaikki, joka ei ole haponkestävää alkoholia, muuttuu värjäytyneeksi ja värjäytyy sinisenä..

tekniikka

tarvikkeet

- Modifioitu fenolifuksiini.

- alkoholi etikkahapon.

- Metyleenisininen.

Kinyoun fenicated fuchsinin valmistus

- Perusfuksiini: 4 gr.

- Fenoli: 8 ml.

- Alkoholi (95%): 20 ml.

- Tislattu vesi: 100 ml.

Alkoholin perusfuksiini on liuotettava hitaasti sekoittamalla jatkuvasti. Tämän jälkeen kiteytynyt fenoli sulatetaan vesihauteessa 56 ° C: ssa. Liuotettuna lisätään 8 ml edellä valmistettuun fuksiiniliuokseen.

Alkoholihapon valmistus

- Väkevöity kloorivetyhappo: 3 ml.

- Etanoli (95%): 97 ml.

Se on mitattava, liitettävä ja sekoitettava.

Metyleenisinisen kontrastivärin valmistus

- Metyleenisiniset: 0,3 g.

- Tislattu vesi: 100 ml.

Se punnitaan ja liuotetaan.

Kinyoun-värjäystekniikka

1 - Valmistele suoraan näytteestä, joka voi olla esimerkiksi röyhkeä, keuhkojen neste, virtsan sedimentti, aivo-selkäydinneste tai ulosteet; tai mikro-organismien suspensiosta, joka on saatu puhtaista pesäkkeistä, jotka on kehitetty primääriviljelmissä.

2 - Kiinnitä lika lämpöön.

3 Aseta tahra värityssillalle ja peitä Kinyounin fenolifuksiini-reagenssi. Anna sen istua 3 tai 5 minuuttia.

4 - Pese tislatulla vedellä.

5- Valkaisu happamalla alkoholilla 3 minuutin ajan ja pese uudelleen tislatulla vedellä.

6 - Valkaisu uudelleen happamalla alkoholilla 1 tai 2 minuuttia, kunnes väriainetta ei enää vedetä.

7- Pese tislatulla vedellä ja anna valua, laita liukusäädin pystyasentoon.

8- Peitä valmiste metyleenisinisellä ja jätä 4 minuuttia.

9 - Pese tislatulla vedellä ja anna kuivua.

10 - Tutki 40X ja sitten 100X.

Jos haluat parantaa ja nopeuttaa happo-nopeiden mikro-organismien värjäystä, lisää yksi tippa kostutusainetta (kuten tergitoli nro 7) 30 tai 40 ml: aan Kinyounin fenolista fuksiinia..

Jotkut laboratoriot muuttavat metyleenisinisellä kontrastivärillä kirkkaan vihreää tai pikriinihappoa; ensimmäinen antaa vihreän värin taustalle ja toinen tuottaa keltaisen värin.

Kinyoun-tekniikka Nocardiasille

Nocardia-bakteerien värjäytymisen parantamiseksi käytetään Kinyoun-värjäyksen muutosta. Tekniikka on seuraava:

1 - Peitä kynsi Kinyoun fenicated fuchsinilla 3 minuutin ajan.

2 - Pese tislatulla vedellä.

3 - Valkaisu lyhyesti 3%: lla valmistettua happoa sisältävällä alkoholilla, kunnes väriainetta ei enää suljeta.

4 - Pese uudelleen tislatulla vedellä.

5- Peitä valmiste metyleenisinisellä ja jätä 30 sekuntia.

6- Pese tislatulla vedellä ja anna kuivua.

Didierin muokkaama fenolisten ja trikromisten fuksiinien yhdistetty tekniikka

Tätä tekniikkaa suositellaan analysoitaessa ulostenäytteitä, jotka ovat peräisin coccidiasta ja itiöistä Microsporidium sp samaan aikaan Seuraava menettely on seuraava:

1 - Peitä tahra 10 minuutin ajan Kinyounin fenolifuksiinilla.

2- Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.

3 - Valkaisu 30 sekunnin ajan alkoholin kloorivetyhapolla.

4 - Pese uudelleen tislatulla vedellä.

5 - Peitä trikromiliuos 30 minuutin ajan 37 ° C: ssa.

6- Pese tislatulla vedellä.

7 Värinpoisto 10 sekunnin ajan etikkahapolla.

8- Pese tahra 30 sekunnin ajan käyttäen 95-prosenttista etanolia.

Laadunvalvonta

Positiivisena kontrollina valmistetaan tahrat, joissa on Mycobacterium tuberculosis ja värjätään valmistetuilla reagensseilla sen varmistamiseksi, että bakteerit ottavat oikean värin (punainen-fuksia).

Negatiivisia kontrolleja voidaan käyttää myös valmistelemalla tahroja, joissa on jokin kanta, joka ei ole haponkestävää alkoholia, ja näin varmistetaan, että koko näyte ottaa kontrastin värin.

Kinyoun-tekniikka verrattuna Ziehl-tekniikkaan -Neelsen

Kinyoun-tekniikka on yksinkertaisempi, koska se poistaa lämmitysvaiheen, mutta sen tärkein etu on se, että se estää höyryjen päästöjä, jotka ovat erittäin myrkyllisiä ja aiheuttavat syöpää pitkällä aikavälillä. Siksi Kinyoun-värjäys on turvallisempaa värjäyshenkilöstölle.

On tärkeää ottaa huomioon, että on välttämätöntä huolehtia siitä, että reagenssit eivät pääse suoraan kosketuksiin ihon kanssa, koska ne ovat syövyttäviä ja valkaisuainetta on syttyvää.

Haittojen osalta negatiivinen leviäminen ei välttämättä tarkoita, että mikro-organismi ei ole läsnä. Lisäksi solun detriitin läsnäolo voi aiheuttaa vääriä positiivisia, mikä aiheuttaa sekaannusta diagnoosissa.

viittaus

  1. Sovellettu kliininen kemia (2016). BK Kinyoun Kit Saatavana osoitteessa: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun-värjäys ja kaksi Coccidiaa HIV: ssä. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, toimittaja Panamericana S.A..
  5. Wikipedia-avustajat. "Kinyoun tahra." Wikipedia, The Free Encyclopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8. helmikuuta 2018. Web. 5. tammikuuta 2019.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Värjäystekniikan toteuttaminen Coccidian ja Microsporidian samanaikaiseksi diagnosoimiseksi. Tasavallan Hygieniainstituutti. Montevideo. Uruguayssa. Saatavilla osoitteessa: higiene.edu.uy