Agar Thayer Martinin säätiö, valmistelu ja käyttö

Thayer Martin agar Se on erittäin ravitseva ja selektiivinen kiinteä väliaine, joka eristää Neisseria meningitidis ja Neisseria gonorrhoeae; molemmat tunnetaan patogeenisinä tai kliinisesti merkittävinä Neisseriana.

Yksi tärkeimmistä erityispiirteistä Thayer Martin agarilla on sen ravintolisien korkea pitoisuus. Tämä ominaisuus on välttämätön, koska neisseriat ovat hyvin vaativia mikro-organismeja ravitsemuksellisesta näkökulmasta, eivätkä ne siksi kasva yhteisissä tiedotusvälineissä.

Toisaalta, koska nämä mikro-organismit löytyvät normaalisti ei-steriileistä alueista, on välttämätöntä lisätä inhibiittoreita, jotka estävät mukana olevan kasviston kasvun vaikuttamatta Neisseria-suvun kehitykseen..

Tämä agar koostuu GC-emäksestä, hemoglobiinista, lisäravinteista ja inhiboivien aineiden kompleksista (antibiootit ja sienilääkkeet). Kaupalliset talot myyvät jokaisen täydennyksen erikseen.

Tähän väliaineeseen istutettava näyte riippuu haettavasta mikro-organismista. että Neisseria gonorrhoeae Ihanteelliset näytteet ovat emättimen ja virtsaputken eritteitä. Vaikka Neisseria meningitidis eniten käytettyjä näytteitä ovat CSF, nielu ja nenänihka.

indeksi

• 1 Säätiö
  • 1,1 GC-emäsagaria
  • 1.2 Hemoglobiini
  • 1.3 Rikastuslisä
  • 1.4 Inhibiittorit
• 2 Valmistelu
  • 2.1 Alkuperäinen Thayer Martin Agar
  • 2.2 Agar Thayer Martin muutettu
• 3 Käytä
• 4 Laadunvalvonta
• 5 Rajoitukset
• 6 Viitteet

perusta

Neisseriat ovat mikro-organismeja, jotka on luokiteltu tuskeiksi ja siksi niiden eristäminen on vaikeaa. Tästä syystä Thayer Martín on monimutkainen väline ja jokainen sen komponentti täyttää alla kuvatun toiminnon:

GC-ydinagari

GC-agar sisältää proteosipeptonia, maissitärkkelystä, natriumkloridia, dikaliumfosfaattia, monokaliumfosfaattia ja agar-agaria. Sen komponentit tarjoavat mikrobiologisen kehityksen kannalta tärkeimmät ravintoaineet, neutraloivat myrkyllisiä rasvahappoja, edistävät osmoottisen tasapainon säilymistä, määrittelevät pH: n ja tarjoavat kiinteän johdonmukaisuuden ympäristöön.

hemoglobiini

Hemoglobiini sisältää tekijöitä V ja X (nikotiiniamidideniinidinukleotidi NAD ja hemin). Siksi tässä ympäristössä myös Haemophilus-lajit kasvavat. Hemoglobiinia voidaan saada kaupallisesti dehydratoidussa muodossa tai tuoretta defibrinoitua naudan verta voidaan lisätä elatusaineeseen.

Rikastuslisä

Toisaalta Thayer-Martin-väliaineeseen on lisättävä rikastuslisä, koska perusagariin sisältyvät ravintoaineet eivät riitä Neisseria-suvun vaatimuksiin..

Yleisimmin käytetty rikastuslisä on nimeltään isovitalex. Se sisältää glutamiinia, adeniinia, NAD: a, kokarboksylaasia, guaniinia, ferriumnitraattia, p-aminobentsoehappoa, B12-vitamiinia, tiamiinia ja glukoosia. Kaikki nämä yhdisteet ovat välttämättömiä patogeenisen Neisserian kehittämiseksi.

estäjät

Koska se on erittäin ravitsevaa elatusainetta, estäjiä on käytettävä alueen tavanomaisen kasviston mikro-organismien kasvun estämiseksi ja siten Neisseria-suvun eristämisen edistämiseksi..

Inhibiittorikompleksi koostuu vankomysiinistä, kolistiinista ja nystatiinista. Vankomysiini estää grampositiivisten bakteerien kasvua, kolistiini estää gramnegatiivisten bakteerien, kuten Pseudomonasin ja joidenkin saprofyyttisten Neisserian, kehittymisen, ja nystatiini vaikuttaa hiivoihin Candida albicans.

Thayer Martin-agaria muutettiin kuitenkin; muutokset koostuivat trimetopriimin lisäämisestä, agarin määrän kasvusta ja ylimääräisen glukoosin lisäämisestä. Nämä muutokset paransivat merkittävästi EU: n lajien elpymistä Neisseria gonorrhoeae.

On huomattava, että trimetopriimi estää Proteus-suvun kasvua ja sen seurauksena muodostumista. Tässä mielessä antibiootit tarjoavat valikoivaa luonnetta Thayer Martinille.

valmistelu

Alkuperäinen Thayer Martin Agar

-GC Agar

Punnitaan 8,2 g kuivattua GC-väliainetta ja suspendoidaan 100 ml: aan. Sekoita ja keitetään 1 minuutin ajan, samalla sekoittaen, jotta se liukenee kokonaisuudessaan. Steriloidaan seos autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuuttia.

-2% hemoglobiinia

Suspendoidaan 2 g dehydratoitua hemoglobiinia 2 tai 3 ml: aan kuumaa tislattua vettä yhtenäisen seoksen muodostamiseksi. Lisää vähän vähän enemmän vettä 100 ml: n tilavuuden saavuttamiseksi. Suspensio on homogeeninen ennen sterilointia.

Steriloidaan autoklaavissa 15 minuuttia.

-Rikastuslisä

Liuotetaan kaupallinen tie samassa kaupallisessa talossa olevaan laimennusaineeseen. Sekoita hyvin. Käytettävän laimentimen määrä määritetään pakkauksen ohjeissa..

-Inhibition täydennys V.C.N (vankomysiini, kolistiini, nystatiini)

Liuotetaan injektiopullo kaupallisen talon toimittamaan laimennusaineeseen. Sekoita hyvin. Käytettävän laimentimen määrä määritetään pakkauksen ohjeissa..

-valmistettu

Jokaiselle 100 ml: lle GC-agaria suoritetaan seuraavasti:

Kun GC-agar lähtee autoklaavista, anna sen jäähtyä noin 50 ° C: n lämpötilaan ja lisää 2 ml valmistettua hemoglobiiniliuosta, 2 ml rikastuslisää (isobitalex tai britalex) ja 2 ml inhibitiolisää. Sekoita ja tarjoile steriileissä petrimaljoissa.

Anna jähmettää ja säilytä jääkaapissa, kunnes se on käytössä.

Valmistetun väliaineen väri on kirsikanpunainen. Väliaineen lopullinen pH on 7,2 ± 0,2

Muutettu Thayer Martin Agar

Punnitaan 8,2 g kuivattua GC-väliainetta ja suspendoidaan 100 ml: aan. Lisää 1 g agaria ja lisää 0,3 g glukoosia. Sekoita ja keitetään 1 minuutin ajan, samalla sekoittaen, jotta se liukenee kokonaisuudessaan. Steriloidaan seos autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuuttia.

Valmista hemoglobiini ja rikastuslisäaine edellä kuvatulla tavalla.

Käytetty inhibition lisäys on V.C.N.T (vankomysiini, kolistiini, nystatiini, trimetoprim).

-valmistettu

Toimi kuten on kuvattu alkuperäisessä Thayer Martin agarissa.

käyttö

Thayer Martinin agaria on karkaistu ennen näytteiden kylvämistä. Yleisimmin käytetyt näytteet ovat nielun eksudaatit, nenän eksudaatit, emättimen, virtsaputken ja / tai peräsuolen erittyminen ja CSF..

Käytä äskettäin otettuja näytteitä ja tee vahva inokulaatti agariin. Näytteet kylvetään suoraan materiaalin purkautumisella ja sitten pintakäsittelyn pinnalla.

Levyjä inkuboidaan 35 - 37 ° C: ssa 24 - 48 tuntia mikroaerofiilisessa purkissa (5% CO₂). Inkubointiajan päätyttyä levyt tutkitaan pienten, harmaiden ja joskus limakalvojen kaltaisten pesäkkeiden suhteen..

Suorita Gram ja vahvistavat biokemialliset testit epäilyttäville pesäkkeille.

Laadunvalvonta

Thayer Martin-agarin laadunvalvontaa varten voidaan käyttää seuraavia mikrobikantoja.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ja Neisseria meningitidis ATCC 13090; molemmissa kannoissa odotetaan tyydyttävää kehitystä.

Seuraavat kannat on myös sisällytettävä: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ja Candida albicans ATCC 10231. Kaikissa niissä odotetaan täydellistä tai osittaista inhibitiota tässä elatusaineessa.

rajoituksia

-On pidettävä mielessä, että bakteerit, jotka ovat resistenttejä käytetyille inhibiittoreille, voivat kasvaa väliaineessa..

-On olemassa kantoja Neisseria gonorrhoeae jotka voivat olla herkkiä käytetyn vankomysiinin pitoisuudelle. Tästä syystä on suositeltavaa käyttää rinnakkain isovitalexilla täydennettyä suklaagaria, mutta ilman estäjiä.

-On olemassa hiivoja, jotka ovat resistenttejä nystatiinille, jotka voivat kasvaa tässä elatusaineessa ja häiritä patogeenisten Neisseria, erityisesti gonokokkien eristämistä..

viittaukset

1. Valtekin diagnostiset laboratoriot. Agar Thayer-Martin.2016. Saatavilla: com
2. Laboratories Britania. Thayer Martin Modified Medium. 2010. Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
3. Wikipedia-avustajat. Thayer-Martin-agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 26. lokakuuta 2017, 16:33 UTC. Saatavilla osoitteessa: wikipedia.org4. Pääsy 28. helmikuuta 2019.
4. Laboratories Britania. GC-agar. 2010. Saatavilla osoitteessa: britanialab.com.
5. Laboratoriot BBL ™ keskipitkällä rikastuksella vahvoja mikro-organismeja varten. 1999. Saatavilla: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.