Agarin TCBS-pohja, valmistus ja käyttö



TCBS-agari on erittäin selektiivinen ja differentiaalinen kiinteä viljelyväliaine, jota käytetään erityisesti Vibrio-bakteerien eristämiseen ja viljelyyn Vibrio cholerae, V. vulnificus ja V. parahaemolyticus tärkeimpiä taudinaiheuttajia.

Lyhenne TCBS tarkoittaa tiosulfaatti- sitraattisappiharoosia. Tämä agar tunnetaan myös Vibriosin selektiivisenä väliaineena. Alkuperäinen kaava on luonut Nakanishi ja myöhemmin Kobayashi muutti.

Se koostuu hiivauutteesta, lihapeptonista, tripteiinistä, natriumsitraatista, natriumtiosulfaatista, härän sappistä, sakkaroosista, natriumkloridista, rautasitraatista, bromitymolisinisestä, tymolin sinistä ja agarista.

Tämä koostumus mahdollistaa Vibrio-lajien riittävän kehittymisen vedestä, ulosteista ja elintarvikenäytteistä; lukuun ottamatta Vibrio hollisae, joka ei kasva tällä välineellä. Lisäksi TCBS-väliaine kykenee estämään muiden mukana olevien bakteerien, erityisesti koliformien, kasvua.

Koska vakavia ruoansulatuskanavan ja suoliston ulkopuolisia ongelmia esiintyy joillakin Vibrio-suvun lajeilla, niiden diagnoosi on erittäin tärkeä. Ihminen on tarttunut pääasiassa raaka- tai aliravittujen merenelävien tai saastuneen veden kulutukseen, mutta myös haavojen tartunnan kautta.

Tämän vuoksi kliinisissä laboratorioissa tulisi olla TCBS-agaria nestemäisten ulostenäytteiden ulosteen viljelmien tutkimuksessa, erityisesti riisiveden ulkonäössä. Erityisesti jos potilas raportoi joutuneensa kosketuksiin meriveden kanssa tai käyttänyt mereneläviä tai kalaa.

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Valmistelu
  • 3 Käytä
  • 4 Seeded
  • 5 Rajoitus
  • 6 Laadunvalvonta
  • 7 Viitteet

perusta

Hiivauute, lihan peptonit ja tripteiini ovat tämän elatusaineen ravintoaine. TCBS-agari on kuitenkin epämiellyttävä väliaine useimmille bakteereille.

Sen suuri selektiivisyys saadaan lisäämällä natriumsitraattia ja härän sappia; molemmat ovat inhiboivia aineita, jotka myös antavat alustalle alkalisen pH: n, mikä rajoittaa mukana olevan kasviston kasvua ja edistää kasvun kasvua. V. cholerae, muiden lajien välillä. On huomattava, että Vibrio cholerae on hyvin herkkä närästykselle.

Natriumkloridi puolestaan ​​tasapainottaa osmoottisesti väliaineeseen. Lisäksi, koska sen konsentraatio on suuri, se toimii myös inhiboivana aineena, joka edistää halofiilisten bakteerien kasvua.

Sakkaroosi on fermentoitava sokeri, joka yhdessä bromitymolin ja tymolin sinisen pH-indikaattorien kanssa antaa väliaineelle erilaista merkkiä. Tästä syystä tällä tavoin on mahdollista erottaa sakkaroosin fermentointikannat fermentoimattomista kannoista.

Sakkaroosin fermentointikantojen pesäkkeet kehittävät keltaisen värin ja muuttavat elatusaineen vihreästä keltaiseksi happojen valmistuksen vuoksi. Ei-fermentorit kasvavat läpikuultaviksi ja väliaine pysyy alkuperäisenä värisenä (vihreä).

Samoin tämä väliaine sisältää natriumtiosulfaattia rikin ja ferri- sitraatin lähteenä paljastavana aineena. Molemmat osoittavat bakteereja, jotka kykenevät tuottamaan rikkivetyä (väritön kaasu). H2S muodostetaan tiosulfaatista ja myöhemmin reaktiolla ferri- sitraatin kanssa muodostuu näkyvää mustaa sakkaa.

Lopuksi agar on se, joka antaa alustalle kiinteän konsistenssin.

valmistelu

Punnitaan 89 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Auttaa liukenemista kuumentamalla ja usein sekoittaen. Seosta voidaan keittää 2 minuuttia.

Tämä väliaine ei autoklaavi. Liukenemisen jälkeen se annetaan suoraan steriileille levyille. Vahvistettaessa ne on järjestetty käänteisesti plakinvalmistajiin ja säilytetään jääkaapissa (2–8 ° C), kunnes niitä käytetään.

Väliaineen valmistuksen jälkeen tulisi olla pH 8,6 ± 0,2.

Dehydratoidun väliaineen väri on vaalea beige tai vihertävä-beige, ja elatusaineen väri on metsänvihreä tai sinertävä vihreä.

On tärkeää jättää levyt karkaisemaan ennen näytteiden kylvämistä.

käyttö

Yleisin näyte Vibriosin eristämiseksi on ripuli.

Stoolinäytteitä, jos niitä ei voida siemenellä välittömästi selektiiviselle alustalle, on kuljetettava Cary Blairin keskellä.

Viljelmän herkkyyden lisäämiseksi ulosteet voidaan kuljettaa peptoniveden läpi pH-arvossa 8,4 väkevöintiväliaineena enintään 8 tuntia, sieltä se subkultoidaan TCBS-alustaan..

On myös pidettävä mielessä, että jotkut Vibrios -kannat voivat aiheuttaa septikemiaa immunosuppressoiduilla potilailla, joten ne voidaan eristää veriviljelmistä. Samoin voidaan analysoida veden ja meren ruoasta otettuja näytteitä, kun on olemassa epidemiaepidemioita..

istutettu

Tutkittavan näytteen inokulaatin on oltava näkyvää, kylvö suoritetaan uupumuksella tapahtuvalla juoksutuksella. Levyjä inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 tuntia aerobioosissa.

Olennaiset pesäkkeet Vibrio cholerae Ne ovat keskikokoisia, sileitä, läpinäkymättömiä, ohuita reunoja ja keltaisia, koska ne fermentoivat sakkaroosia..

Samalla tavalla lajit V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii ja jotkut V. vulnificus. Muut Vibrioslajit ovat kliinisesti tärkeitä V. parahaemolyticus älä fermentoi sakkaroosia, joka kehittyy oliivinvihreinä pesäkkeinä.

Toisaalta meidän on pidettävä mielessä, että jotkin Aeromonas- ja Plesiomonas-kannat, jotka ovat oksidaasia (+), voivat kasvaa tässä kasvualustassa, jolloin syntyy keltaisia ​​pesäkkeitä, jotka voivat sekoittaa lääkärin. Vaikka jotkin Pseudomonas -kannat myös oksidaasi (+) kasvavat vihreinä pesäkkeinä sekä V. parahaemolyticus.

rajoitus

Vibrio-suvun positiivista oksidaasitestiä ei saa koskaan suorittaa TCBS-agarista saaduista pesäkkeistä, koska saatu tulos on väärä negatiivinen. Väliaineessa olevat yhdisteet häiritsevät voimakkaasti tässä testissä. Siksi se olisi tehtävä alaviljelmistä veren agarilla.

Laadunvalvonta

Todistamaan, että väliaine on hyvässä kunnossa, on suositeltavaa istuttaa tunnettuja tai sertifioituja kontrollikantoja ja tarkkailla, jos kasvu vastaa odotettuja ominaisuuksia.

Tätä varten kannat:

-Vibrio cholerae - Tyydyttävä kasvu (keltaiset pesäkkeet, läpikuultava raja).

-Vibrio parahaemolyticus - Tyydyttävä kasvu (siirtokunta, jossa on vihreä keskipiste ja läpikuultava raja).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tyydyttävä kasvu (keltaiset pesäkkeet, joissa on samanvärisiä halogeeneja pesäkkeen ympärillä).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - täydellinen tai osittainen esto (pienet keltaiset tai läpikuultavat pesäkkeet).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - osittainen tai täydellinen esto (siniset pesäkkeet).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Täysin estetty.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Täydellinen tai osittainen esto. (Pienet pesäkkeiden keskellä vihreä läpikuultava reuna).

Inokuloimattoman väliaineen inkubointi ei saisi muuttua.

viittaukset

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS-agari. 2009. Saatavilla osoitteessa: f-soria.es
  2. BD-laboratorio. BD. TCBS Agar 2003. Käytettävissä: bd.com
  3. Laboratories Britania. TCBS Medium. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS Agar. 2016. Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5th ed. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.