Soija-agarin tripticaseína-säätiö, valmistus ja käyttö

trypticasein-soija-agar tai tryptikaasi-soija-agar on kiinteä, ei-selektiivinen ja ravitseva elatusaine. Se on merkitty kirjaimilla TSA sen lyhenteeksi englanninkielisessä Trypticase Soy Agarissa. Se koostuu tripteiinistä, soijapeptonista, natriumkloridista ja agar-agarista.

Korkean ravintoarvonsa ansiosta se sopii kohtalaisen vaativien ja vaativien mikro-organismien viljelyyn. Väliaineita, joissa ei ole lisäravinteita, ei suositella ensisijaisille viljelmille, mutta se on erittäin hyödyllinen puhtaiden kantojen subkultisoimiseksi ja niiden elinkelpoisuuden säilyttämiseksi muiden käyttötarkoitusten joukossa..

Tämä agar toimii myös perustana rikastetun väliaineen, kuten veren agarin, valmistamiseksi, varsinkin kun se on tarpeen hemolyysin kuvioiden tarkkailemiseksi ja optoquinin ja bacitracinin taksonien kiinnittämiseksi, joita tarvitaan diagnoosin kannalta. Streptococcus pneumoniae ja Streptococcus pyogenes vastaavasti.

Toisaalta antibioottien kanssa yhdistettynä on hyödyllistä eristää kliinisiä merkityksiä sisältäviä kasvinsuojeluaineita ja anaerobisia mikro-organismeja sekoitetuista kasvistoista..

Lopuksi tripticasein-soija-agarin koostumus ja sen suorituskyky täyttävät eri farmakopean (eurooppalaiset, japanilaiset ja pohjoisamerikkalaiset) asettamat vaatimukset.

indeksi

• 1 Säätiö
• 2 Valmistelu
  • 2.1 Tripticasein-soija-agar-levyt
  • 2.2 Tripticasein-soija-agarlevyt, jotka on täydennetty verellä
  • 2.3 Tripticasein-soija-agarlevyt, joita on täydennetty kuumennetulla verellä
  • 2.4 Tripticaseine-soija-agarin kiilat
• 3 Käyttö
• 4 Seeded
• 5 Laadunvalvonta
  • 5.1 Steriiliyden hallinta
  • 5.2 Kasvun hallinta
  • 5.3 Veren kanssa täydennetyn tripticasein-soija-agarin kasvun ja hemolyysin mallin hallinta
• 6 Viitteet

perusta

Jotta bakteerit kehittyisivät asianmukaisesti, on välttämätöntä saada aikaan energiantuotanto, kuten aminohapot, vitamiinit, puriiniemäkset ja pyrimidi..

Tässä mielessä tripteiini ja soijapeptoni tarjoavat näitä ravinteita mikro-organismeille, mikä mahdollistaa niiden täydellisen kehittymisen. Vaativille bakteereille on kuitenkin tarpeen täydentää tätä agaria defibrinoidulla verellä tai kuumennetulla verellä sen rikastumisen lisäämiseksi.

Toisaalta, jos väliaineeseen lisätään antibiootteja, siitä tulee selektiivinen väliaine. Voit myös lisätä 0,6% hiivauutetta Listeria-sukuun kuuluvien lajien eristämisen edistämiseksi samalla kun lisäät kystiinituraattia ja Karitsan veri on ihanteellinen Corynebacterium diphteriae.

Lopuksi natriumkloridi antaa osmoottisen tasapainon väliaineelle ja agar antaa kiinteän konsistenssin.

valmistelu

Tripticasein-soija-agar-levyt

Trypticasein-soija-agarin valmistamiseksi 40 grammaa dehydratoitua kaupallista elatusainetta tulisi punnita digitaalisessa mittakaavassa. Liukenee litraan tislattua vettä fiolassa.

Seoksen annetaan seistä 5 minuuttia ja tuodaan sitten lämmönlähteeseen väliaineen liukenemiseen. Se on sekoitettava usein ja jätettävä kiehumaan 1 tai 2 minuutin ajan. Sen jälkeen väliaine steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuuttia.

Anna jäähtyä 50 ° C: seen ja jakaa steriileihin Petri-maljoihin. Anna jähmettyä, kääntää, tilata leikkureihin ja säilytä jääkaapissa.

Väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,3 ± 0,2.

On otettava huomioon, että kuivatun viljelyalustan väri on vaalea beige ja se on säilytettävä 10 - 35 ° C: ssa kuivassa paikassa.

Valmistettu agar on puolestaan ​​kevyt keltainen. Valmistetut levyt on säilytettävä jääkaapissa (2 - 8 ° C) käyttöön asti.

Levyjen on saavutettava huoneenlämpötila ennen käyttöä.

Tripticasein-soija-agar-levyt, jotka on täydennetty verellä

Verianagaani valmistetaan lisäämällä 5% defibrinoitua verta, kun jäähdytetään trypticasein-soija-agaria 50 ° C: ssa. Seos homogenoidaan kiertämällä hellävaraisilla liikkeillä.

Tarjoile steriileissä petrimaljoissa. Väliaineen värin tulisi olla kirsikanpunainen.

Tripticasein-soija-agarlevyt, joita on täydennetty kuumennetulla verellä

TSA-pohjaisen veriagarin valmistamiseksi edellä kuvatut menetelmät ovat samat, mutta autoklaavista poistuttaessa sen annetaan seistä, kunnes väliaineen lämpötila on noin 56 - 70 ° C. Tuolloin veri asetetaan ja sekoitetaan, kunnes väliaine muuttuu ruskeaksi.

Tarjoile steriileissä petrimaljoissa. Väliaineen väri on suklaanruskea.

Kiinnikkeet tripticaseine-soija-agarista

Agarin valmistusmenetelmä on sama kuin levyille kuvattu, sillä erolla, että sen sijaan, että annettaisiin väliaine Petri-maljoille, se jaetaan 10 - 12 ml: n välillä putkissa, joissa on Bakelite-kansi, ennen sterilointia..

Sen jälkeen putket autoklavoidaan 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poistuessaan he nojautuvat tuen avulla ja antavat itselleen mahdollisuuden jähmettyä.

Valmistetut kiilat kylvetään pinnalla ja ne pitävät yllä tiettyjä vaatimattomia elinkelpoisia mikro-organismeja määrätyn ajan.

sovellukset

Trypticasein-soija-agaria käytetään seuraavissa tapauksissa:

-Perusta valmistettaessa klassista veriagaria, jota käytetään rutiininomaisesti useimmissa laboratorioissa.

-Vaativien bakteerien eristäminen.

-Hemolyysin kuvion tarkkailu.

-Diagnostisten testien suorittaminen.

-Perustana erityisen veren agarin valmistamiseksi Corynebacterium diphteriae, telluurin kystiinin kanssa ja karitsan verta.

-Perustana lammasveren agarin valmistamiseksi enemmän kanamysiini-vankomysiiniä anaerobien kasvua varten, erityisesti Bacteroides sp.

-Vaatimattomien kantojen ylläpitoon (Bacterioteca).

-Mikrobiologinen aerobinen määrä mikrobien raja-arvotutkimuksessa veden, ympäristön, elintarvikkeiden ja kosmetiikan näytteistä.

istutettu

Näytteet voidaan istuttaa suoraan trypticasein-soija-agarin pinnalle, jota on täydennetty verellä tai muilla lisäaineilla. Se kylvetään uupumuksella.

Kolmiulotteisia soija-agar-levyjä, joissa ei ole lisäaineita, käytetään yleensä mikrobikantojen (bakteerien tai hiivan) subkultuuriin.

Laadunvalvonta

Steriliteetin säätö

Trypticasein-soija-agarilla valmistettujen eri väliaineiden steriiliyden tarkistamiseksi on suositeltavaa tehdä seuraavat seikat: jokaisesta valmistetusta erästä yksi tai kaksi levyä tai putkea tulisi inkuboida ilman inokulaatiota 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan steriiliyden osoittamiseksi. Kaikissa tapauksissa sen on pysyttävä ilman kasvua.

Jos saastuminen on havaittu, koko erä on hävitettävä.

Kasvun hallinta

Trypticasein-soija-agarin asianmukaisen toiminnan tutkimiseksi voidaan käyttää seuraavia bakteerikantoja: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 ja Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Kantoja kylvetään ja niitä inkuboidaan aerobioosissa 37 ° C: ssa 24 tuntia.

Kaikissa tapauksissa kasvun on oltava tyydyttävä.

Voit myös käyttää sieniä Complex-mallina Candida albicans ATCC 10231 ja Aspergillus niger ATCC 16404. Molemmille kannoille odotetaan hyvää kasvua.

Veren kanssa täydennetty tripticasein-soija-agarin kasvun säätely ja hemolyysi

Tällä emäksellä valmistetun veriagarin asianmukaisen toiminnan varmistamiseksi voidaan käyttää seuraavia kantoja: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ja Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Niitä kylvetään ja niitä inkuboidaan 37 ° C: ssa mikroaerofiilissa 24 tuntia.

Kaikissa tapauksissa kasvun on oltava tyydyttävä ottaen huomioon se vuonna 2006. \ T S. pyogenes beeta-hemolyysi (kirkas halo pesäkkeen ympärillä) ja molemmissa kannoissa S. pneumoniae alfa-hemolyysiä (vihertävä halo pesäkkeiden ympärillä) on noudatettava.

viittaukset

1. Wikipedia-avustajat. Tryptikaasi I on agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. joulukuuta 2018, 15:47 UTC. Saatavilla osoitteessa: https://en.wikipedia.org
2. Laboratories Britania. Tryteiini-soija-agari. 2015. Saatavilla: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Soijapapu. Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen.
5. BD Laboratories Trypticase I am Agar. 2014. Saatavilla osoitteessa: .bd.com