Agarin veripohja, käyttö ja valmistus

veri-agar se on rikastettu kiinteä väliaine, ero, mutta ei valikoiva. Sitä käytetään monien mikro-organismien talteenottoon ja kasvuun kliinisistä näytteistä tai subkultuureista.

Useimpien laboratoriossa vastaanotettujen kliinisten näytteiden kylvämiseen olisi sisällytettävä klassinen veri-agar; lukuun ottamatta ulostenäytteitä, jos se ei ole hyödyllinen, ellei sitä ole valmistettu tietyin muutoksin.

Tämä kasvualusta koostuu pohjimmiltaan rikastetusta emäsagarista ja 5% verestä. Agarin pohja voi vaihdella tarpeiden mukaan, mutta pääasiassa se koostuu peptoneista, aminohapoista, vitamiineista, lihauutteesta, natriumkloridista, agarista, mm..

Veren osalta sen on yleensä oltava kosketuksissa bioteriumin kanssa veren saamiseksi eläimistä, kuten lampaista, kanista tai hevosesta. Tämä ei kuitenkaan ole aina mahdollista, ja joskus käytetään ihmisen verta.

Veri-agar-elatusaine voidaan valmistaa laboratoriossa tai se voidaan ostaa valmiiksi yrityksille, jotka on omistettu sille. Tämän väliaineen valmistaminen on yksi herkimmistä, mikä tahansa huolimattomuus sen valmistuksessa johtaa saastuneeseen erään.

Tästä syystä on toteutettava kaikki mahdolliset varotoimenpiteet ja lopulta laadunvalvonta on tehtävä inkuboimalla 37 ° C: ssa 1 kilpi jokaista valmistettua 100: aa kohden..

indeksi

• 1 Säätiö
• 2 Käyttö
  • 2.1 Veriryhmän valinta
  • 2.2 Pohjaagarityypin valinta
  • 2.3 Verenagarin käyttö sen valmistukseen käytetyn perusaineen mukaan
• 3 Valmistelu
  • 3.1 Punnitaan ja liuotetaan
  • 3.2 Steriloi
  • 3.3 Veren aggregaatio
  • 3.4 Kaada Petri-astioihin
• 4 Viitteet

perusta

On jo mainittu, että veriagarilla on tunnusomaista, että se on rikastettu, differentiaalinen ja ei-selektiivinen väliaine. Kunkin näiden ominaisuuksien pohja on selitetty alla.

Veriagar on rikastettu väliaine, koska sillä on pääasiallisena lisäaineena 5 - 10% verta agar-emäksessä. Molemmat yhdisteet sisältävät monia ravintoaineita, ja tämä ominaisuus sallii suurimman osan viljeltävistä bakteereista kasvaa siinä.

Tämä kasvu tapahtuu ilman rajoituksia; tästä syystä se ei ole valikoiva. Kuitenkin, jos yhdisteitä lisätään tähän väliaineeseen, joka estää joidenkin mikro-organismien kasvua ja edistää muiden kasvua, se muuttuu selektiiviseksi. Näin on, jos lisätään tiettyjä antibiootteja tai sienilääkkeitä.

Samoin veri-agar on differentiaalinen väliaine, koska se mahdollistaa erilaisten 3 bakteerityyppien erottamisen: beeta-hemolyyttiset, alfa-hemolyyttiset ja gamma-hemolyyttiset..

Beeta-hemolyyttiset aineet ovat sellaisia, joilla on kyky hajottaa tai rikkoa punasoluja kokonaan, muodostaen kirkkaan halon pesäkkeiden ympärille, jolloin tuotetaan ß- tai β-hemolyysiä - hemolyysiä ja mikro-organismeja kutsutaan ß-hemolyyttiseksi.

Esimerkkejä ß-hemolyyttisistä bakteereista ovat Streptococcus pyogenes ja Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolyyttiset aineet ovat sellaisia, jotka suorittavat osittaisen hemolyysin, jossa hemoglobiini hapetetaan metemoglobiiniksi, jolloin muodostuu vihertävä väri pesäkkeiden ympärille. Tätä ilmiötä kutsutaan hemolyysi a tai a-hemolyysi ja bakteerit luokitellaan a-hemolyyttiseksi.

Esimerkki a-hemolyyttisistä bakteereista on Streptococcus pneumoniae ja Streptococcus ryhmä viridans.

Lopuksi on olemassa bakteereja, joita kutsutaan gamma-hemolyyttiseksi tai ei-hemolyyttiseksi. Nämä kasvavat agarilla tuottamatta muutoksia siihen, joka tunnetaan y-hemolyysinä, ja mikro-organismit ovat y-hemolyyttisiä.

Esimerkki y-hemolyyttisistä bakteereista: joitakin ryhmän D Streptococcus -kantoja (Streptococcus bovis ja Enterococcus faecalis).

sovellukset

Veren agar-kasvualusta on yksi mikrobiologian laboratoriossa yleisimmin käytetyistä.

Mikro-organismeista, jotka kykenevät kasvamaan veren agar-väliaineessa, ovat: tiukat, kasvulliset, mikroaerofiiliset, anaerobiset, grampositiiviset tai gramnegatiiviset aerobiset bakteerit, nopeasti kasvavat tai hitaasti kasvavat bakteerit.

Myös jotkut ravitsemuksellisesta näkökulmasta vaativat tai kiusalliset bakteerit sekä sienet ja hiivat kasvavat. Samoin on hyödyllistä subkultoida tai aktivoida uudelleen kantoja, jotka ovat hyvin heikosti metabolisia.

Veriryhmän ja emäksisen agarin valinta vaihtelee kuitenkin riippuen siitä todennäköisestä mikro-organismista, jota epäillään talteenotosta, ja plakin käyttöä (viljely tai antibio- logi)..

Veriryhmän valinta

Veri voi olla karitsan, kanin, hevosen tai ihmisen.

Suosituin on karitsan verta, joitakin poikkeuksia lukuun ottamatta. Esimerkiksi Haemophilus-lajin eristämiseksi, jossa suositeltava veri on hevonen tai kani, koska karitsan veressä on entsyymejä, jotka estävät tekijää V.

Vähiten suositeltava on ihminen, mutta se on eniten käytetty, ehkä siksi, että se on helpoin saada. 

Veri on defibrinoitava, saatu ilman minkäänlaisia ​​lisäaineita ja terveitä eläimiä. Ihmisveren käyttöön on otettava huomioon useita tekijöitä:

Jos veri on peräisin henkilöiltä, ​​jotka ovat kärsineet bakteeri-infektioista, niillä on erityisiä vasta-aineita. Näissä olosuhteissa joidenkin bakteerien kasvua estetään todennäköisesti.

Jos se saadaan veripankista, se sisältää sitraattia ja on mahdollista, että tietyt bakteerit eivät kehitty läsnäolonsa aikana. Toisaalta, jos veri tulee potilaista, jotka käyttävät antibiootteja, alttiiden bakteerien kasvua voidaan estää.

Ja jos veri on peräisin diabeettiselta henkilöltä, ylimääräinen glukoosi häiritsee hemolyysikuvioiden asianmukaista kehittymistä.

Pohjaagarityypin valinta

Veriagar-valmistuksessa käytetty emäsagar voi olla hyvin laaja. Näiden joukossa ovat: ravintoagar, aivojen sydämen infuusioagar, tryptikaasisyy-agar, Müeller Hinton-agar, Thayer Martin-agar, Columbia-agar, Brucella-agar, Campylobacter-agar jne..

Verenagarin käyttö sen valmistukseen käytetyn perusaineen mukaan

Ravintoagar

Tämä emäs on vähiten käytetty, koska se kasvaa pääasiassa ei-vaativia bakteereja, kuten suolistossa esiintyviä bakteereja, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, muun muassa. Streptococcusia ei ole suositeltavaa eristää.

Heart Brain -infuusioagar (BHI)

Se on yksi eniten käytetyistä veren agarin perusteista, koska sillä on tarvittavat ravintoaineet useimpien bakteerien kasvuun, mukaan lukien Streptococcus sp ja muut vaativat bakteerit. Vaikka ei ole tarkoituksenmukaista tarkkailla hemolyysin malleja.

Tämän emäksen kanssa käytetään yleensä karitsan verta.

Voidaan myös valmistaa veri-agar-variantteja, joihin lisätään muita yhdisteitä tiettyjen mikro-organismien eristämiseksi. Esimerkiksi aivojen sydäninfuusio-agar, jota on täydennetty kanin verellä, kystiinillä ja glukoosilla, toimii eristämään Francisella tularensis.

Kystiinin telluriitilla on hyödyllistä eristää Corynebacterium diphteriae. Voit käyttää ihmisen tai karitsan verta.

Ensimmäisellä beta-hemolyysi näyttää kapealta halolta, kun taas toisella halo on paljon laajempi.

Samoin tätä emästä yhdessä bacitracinin, maissitärkkelyksen, hevosen veren ja muiden rikastuslisien (IsoVitaleX) kanssa käytetään suvun eristämiseen Haemophilus sp hengityselimistä.

Jos lisäät antibioottien kloramfenikoli - gentamisiinin tai penisilliini - streptomysiinin yhdistelmää hevosen veren kanssa, se on ihanteellinen vaativien patogeenisten sienien eristämiseen jopa suuremmalla saannolla kuin Sabouraud - glukoosiagarilla. Se on erityisen hyödyllinen eristettäessä Histoplasma capsulatum.

Tryptive soija

Tämä pohja on suositeltavin hemolyysi-mallin ja diagnostisten testien, kuten optoquinin ja bacitracinin taksonien, paremman tarkkailun kannalta. Se on klassinen veri-agari, jota käytetään rutiininomaisesti.

Tämän pohjan avulla voit myös valmistaa erityistä veri-agaria Corynebacterium diphteriae, telluurin kystiinin kanssa ja karitsan verta.

Samoin tämän agarin ja karitsan veren sekä kanamysiini-vankomysiinin yhdistelmä on ihanteellinen anaerobien kasvuun, erityisesti Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Tätä verta täydennettynä pohjalla käytetään vaativien mikro-organismien, kuten Streptococcus sp.

Se on myös hyödyllinen sellaisten bakteerien eristämisessä Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Tämä väliaine on ihanteellinen pohja veren agarille, kun epäillään Neisseria-sukua Neisseria meningitidis, kuten N. gonorrhoeae ei kasva veren agarilla.

Se toimii myös herkkyystestien suorittamiseksi Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Tämä emäs sopii erinomaisesti mahan biopsioiden näytteiden kylvämiseen Helicobacter pylori.

Väliaine valmistetaan lisäämällä 7% lampaan verta, joka on defibrinoitu antibiooteilla (vankomysiini, trimetopriimi, amfoterisiini B ja kefulodiini) muiden tyyppisten bakteerien kasvun rajoittamiseksi.

Tämä sama emäs, jota on täydennetty ihmisen tai karitsan verellä, nalidiksiinihappo ja kolistiini, ovat käyttökelpoisia eristämiseen Gardnerella vaginalis. Se on myös ihanteellinen mikrobilääkeherkkyyden arvioimiseksi saman mikro-organismin antibiooteille.

Lisäksi sitä käytetään veren agarin valmistukseen anaerobien viljelyyn, aminoglykosidien ja vankomysiinin lisäämiseen..

Tämän pohjan avulla voimme tarkkailla hemolyysin kuvioita.

Brucella Agar

Tämä väliaine, jota käytetään veren agarin perustana yhdessä K-vitamiinin lisäämisen kanssa, on ihanteellinen anaerobisten bakteerien viljelyyn. Tässä tapauksessa suositellaan karitsan veren käyttöä.

Campylobacter-agari

Campylobacter Agar, jota on täydennetty 5% lampaiden verellä ja 5 antibiootilla (kefalotiini, amfoterisiini B, trimetopriimi, polymyksiini B ja vankomysiini), Campylobacter jejuni ulosteesta.

valmistelu

Jokainen kaupallinen talo tuo pakkauksen takaosaan ohjeet litran viljelyalustan valmistamiseksi. Vastaavat laskelmat voidaan tehdä halutun määrän valmistamiseksi valitun emäsagarin mukaan.

Punnitaan ja liuotetaan

Pohjaagara tulee dehydratoituun (jauheena), joten se on liuotettava tislattuun veteen, jonka pH on säädetty arvoon 7,3.

Valitun emäksisen agarin osoittama määrä punnitaan ja liuotetaan vastaavaan määrään vettä fiolassa, sitten kuumennetaan kohtuulliseen lämpöön ja sekoitetaan pyörivien liikkeiden kanssa, kunnes kaikki jauhe on liuennut..

steriloida

Kun se on liuotettu, steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 20 minuuttia.

Veren koko

Kun autoklaavista poistutaan, anna fiola jäähtyä, kunnes lämpötila värähtelee välillä 40 - 50 ° C; on lämpötila, jota ihmisen iho tukee, ja samalla agar ei ole vielä jähmettynyt.

Tätä varten fiola koskettaa kättä ja jos lämpö on siedettävä, on ihanteellinen lämpötila lisätä vastaava määrä defibrinoitua verta (50 ml / l agaria). Sekoita varovasti homogenisoimiseksi.

Veren aggregaatin kulku on ratkaisevan tärkeää, koska jos se tapahtuu, kun elatusaine on hyvin kuuma, punasolut häviävät ja väliaine ei toimi hemolyysin havaitsemiseksi.

Jos se lisätään liian kylmäksi, muodostuu muhkea ja alustan pinta ei ole sileä, jotta huilu saadaan kunnolla.

Kaada Petri-astioihin

Tarjoile steriileissä petrimaljoissa heti veren homogenisoinnin jälkeen. Kuhunkin Petri-maljaan kaadetaan noin 20 ml. Tämä toimenpide suoritetaan laminaarivirtaushupussa tai lähellä kevyempää.

Kun annostellaan veriagaria Petri-astioissa, ilman ilmakuplia ei saa jäädä levyn pinnalle. Jos näin käy, Bunsen-polttimen liekki siirtyy nopeasti levyn yli niiden poistamiseksi..

Levyjen annetaan jähmettyä ja säilytetään jääkaapissa (2 - 8 ° C) ylösalaisin, kunnes niitä käytetään. Ennen veren käyttöä agar-levyt on karkaistava (anna niiden ottaa huoneenlämpötila) kylvää.

Valmistetut levyt kestävät noin 1 viikon.

viittaukset

1. Bayona M. Mikrobiologiset olosuhteet viljelylle. \ T Helicobacter pylori. Ilmoitus Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA-julkaisupalvelu.
3. "Agarin veri." Wikipedia, vapaa tietosanakirja. 10.12.2018, 14:55 UTC. 27. joulukuuta 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen.
5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Saatavilla osoitteessa: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, toimittaja Panamericana S.A..