EY-liemen säätiö, valmistus ja käyttö



EY-liemi tai liemi Escherichia coli Se on selektiivinen nestemäinen kasvualusta. Tätä väliainetta suositellaan standardimenetelmillä kokonaisten ja ulosteiden koliformien laskemista varten todennäköisimmällä määrällä (NMP) vedessä ja elintarvikenäytteissä, joissa pääasiallinen tekijä on Escherichia coli.

EY-liemi koostuu tripteiinistä, laktoosista, sappisuoloista, dikaliumfosfaatista, monokaliumfosfaatista, natriumkloridista ja vedestä. Sen kaava on strategisesti suunniteltu edistämään koko- ja ulosteen koliformien kasvua ja estämään muiden mukana olevien mikro-organismien kehittymistä.

Bakteeri Escherichia coli on pääasiallinen ulosteen koliformi, joka on läsnä epäpuhtauksina vedessä ja elintarvikelähteissä ja aiheuttaa merkittäviä ruoansulatuskanavan haittavaikutuksia.

On huomattava, että on olemassa monia Escherchia coli; niiden joukossa voimme mainita enterohemorragisen (EHEC), enteroinvasivisen (EIEC), enteropatogeenisen (EPEC), enterotoksigeenisen (ETEC) ja enteroaggregatiivin (EAEC).

Tällä keinolla on kyky sallia kaikkien niiden kehittäminen, mutta ei pysty erottamaan niitä. Tätä varten on tehtävä ylimääräisiä testejä.

Veden ja ruoan mikrobiologinen tutkimus todennäköisimmällä määrällä (NMP) kokonaisten ja ulosteiden koliformien etsimiseksi on protokolla, joka on useiden vaiheiden mukainen; oletettu faasi, vahvistusvaihe ja valmistumisvaihe. EY-lientä käytetään vahvistusvaiheessa.

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 EY-liemi
    • 1.2 EY-liemi, jota on modifioitu novobiosiinilla
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 EY-liemi
    • 2.2 EC-liemi, jota on modifioitu novobiosiinilla
  • 3 Käytä
    • 3.1 Kokonais- ja ulosteen koliformien analyysi
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 suositusta
  • 6 Viitteet

perusta

EY-liemi

EY-väliaine perustuu tarvittavien ravintoelementtien tarjoamiseen kokonais- ja ulosteen koliformien optimaaliselle kehittymiselle, kun bakteeri on mukana. Escherichia coli.

Nämä ravintoelementit saadaan tripteiinistä, joka on erinomainen peptidien ja aminohappojen lähde. Lisäksi se sisältää myös laktoosia, fermentoitavaa hiilihydraattia, joka tuottaa energiaa ja sallii näyttää, jos bakteerit tuottavat kaasua.

Toisaalta elatusaine sisältää sappisuoloja, jotka tarjoavat selektiivisen luonteen, koska se estää näytteessä mahdollisesti esiintyvien grampositiivisten mikro-organismien kasvua..

Samoin dikaliumfosfaatti ja monokaliumfosfaatti toimivat pH-tasapainotusjärjestelmänä. Tämä järjestelmä on välttämätön, koska liemessä oleva laktoosi pyrkii happamoittamaan elatusainetta, kun sitä fermentoidaan mikro-organismeilla, mutta tämä kompensoidaan fosfaattisuoloilla.

Siksi nämä elementit ovat välttämättömiä, koska kontrolloimaton happamuus voi vaikuttaa haluttujen mikro-organismien oikeaan kehitykseen.

Natriumkloridi stabiloi väliaineen osmoottisesti, kun taas vesi on läsnä olevien liuottimien liuotin ja aikaansaa nestemäisen johdonmukaisuuden väliaineeseen.

EY-liemi modifioitu novobiosiinilla

Okrend ja Rose loivat erilaisia ​​EY-liemiä, joita kutsuttiin EY-liemeksi, jota muutettiin novobiosiinilla. Muutos sisälsi sappisuolojen konsentraation vähentämisen ja 20 mg / dl: n novobiosiinin lisäämisen.

Tämä muunnos suosii Escherichia coli enterohemorraginen (O157: H7).

Tämä bakteeri-serotyyppi aiheuttaa vakavaa hemorragista koliittia, joka voi aiheuttaa hemolyyttisen uremian oireyhtymän (HUS); mikä voi puolestaan ​​aiheuttaa akuuttia munuaisten vajaatoimintaa, ja kuolleisuus on korkea, joka voi nousta jopa 50%: iin iäkkäillä.

Yhdysvaltojen maatalousministeriö (USDA) suosittelee laajalti tämän keinon käyttöä, koska tämä bakteeri aiheuttaa vuosittain sairastuvuutta ja kuolleisuutta saastuneen elintarvikkeen kulutuksen vuoksi..

valmistelu

EY-liemi

Punnitaan 37,4 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Seoksen annetaan jäädä 5 minuuttia. Tämän jälkeen liuotetaan liuenneen lämmönlähteessä usein.

Kun se on liuennut, se jaetaan testiputkiin, jotka on aiemmin säädetty Durham-putkella. Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Väliaineen pH: n tulisi olla 6,9 ± 0,2. Dehydratoidun väliaineen väri on beige ja valmistettu kevyesti keltaisena.

Viinit säilytetään jääkaapissa, kunnes niitä käytetään. Käyttöaikana liemien on oltava huoneenlämpötilassa.

Toisaalta EC-liemi voidaan valmistaa myös kaksinkertaisella konsentraatiolla.

EY-liemi modifioitu novobiosiinilla

Punnitaan 36,7 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan vettä. Loppuosa valmisteesta on sama kuin edellä on kuvattu.

käyttö

Kokonais- ja ulosteen koliformien analyysi

EY-liemi on ihanteellinen kolibakteeritutkimuksen vahvistavassa vaiheessa NMP-menetelmällä, sekä vesinäytteissä, kuten lääkkeissä ja elintarvikkeissa..

Lazy turbid ja kaasuntuotannon liemet, jotka on saatu oletetussa vaiheessa, olisi siirrettävä 2% kirkkaan vihreään sappeen ja EC-liemeen.

Koko koliformien osalta EC-liemiä inkuboidaan aerobioosissa 24 - 48 tunnin ajan 37 ° C: ssa, ja ulosteiden koliformien osalta niitä inkuboidaan aerobioosissa 24 - 48 tuntia 44 ° C: ssa..

Molemmissa tapauksissa sitä tulkitaan seuraavalla tavalla: kaasuntuotannossa esiintyvät sameat putket katsotaan positiivisiksi. Jos kaasuntuotanto ei ole 24 tunnin kuluessa, inkubointia jatketaan 48 tunnin ajan.

EC-positiiviset liemet kulkevat täydelliseen vahvistusvaiheeseen, joka koostuu uudelleensijoittamisesta selektiivisissä väliaineissa, kuten Mac Conkey-agarissa, EMB-agarissa tai Endo-agarissa..

Jos käytetty liemi on EC modifioitu novobiosiinilla, positiivisia putkia suositellaan uudelleensijoittamaan Mac Conkey -agarilla sorbitolilla.

Laadunvalvonta

Laadunvalvonta on suoritettava jokaisella valmistetun väliaineen erällä. Ensiksi on arvioitava väliaineen steriiliys. Tässä mielessä yhtä tai kahta liemea inkuboidaan ilman inokulointia aerobioosiin 24 tunnin ajan 37 ° C: ssa. Odotettu tulos on läpinäkyvä liemi, jossa ei ole sameutta tai värimuutoksia.

Toiseksi on arvioitava tunnettujen kantojen kasvua, jota varten voidaan käyttää seuraavia bakteereja: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää mikrobiologista kehitystä, jossa havaitaan samea liemi, jossa on kaasutuotantoa E. coli ja ilman kaasua Salmonellalle.

Muut kannat, jotka voidaan sisällyttää kontrolliin, ovat: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Nämä kannat on täysin estettävä.

suosituksia

-Durham-putkien sijoittaminen on välttämätöntä koliformien tutkimisen kannalta.

-Levitä väliaine koeputkiin ennen sterilointia, ei koskaan sen jälkeen.

-Älä käytä, jos alustalla on yli 3 kuukauden valmistus.

-Älä käytä, jos väliaineen tavanomaisissa ominaisuuksissa on muutoksia.

viittaukset

  1. Laboratories Britania. EY: n keskitaso. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  2. E. coli enterohemorraginen. Elintarviketurvan ja kansanterveyden keskus. 2010. Saatavilla osoitteessa: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Medium EC. Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
  4. Neogen. Medium EC modifioitu novobiosiinilla. Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Tunnistaminen, eristäminen ja karakterisointi Escherichia coli Shiga-toksiinin tuottaja tuoreesta jauhetusta naudanlihasta, joka on peräisin lihakaupoista Concepciónissa, Tucumánin maakunnassa. Rev Microgol by Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Saatavilla osoitteessa: www.scielo.org.