Kirkkaan vihreä agar-pohja, valmistus ja käyttö

kirkkaan vihreä agar se on kiinteä viljelyväliaine, jolla on suuri selektiivisyysaste. Sitä käytetään yksinomaan Salmonella-suvun kantojen eristämiseen, mutta on olemassa joitakin poikkeuksia, kuten typhi- ja paratyphi-lajeja, jotka eivät kasva tässä kasvualustassa.

Salmonella-suvun etsintä on usein ulosteiden, veden tai ruoan näytteissä. Tässä mielessä tämä väline voi olla erittäin hyödyllinen. Tämä agar luotiin vuonna 1925 Kristensen, Lester ja Jurgens, myöhemmin Kauffmann muutti.

Se koostuu pluripeptonista, joka on peräisin eläinkudoksen peptisestä digestiosta ja kaseiinin digestioista, sisältää myös hiivauutetta, natriumkloridia, laktoosia, sakkaroosia, fenolipunaa, kirkkaan vihreää ja agar-agaria.

Sille on tunnusomaista se, että se on hyvin epämiellyttävä väline useimmille bakteereille, mikä edistää salmonellan kasvua, mutta jotkut kolibakteerit pystyvät pysymään siinä, kehittymällä heikosti.

On tärkeää korostaa, että tällä välineellä Shigella-suku ei kasva eikä kumpikaan Salmonella typhimurium, tai Salmonella paratyphi. Siksi, jos halutaan eristää nämä mikro-organismit, tulisi käyttää muita keinoja, kuten XLD-agaria..

indeksi

• 1 Säätiö
  • 1.1 Kirkasvihreä agar
  • 1.2 Kirkkaan vihreän agarin (BGA) vaihtoehdot
• 2 Valmistelu
• 3 Käyttö / sovellukset
• 4 Laadunvalvonta
• 5 Viitteet

perusta

Kirkkaan vihreä agar

Jokaisella alustan muodostavalla komponentilla on erityinen toiminto, joka määrittää agarin ominaisuudet ja ominaisuudet.

Pluripeptonat ja hiivauute ovat ravintoaineiden lähde, josta mikro-organismit ottavat niiden kehitykseen tarvittavat typen ja mineraalit. Laktoosi ja sakkaroosi ovat energialähteitä mikro-organismeille, jotka kykenevät fermentoimaan niitä.

Kirkkaan vihreä on estävä aine, joka estää grampositiivisten bakteerien ja suuren määrän gramnegatiivisten mikro-organismien kehittymistä.

Natriumkloridi antaa osmoottista stabiilisuutta alustalle. Vaikka fenolipunainen on pH: n indikaattori, se muuttuu väriksi, kun havaitaan hiilihydraattien fermentoinnista peräisin olevien happojen tuotanto.

Laktoosin ja sakkaroosin fermentoimattomat pesäkkeet kasvavat tässä valkoisen värin, vaaleanpunaisen tai läpinäkyvän, alustassa punaisella taustalla. Esimerkiksi Salmonella-suvun bakteerit.

Vaikka laktoosin fermentoivat bakteerit tai sakkaroosi, jotka kykenevät kasvamaan tässä elatusaineessa, kehittävät vihertävän keltaisia ​​tai vihertävän keltaisia ​​pesäkkeitä kelta-vihreällä taustalla. Esimerkiksi, Escherichia coli ja Klebsiella pneumoniae.

Kirkkaan vihreän agarin (BGA) vaihtoehdot

Kirkkaaseen vihreään agariin on muitakin variantteja; novobiosiinivihreä agarin kirkkaan glukoosin (NBG) ja novobiosiini-agarin kirkkaanvihreä glyseroli-laktoosi (NBGL).

Novobiocin-agarin kirkkaanvihreä glukoosi (NBG)

Sisältää tryptikaasi-soija-agaria, rauta-ammoniumtsitraattia, natriumtiosulfaattipentahydraattia, fenolipunaa, glukoosia, kirkkaan vihreää, novobiosiinia ja tislattua vettä.

Tarjoaa salmonellan pesäkkeiden eristämistä ulosteesta.

Tässä tapauksessa kirkkaan vihreä ja novobiosiini ovat estäviä aineita, jotka estävät grampositiivisten bakteerien ja joidenkin Gram-negatiivisten mikro-organismien kasvua.

Rikkiä syntyy natriumtiosulfaatista, ja rauta on lähde rauta-sitraatille, jotka molemmat ovat välttämättömiä vetysulfidin tuotannon paljastamiseksi muodostamalla rautasulfidin musta sakka..

Glukoosi on fermentoituva hiilihydraatti ja fenolipunainen on pH-indikaattori.

Tässä kasvualustassa Salmonella-pesäkkeet kehittyvät suuriksi mustalla keskellä, jota ympäröi punertava halo ja jota seuraa selkeä näkyvä alue. Jotkut Citrobacter freundii tuottaa samankaltaisia ​​pesäkkeitä salmonellalle.

Kirkkaan vihreä novobiosiiniagar glyserolilaktoosi (NBGL)

Tämä väliaine sisältää tryptikaasi-soija-agaria, rauta-ammoniumtsitraattia, natriumtiosulfaattia, laktoosia, glyserolia, kirkkaan vihreää, novobiosiinia ja tislattua vettä.

Tämän väliaineen ero edelliseen on, että glukoosi korvataan laktoosilla, eikä glyserolia ja fenolipunaa käytetä.

Väliainetta käytetään myös salmonellalajien eristämiseen, pesäkkeet kehittyvät mustiksi tuottamalla vety- sulfidia.

Ainoastaan ​​pesäkkeet, jotka eivät tuota happoa glyserolista tai laktoosista, saavuttavat H-tuotannon₂Se riittää, koska alhainen pH häiritsee H: n muodostumista₂S. Tämä johtaa värittömiin pesäkkeisiin useimmille Proteus- ja Citrobacter-lajeille.

valmistelu

-Punnitaan 58 grammaa kaupallisesti saatua kuivattua väliainetta. Lisää se litraan tislattua vettä. Sekoita, anna seistä muutaman minuutin ja jätä valmiste lämpölähteeseen, kunnes se liukenee kokonaan.

-Autoklaavi 121 ° C: ssa 15 minuuttia, ei ylitä sterilointiaikaa.

-Antakaa seistä ja tarjoile vielä kuumaa steriileissä petrimaljoissa. Lopullisen pH: n tulisi olla 6,9 ± 0,2.

-Anna jähmettää ja säilytä jääkaapissa, kunnes se on käytössä. Ennen istutusta levyjen tulee olla huoneenlämpötilassa.

-Jauhe-aine on vihreä ja valmis ottamaan oranssinvärisen tai punertavanvärisen värin pH: sta ja kaupallisesta talosta riippuen. Erittäin ruskea väri viittaa siihen, että agar oli ylikuumentunut.

-Kun agari on jähmettynyt, ei suositella uudelleenlaatimista, kun väliaine heikkenee.

Käyttö / sovellukset

Tätä elatusainetta käytetään muun muassa Salmonella-suvun kantojen etsimiseen ulosteesta ja maitotuotteista..

Koska se on melko epämiellyttävä ympäristö, on suositeltavaa istuttaa runsaasti inokulaattia, jos käytetään suoraa näytettä. Muussa tapauksessa näytteiden esikyllästäminen ja rikastaminen on tehtävä ennen istutusta tässä elatusaineessa.

Koska jotkut salmonellakannat estyvät tai kasvavat vaikeuksin, on suositeltavaa seurata tätä elatusainetta muiden selektiivisten agarien kanssa salmonellalle..

Kaikki tunnusomaisen salmonellan omaava pesäkkeelle on tehtävä biokemialliset testit lopullista tunnistamista varten.

Laadunvalvonta

Kirkkaan vihreän agariväliaineen hyvän toiminnan testaamiseksi ATCC-kantoja voidaan käyttää havaitsemaan sen kehittymistä siinä..

Laadunvalvontaan käytetyt yleisimmät kannat ovat seuraavat: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Ensimmäisen 3: n on annettava vaaleanpunaisia ​​tai läpinäkyviä valkoisia pesäkkeitä punaisella taustalla. Salmonella, jolla on hyvä kehitys ja Proteus, jolla on harvinaista tai säännöllistä kasvua.

Klebsiella ja Escherichia ovat keltaista keltaista keltaista keltaista keltaista, ja Shigellan ja Staphylococcusin osalta on estettävä.

Dehydratoitu väliaine on säilytettävä huoneenlämmössä, kuivassa paikassa, koska väliaine on hyvin hygroskooppinen.

viittaukset

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Brilliant Green Agar. 2009
2. Britannian laboratorio Kirkas vihreä agar. 2015.
3. BD-laboratorio. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, toimittaja Panamericana S.A..
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen