Vogel-Johnson Agarin säätiö, valmistelu ja käyttö



Vogel-Johnsonin agar on kiinteä, valikoiva ja differentiaalinen viljelyväliaine, joka on erityisesti suunniteltu eristämään Staphylococcus aureus. Vogel ja Johnson loivat tämän väliaineen vuonna 1960 Zebovitzin, Evansin ja Nivenin vuonna 1955 muotoillun glysiini-telluriittiagarin muunnoksesta..

Muutos sisälsi kasvualustassa olevan mannitolin pitoisuuden ja pH-indikaattorin sisällyttämisen. Nykyinen kaava koostuu tripteiinistä, hiivauutteesta, mannitolista, dikaliumfosfaatista, litiumkloridista, glysiinistä, fenolipunasta, agarista, 1% kalium-telluuriliuoksesta ja vedestä..

On huomattava, että on olemassa muita keinoja, jotka Vogel-Johnsonin agarin tavoin ovat valikoivia S. aureus, kuten suolainen mannitoli-agar ja Baird Parker-agar. Tässä mielessä voitaisiin sanoa, että Vogel-Johnson-agarin perustana on seos suolaisen mannitoli-agarin ja Baird Parkerin agarin välillä..

Ensimmäisessä kolonioissa S. aureus Ne erottuvat fermentoimalla mannitolia ja kääntämällä pH-indikaattori keltaiseksi. Toisaalta toisessa S. aureus sille on tunnusomaista, että se pienentää telluuria telluuriin ja muodostaa harmaita mustiksi pesäkkeiksi. Molempia ominaisuuksia havaitaan Vogel-Johnsonin agarissa.

Tämä väline, kuten sen vastineet, on käyttökelpoinen havaitsemiseksi Staphylococcus aureus elintarvikenäytteissä, teollisuustuotteiden terveystarkastuksissa ja kliinisissä näytteissä.

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Ravinteiden osuus
    • 1.2 Valikoiva teho
    • 1.3 Eroteho
    • 1.4 Osmoottinen tasapaino ja kiinteytysaine
  • 2 Valmistelu
    • 2,1 1 painoprosenttia kalium-telluuriliuosta
    • 2.2 Vogel-Johnson-agarialusta
  • 3 Käytä
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Viitteet

perusta

Ravinteiden panos

Vogel-Johnson-väliaine sisältää tripteiini- ja hiivauutetta; molemmat aineet tarjoavat pitkäketjuisia aminohappoja, jotka toimivat hiilen ja typen lähteinä, jotka ovat välttämättömiä bakteerien kasvulle. Tässä kasvualustassa kasvavat bakteerit ottavat ravintoaineet näistä aineista.

Valikoiva teho

Vogel-Johnson-agar pystyy estämään gramnegatiivisten bakteerien ja jopa joidenkin grampositiivisten bakteerien kasvua, mikä edistää koagulaasipositiivisten stafylokokkien kehittymistä. Estävät aineet ovat kalium-telluriitti, litiumkloridi ja glysiini.

Eroteho

Aineet, jotka tekevät tästä erilaistetusta väliaineesta, ovat mannitoli ja kalium-telluriitti. Mannitoli on hiilihydraatti, ja kun se on käynyt, syntyy happoja, jotka muuttavat elatusaineen punaisesta keltaiseksi, mikä johtuu fenolipunaisen pH-indikaattorin läsnäolosta..

Vaikka väritön telluri, kun se on pelkistetty metalliseksi vapaaksi telluridiksi, on tummanharmaa tai musta.

Staphylococcus aureus mannitolia ja vähentää telluuria telluuriin. Siksi tyypilliset S. aureus tässä väliaineessa ne ovat harmaita tai mustia, joita ympäröi keltainen väliaine.

Tässä kasvualustassa kasvavat bakteerit, jotka eivät vähennä telluuria tai fermentoivaa mannitolia, muodostavat läpinäkyviä pesäkkeitä, joita ympäröi punainen väliaine, jopa voimakkaampi kuin alkuperäinen väri, väliaineen alkalisoinnin vuoksi käyttämällä peptoneja..

Toisaalta telluriittiä vähentävät bakteerit, jotka eivät fermentoi mannitolia, kasvavat harmaina tai mustina pesäkkeinä, joita ympäröi syvänpunainen väri.

Jos väliaine valmistettiin lisäämättä kalium-telluuria, pesäkkeet olivat S. aureus ne kehittyisivät keltaisina pesäkkeinä, joita ympäröi keltainen väliaine, kuten suolaisessa mannitoli-agarissa.

Osmoottinen tasapaino ja kiinteytysaine

Dikaliumfosfaatti säilyttää väliaineen osmoottisen tasapainon ja säätää pH: n neutraaliksi 7.2. Vaikka agar antaa kiinteää konsentraatiota viljelyalustalle.

valmistelu

1% kalium-telluuriliuos w / v

Tätä liuosta ei sisälly dehydratoituun väliaineeseen, koska sitä ei voida steriloida autoklaavissa. Tästä syystä se valmistetaan erikseen ja lisätään steriloituun väliaineeseen.

Jotkut kaupalliset talot myyvät käyttövalmiita 1% kalium-telluuriliuosta. Jos haluat valmistaa laboratoriossa, toimi seuraavasti:

Punnitaan 1,0 g kalium-telluria ja mitataan 100 ml tislattua vettä. Liuotetaan kaliumin telluriitti osaan vettä ja täytetään sitten vesimäärä, kunnes saavutat 100 ml: n. Steriloidaan liuos suodatusmenetelmällä.

Vogel-Johnson-agarialustan väliaine

Punnitaan 60 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Seos kuumennetaan kiehuvaksi täydellisen liukenemisen edistämiseksi. Liukenemisprosessin aikana väliainetta sekoitetaan usein.

Steriloidaan autoklaavissa 15 kiloa painetta ja 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poista autoklaavista ja anna seistä, kunnes väliaine saavuttaa noin 45 - 50 ° C: n lämpötilan. Lisätään 20 ml aiemmin valmistettua kalium-telluuriliuosta 1%: iin..

Sekoita ja kaada steriileihin Petri-maljoihin. Annetaan jähmettyä ja järjestä käännetyt levyt, jotta ne voidaan säilyttää jääkaapissa myöhempää käyttöä varten.

Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,2 ± 0,2.

Ennen näytteen istuttamista odota, kunnes levy ottaa ympäristön lämpötilan.

Valmistetun väliaineen väri on punainen.

käyttö

Vaikka sitä voidaan käyttää eristämiseen S. aureus minkä tahansa tyyppisissä näytteissä sitä käytetään pääasiassa farmaseuttisten tuotteiden, kosmetiikan ja elintarvikkeiden mikrobiologiseen analyysiin.

Inokulaattia suositellaan tiheäksi. Kylvö voidaan suorittaa platina- kahvan avulla tai pinnalla Drigalski-lastalla.

Levyjä inkuboidaan 35 - 37 ° C: ssa 24 - 48 tuntia aerobioosissa.

Laadunvalvonta

Vogel-Johnson-alustan laadunvalvonnan suorittamiseksi voidaan käyttää seuraavia kontrollikantoja:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 tai Proteus mirabilis ATCC 43071.

Odotettu tulos on seuraava:. \ T S. aureus Tyydyttävä kasvu mustilla pesäkkeillä, joita ympäröi keltainen väliaine. että S. epidermidis säännöllinen kasvu läpikuultavilla tai mustilla pesäkkeillä, joita ympäröi punainen väliaine.

Samoin E. coli on odotettavissa, että on täydellinen esto ja Proteus mirabilis osittainen tai täydellinen esto; jos se kasvaa, se tekee niin säästeliäästi ja pesäkkeet ovat mustia, joita ympäröi punainen punainen väri.

viittaukset

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel ja Johnson Agar). 2006. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  2. Laboratories Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  3. Laboratories Britania. Kalium-telluriitti. 2015. Saatavilla osoitteessa: britania.com
  4. Himedia Laboratory. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Saatavilla osoitteessa: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel-Johnson Agar Base. Merckin mikrobiologian käsikirja. 12. painos, s. 502-503. Saatavana: Käyttäjät / Joukkue / Lataukset
  6. Wikipedian avustajat "Ágar Vogel Jonhson", Wikipedia encyclopedic livre,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Venezuelan standardi Covenin 1292-89. (1989). Food. Eristäminen ja laskeminen Staphylococcus aureus. Saatavana:sencamer.gob.ve