Tetrathionaatti liemi säätiö, valmistelu ja käyttö



tetrationaatiliemi tai TT-liemi on valikoiva nestemäinen viljelyväliaine Salmonella-kantojen rikastamiseksi ja talteenottamiseksi. Sen on luonut Müeller ja myöhemmin Kauffmann muutti, joten niitä on nimeltään Müeller-Kauffmann-liemi.

Alkuperäinen väliaine sisälsi proteoosipeptoneja, kalsiumkarbonaattia ja natriumtiosulfaattia. Kauffmann lisäsi sappisuoloja ja loi toisen muodon kirkkaan vihreällä. Nämä aineet estävät koliformien kasvua ja jättävät vapaan väliaineen patogeenisten bakteerien kehittymiseen, tässä tapauksessa Salmonella.

Muutos oli erittäin onnistunut, koska se lisäsi merkittävästi väliaineen herkkyyttä. Siksi se on tällä hetkellä käyttökelpoinen salmonellien etsinnässä missä tahansa näytteen tyypissä, mutta erityisesti kiinteiden tai nestemäisten ulosteiden ja elintarvikkeiden osalta..

Sen valmistelu koostuu kahdesta vaiheesta; kaupallinen elatusaine on emäs tetrationaattiliemen valmistamiseksi ja sen jälkeen muodostettavan tetrationaatin valmistamiseksi lisätään jodipitoinen jodiliuos väliaineen täydentämiseksi..

Amerikan kansanterveysyhdistys (APHA) suosittelee tetrionaattiliemen käyttöä, jota on täydennetty kirkkaan vihreällä näytteiden rikastamiseksi Salmonellan etsinnässä, koska se on valikoivampi kuin tetrationaattiliemi ja seleniitiliemi.

Yleensä tetrationaattiliemi on ihanteellinen, kun Salmonella-suvun bakteereita epäillään pieninä määrinä tai niitä käytetään väärin altistamalla inhiboiville aineille tai teollisilla prosesseilla, jotka minimoivat niiden elinkelpoisuuden.

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 - Tetrationaatti
    • 2.2 -Varrattu tetrationaatti liemi kirkkaan vihreällä
  • 3 Käytä
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 suositusta
  • 6 Viitteet

perusta

Esillä olevat peptonit vastaavat kaseiinin haiman digestteja ja eläinkudoksen peptistä pilkkomista. Nämä tarjoavat hiilen, typen ja ravintoaineiden lähde yleensä bakteerien kasvulle.

Sen sijaan natriumtiosulfaatti reagoi jodatun liuoksen kanssa tetrationaatin muodostamiseksi. Tämä estää koliformien kasvua ja suosii sellaisten bakteerien kehittymistä, jotka sisältävät tetrationaatti-reduktaasin entsyymin, muun muassa Salmonellan suvun, mutta myös Proteus.

Sappisuolat toimivat myös useimpien grampositiivisten bakteerien ja joidenkin gram-negatiivisten bakteerien (koliformien) estävänä aineena.

Kalsiumkarbonaatti imee tetrationaatin hajoamisesta syntyvät myrkylliset aineet, jotka muodostavat rikkihappoa. Tässä mielessä kalsiumkarbonaatti neutraloi happamuuden säilyttäen stabiilin väliaineen pH: n.

Kirkkaan vihreän modaliteetin tapauksessa tämä aine lisää tetrationaattiliemen selektiivistä tehoa estämällä muita mikro-organismeja kuin Salmonella-suvun..

valmistelu

-Tetratingate liemi

Jodijodiliuos

Regret:

  • 6 g jodia.
  • 5 g kaliumjodidia.

Kaliumjodidi liuotetaan noin 5 ml: aan steriiliä tislattua vettä, sitten jodia lisätään vähitellen, kun seosta kuumennetaan. Kun se on täysin liuennut, se täytetään steriilillä tislatulla vedellä, kunnes se saavuttaa lopullisen tilavuuden 20 ml.

Puolet pohja tetrationaattiliemelle

Punnitaan 46 grammaa kuivattua väliainetta ja suspendoidaan 1 litraan steriiliä tislattua vettä. Sekoita ja kuumenna kunnes se on täysin liuennut, se voi kiehua vain muutaman minuutin ajan. Älä steriloi autoklaavissa. Väliaineen pohjan annetaan jäähtyä noin 45 ° C: seen ja tuolloin lisätään 20 ml jodattua liuosta..

Kun liuos on lisätty, iodurada on käytettävä väliaineeseen välittömästi. Jos et halua käyttää koko seosta, toimi seuraavasti:

10 ml emäsväliainetta jaetaan putkiin, ja vain 0,2 ml jodattua liuosta lisätään näytteisiin inokuloitaviin liuoksiin..

Niitä, joita ei käytetä, voidaan edelleen säilyttää jääkaapissa, mutta koska väliaine ei ole steriloitu, idea on valmistaa tarkka määrä tarvittavaa määrää..

Elatusaineen väri ennen jodin jodiliuoksen lisäämistä on maitomaista valkoista sakkaa ja sen lisäämisen jälkeen se on ruskea ja tiheä sakka. Havaittu sakka on normaali ja vastaa kalsiumkarbonaattia, joka ei liukene. Väliaineen lopullinen pH on 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionaatti liemi variantti kirkkaan vihreällä

Tetrationaattiliemen valmistamiseksi kirkkaalla vihreällä suoritetaan kaikki edellä kuvatut vaiheet, mutta lisäksi seokseen lisätään 10 ml 0,1%: lla valmistettua kirkkaan vihreää liuosta..

Kirkas vihreä

Tämä ratkaisu valmistetaan seuraavasti:

Punnitaan 0,1 g kirkkaan vihreää ja suspendoidaan 100 ml: aan tislattua vettä. Kuumenna kiehumiseen saakka sen täydellisen liukenemisen saavuttamiseksi. Tallenna keltaiseen pulloon.

käyttö

Ulosäytteitä (ulosteviljely) varten protokolla on seuraava:

Inokuloidaan 1 g kiinteää uloste tai 1 ml nestettä ulosteeseen 10 ml: lla käyttövalmiita tetrationaattiliemiä. Ravista voimakkaasti ja inkuboi aerobioosissa 43 ° C: ssa 6-24 tuntia.

Sen jälkeen otetaan alikvootti 10 - 20 μl liemestä ja subkultoidaan salmonellalle selektiiviseen väliaineeseen, kuten SS-agariin, XLD-agariin, kirkkaan vihreään agariin, Hektoenin enteriseen agariin..

Samanaikaisesti salmonellan selektiiviset väliaineet tulisi inokuloida suoralla näytteellä (ulosteet) ilman rikastusta. Peräsuolupyyhkeiden näytteistä lataa putkeen kerätty materiaali ja jatka edellä kuvatulla tavalla.

Elintarvikenäytteissä punnitaan 10 g kiinteää ruokaa tai 10 ml nestemäistä ruokaa ja siirrostetaan pullo 100 ml: aan käyttövalmiita tetrationaattiliemiä. Toimi samalla tavalla kuin edellä on kuvattu, mutta inkuboidaan 37 ° C: ssa.

Kuten voidaan nähdä, näytteen ja liemen välinen suhde on aina 1:10.

Laadunvalvonta

Viljelyalustan testaamiseksi voidaan käyttää tunnettuja kontrollikantoja. Yleisimmin käytetään ATCC-sertifioituja kantoja.

Käytettävät kannat ovat Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella-abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ja Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Salmonellakantojen osalta on odotettavissa erinomaista kehitystä Escherichia coli voi olla heikko tai säännöllinen kehitys, ja grampositiiviset kannat (Enterococcus ja Staphylococcus) ovat osittain tai kokonaan \ t.

suosituksia

-Koska tämä elatusaine ei estä Proteus-kasvua, jotkut laboratoriot käyttävät 40 mg / l novobiosiinia tämän mikrobikannan kehittymisen estämiseksi. Antibiootti on lisättävä ennen jodisolijohdetta.

-Jodipitoisen jodiliuoksen sisältävän väliaineen valmistamisen jälkeen ei pitäisi olla yli 2 tuntia inokulaation jälkeen.

-Kun väliaine jaetaan putkiin, seos on homogenisoitava jatkuvasti muodostuneen sakan uudelleensuspendointiin.

-Vähemmän saastuneissa näytteissä tetrationaattiliemestä inkuboidaan 35-37 ° C: ssa ja erittäin saastuneissa näytteissä suositellaan inkubointia 43 ° C: ssa..

viittaukset

  1. Conda Pronadisan laboratorio. 2010. Tetrationaattiliemi pohja Müeller-Kauffmannin mukaan. Saatavana:
  2. BD Laboratories 2003. Tetrathionaatti liemen pohja. Saatavana:
  3. Laboratories Britania. 2015. Tetionaatti liemi pohja. Saatavana:
  4. Media BBL. 2005. Putkivalmisteet salmonellalajien viljelyyn.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Natriumseliitin ja natriumtetrationaatin viljelyalustojen vertailu, molempia inkuboitiin 37 ° C: ssa ja 42 ° C: ssa eristäminen Salmonella spp kantajan ulosteista. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220