Laktosado-liemi, valmistus ja käyttö

laktoosiliemi on nestemäinen, ei-selektiivinen viljelyväliaine, jota käytetään pääasiallisesti rikastusaineena Salmonella-kantojen eristämisessä jalostetuilla elintarvikkeilla, maitotuotteilla tai vedellä tehdystä mikrobiologisesta analyysistä. Tätä suosittelee elintarvikkeiden mikrobiologisia eritelmiä käsittelevä kansainvälinen komissio (ICMPF).

Väliaine sisältää gelatiinin, lihauutteen ja laktoosin entsymaattista hajotusta, bakteerikasvun kannalta välttämättömiä aineita. Lisäksi laktoosi on fermentoituva hiilihydraatti, joten jotkut koliformit voivat jakaa sen kaasuntuotannossa.

Tästä syystä amerikkalaisen kansanterveysyhdistyksen (APHA) suosittelee laktoosiliemestä kokonaisten ja ulosteen koliformisten bakteerien oletetulle tutkimukselle, ja se on erinomainen vaihtoehto korvata lauryylisulfaatti triptoosiliemi todennäköisimmän määrän (NMP) standarditekniikassa. ), jota käytetään elintarvikkeiden, maidon ja pintavesien, maanalaisen, virkistys-, kotitalous- ja teollisuusjätteen näytteiden mikrobiologiseen analyysiin.

indeksi

• 1 Säätiö
• 2 Valmistelu
• 3 Käyttö
  • 3.1 Ennakkorikastaminen
  • 3.2 Kokonais- ja ulosteen koliformien analyysi
• 4 Laitteen laadunvalvonta
• 5 Viitteet

perusta

Joidenkin näytteiden mikrobiologista analyysiä varten eturikastusvaihe on välttämätön, jotta pystytään talteenottamaan tietty mikro-organismi, joka voi olla hyvin pienessä määrässä tai epäsuotuisissa olosuhteissa, jotka rikkovat tai minimoivat sen elinkelpoisuuden.

Tällaisia ​​ovat esimerkiksi kuiviin ja jalostettuihin elintarvikkeisiin, jotka ovat mahdollisesti saastuneet Salmonellas sp. Näissä tapauksissa, jos bakteerit ovat läsnä, ne ovat kärsineet fyysisestä ja kemiallisesta kohtelusta tuotteen valmistusprosessin aikana..

Siten, että mikro-organismit altistuvat haitallisille tekijöille, kuten dehydratoinnille, altistumiselle inhiboiville tai myrkyllisille tuotteille, ja muiden bakteerien läsnäolon aiheuttamalle päällekkäisyydelle, muun muassa..

Tässä mielessä laktoosiliemellä on korjaava vaikutus mikro-organismin vaurioituneisiin rakenteisiin, mikä saa sen talteen ja lisääntymään siten, että se voidaan havaita.

Samoin laktoosiliemellä on kyky laimentaa inhiboivia aineita, jotka voivat vaikuttaa sen elinkelpoisuuteen, mahdollistamalla sen kehittymisen. Lisäksi laktoosiliemen ravitsemuksellinen koostumus on strateginen kasvun edistämiseksi Salmonella sp muiden mikro-organismien yläpuolella.

Lopullista tunnistamista varten se on viljeltävä muihin lopullisiin viljelykasveihin.

Toisaalta väliaineen koostumus mahdollistaa myös kaasua tuottavien laktoosin fermentoivien mikro-organismien havaitsemisen.

valmistelu

Yhden litran laktoosiliemen valmistamiseksi punnitaan 13 grammaa kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1000 ml: aan tislattua vettä.

Voidaksesi liuottaa väliaineen veteen, voit lämmittää liuosta hieman, mutta ei liikaa..

Kun liuos valmistetaan homogeeniseksi, se valmistetaan seuraavasti: jos liemiä käytetään koliformien etsimiseen, valmistetaan koeputkia sisältävä teline ja Durham-käymisputki työnnetään ylösalaisin.

Durham-putki on erittäin tärkeä yksityiskohta, koska sen avulla voidaan havaita kaasun muodostuminen, arvokkaita tietoja koliformien etsinnässä.

Kun putket ovat valmiita, niihin lisätään 10 ml laktoosiliemestä, jonka on oltava riittävä koko Durham-putken peittämiseksi..

Jos laktoosiliemiä käytetään etukäteen rikastusliemeenä, ei ole välttämätöntä sijoittaa Durham-käymisputkea. Tällöin tarvitaan suurempi määrä väliainetta (225 ml), joka tarjoillaan 500 ml: n pulloissa, leveä suu ja lämpökestävä ruuvikorkki.

Sen jälkeen putket tai pullot viedään autoklaaviin 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Väliaineen tulisi pysyä lopullisessa pH-arvossa 6,9 ± 0,2 25 ° C: ssa.

Viinit säilytetään jääkaapissa, kunnes niitä käytetään.

Ennen käyttöä liemet on karkaistu huoneenlämmössä.

Toisaalta laktoosiliemi voidaan valmistaa myös kaksinkertaisella konsentraatiolla.

Jotkut laboratoriot lisäävät laktoosiliemeen bromikresolia purppuran pH-indikaattorina, jotta näytetään putket, joissa värinmuutoksella on esiintynyt laktoosin käymistä. Tässä tapauksessa liemi on väriltään violetti ja jos käyminen muuttuu keltaiseksi.

sovellukset

Mikrobiologian laboratorioissa laktoosiliemiä käytetään laajalti suhteellisen edullisena väliaineena, joka tarjoaa luotettavia ja nopeita tuloksia (24–48 tuntia).

Sitä voidaan käyttää kokonais- ja ulosteen koliformien analysointiin vedessä ja elintarvikkeissa tai salmonellan esirikastustilaksi.

Preenrichment

Esirikastaminen on vaihe ennen näytteen rikastamista, mikä parantaa huomattavasti Salmonella-suvun bakteerien talteenottoa jalostetuissa elintarvikkeissa.

Tätä varten kiinteän elintarvikkeen (25 g) tai nesteen (25 ml) näyte kylvetään 225 ml: aan laktoosiliemiä ja inkuboidaan 24 - 48 tuntia. Sen jälkeen seleeni-kystiiniliemi tai tetrationaattiliemi subkultoidaan rikastetussa väliaineessa. Sitten se siirtyy valikoivaan mediaan XLD ja SS.

Kokonais- ja ulosteen koliformien analyysi

Se on erinomainen keino ulosteen saastumisen indikaattorina.

Siksi laktoosiliemi on ihanteellinen kolibakteeritutkimuksen oletetulle faasille kaikkein todennäköisin luku -menetelmällä.

Näytteissä, joissa epäillään suurta määrää koliformeja, siirrostetaan pienempi määrä koliformeja (1 ml), kun taas näytteille, joissa epäillään pienempi määrä koliformeja, siirrostetaan enemmän näytemäärää (10 ml)..

Analyysille tehdään 10 laimennusta^-1, 10^-2, 10^-3, muodostetaan 3-5 putkiparisto kullekin käytetylle konsentraatiolle.

Jokaisesta laimennoksesta kylvetään sama tilavuus laktoosiliemiin.

Putkia inkuboidaan 24 tuntia. Negatiiviset liemet inkuboidaan vielä 24 tuntia.

Tulosten tulkinta suoritetaan noudattamalla kahta ominaisuutta: ensimmäinen on sameuden esiintyminen tai puuttuminen ja koska tämä väliaine ei sisällä pH-indikaattoria, värin muutosta ei tapahdu.

Toinen on kaasun tuotanto tai ei. Kaasu näkyy helposti Durham-putkessa, kun ilmestyy yksi tai useampia ilmakuplia.

Jos molempia ominaisuuksia havaitaan, se on positiivinen, toisin sanoen sameus kaasuntuotannossa. Positiiviset putket on siirrettävä uudelleen vahvistavaan väliaineeseen (Brothiant Green 2% Bile ja EC-liemi).

Laitteen laadunvalvonta

- Väliaineen valmistelussa on tärkeää, että Durhams-putkia ei unohdeta sijoittaa, jos sen tarkoituksena on kolibakteerien tutkimus..

- Älä kuumenna alustaa ennen sterilointia.

- Levitä koeputkiin ennen sterilointia, ei koskaan sen jälkeen.

- Älä käytä, jos alustalla on yli 3 kuukauden valmistus.

- Älä käytä, jos havaitset muutoksia väliaineen tavanomaisiin ominaisuuksiin.

- Kun valmistetaan erä laktoosiliemiä, testaa sen laatu laatimalla kantoja, jotka tunnetaan nimellä Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii ja Klebsiella pneumoniae. Ne kasvavat hyvin, kaasuntuotannolla (positiivinen valvonta).

- Se voi myös sisältää Pseudomonas aeruginosa, salmonella typhimurium tai Enterococcus faecalis, jotka kasvavat hyvin, mutta ilman kaasuntuotantoa (Negatiivinen valvonta).

- On huomattava, että dehydratoidun väliaineen alkuperäinen väri on beige ja valmistetun väliaineen väri on hyvin kirkas ja läpinäkyvä keltainen. Jos väri tai ulkonäkö muuttuu, saattaa olla, että väri heikkenee.

viittaukset

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologia ja ympäristön mikrobiologia. (2013) 1. painos. Cartagenasin yliopisto, Kolumbia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. (2009). Elintarvikkeiden mikrobiologisen analyysin tekniikat. 2nd ed. Kemian tiedekunta, UNAM. Meksiko.
3. Laboratories Conda Pronadisa. 2017. Laktoosiliemen kaksinkertainen pitoisuus (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Koliformisten bakteerien uuttamisen tekniikoiden vertailu Xochimilcon, Meksikon järven sedimentistä. Rev. argent. Microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. Saatavilla osoitteessa: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Keski-, Cordilleran ja pääkaupunkiseudun piirikuntien artesiakaivojen mikrobiologisen laadun määrittäminen. Mem. Inst. Investig. Cienc. terveys 2013; 11 (1): 5-14. Saatavana osoitteesta: scielo.iics.