Agar Salmonella-Shigellan perusta, valmistus ja käyttö



Salmonella-Shigella-agar tunnetaan myös nimellä SS-agari, on keskipitkän selektiivinen ja differentiaalinen väliaine, joka on erityisesti suunniteltu Salmonella- ja Shigella-suvun enteropatogeenisten bakteerien eristämiseen sekä ympäristö- että kliinisistä näytteistä..

SS-agarilla on monimutkainen koostumus; Se koostuu lihauutteesta, peptonista, laktoosista, sappisuoloista, natriumsitraatista, natriumtiosulfaatista, rautasitraatista, agarista, neutraalista punaisesta, kirkkaan vihreästä ja tislatusta vedestä. Suuren valikoivuuden vuoksi on mahdollista istuttaa näytteitä runsaalla sekoitetulla kasvistolla.

Mikrobiologian laboratorioissa Salmonella-Shigella-elatusainetta käytetään laajasti salmonellan ja shigellan läsnäolon tutkimiseen ripuli-ulosteiden, jäteveden, juomaveden ja elintarvikkeiden näytteissä.

Joskus on tarpeen käyttää rikastusliuoksia (laktoosiliemi) ja rikastusta (seleniitti kystiiniliemi) salmonellakantojen talteenottamiseksi.

Nämä vaiheet ovat välttämättömiä, kun salmonellan olemassaolosta epäillään hyvin vähäistä määrää tai jos kantaa voidaan hoitaa huonosti teollisuustuotannolle tyypillisin menetelmin, pääasiassa jalostettuihin elintarvikkeisiin. On myös suositeltavaa rikastuttaa ulostenäytteitä potilaista, joita on hoidettu antibiooteilla.

Tämän jälkeen rikastettu liemi voidaan kylvää Salmonella-Shigella-agariin ja muihin vastaaviin väliaineisiin, kuten ksyloosiagariin, deoksisiloksaani-lysiiniin (XLD) ja suolistoon Hektoen-agariin (HE)..

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Ravitsemusvoima
    • 1.2 Johdonmukaisuus
    • 1.3 Valikoiva
    • 1.4
  • 2 Valmistelu
  • 3 Käytä
  • 4 Rajoitukset
  • 5 Laadunvalvonta
  • 6 Viitteet

perusta

Salmonella-Shigella-viljelyalustan jokaisella komponentilla on erityinen tehtävä, ja seos kokonaisuutena antaa sille ominaisuuksia, jotka sitä kuvaavat..

Ravitseva voima

Lihauutteessa ja peptonissa (pilkottu kaseiini ja eläinkudos) saadaan tarvittavat ravinteet (nitrogeenit, hiili ja vitamiinit) mikro-organismien kehittämiseksi, jotka kykenevät sietämään muita komponentteja.

johdonmukaisuus

Agar-agari on vastuussa kiinteän konsistenssin aikaansaamisesta väliaineelle.

valikoiva

Tämä väliaine on erittäin selektiivinen, koska se sisältää sappisuoloja, natriumsitraattia ja kirkasta vihreää. Siksi se estää kaikkien grampositiivisten bakteerien ja useimpien gram-negatiivisten bakteerien kasvun, mukaan lukien jotkut koliformit.

Salmonella-suvun bakteerit ja jotkin Shigellan kannat tukevat näitä yhdisteitä.

Pääasiassa Salmonella-suku on erittäin vastustuskykyinen sappisuoloille niin paljon, että ne pystyvät elämään joidenkin kantajien potilaiden sappirakossa, jotka poistavat bakteerit jatkuvasti ulosteiden kautta.

ero

Laktoosi on fermentoituva hiilihydraatti, joka auttaa erottamaan laktoosin fermentointikannat ei-fermentoivista kannoista. Tätä ominaisuutta osoittaa pH-indikaattorin läsnäolo, joka tässä elatusaineessa on fenolipunainen.

Laktoosin fermentointikannat antavat punaisia ​​pesäkkeitä, kun taas ei-fermentointikannat ovat värittömiä. Tämä ominaisuus on tärkeä, koska Salmonella ja Shigella eivät fermentoi laktoosia.

Toisaalta tämä elatusaine sisältää natriumtiosulfaattia rikki- ja rautasitraatin lähteenä. Molemmat yhdisteet pystyvät erottamaan bakteerit, jotka kykenevät tuottamaan vety- sulfidia. Nämä reaktiot muodostavat mustan sakan, joka sisältää liukenematonta ja näkyvää rautasulfidia.

Tässä ominaisuudessa on joitakin Salmonella-suvun kantoja. Tavallisesti niiden pesäkkeet ovat värittömiä tasaisia, ja sen keskellä on musta piste. Muut salmonellat eivät tuota H2S ja kehittyvät värittöminä pesäkkeinä.

Toisaalta Shigellan suvun pesäkkeet ovat värittömiä, ilman mustumista.

valmistelu

Tämä tarkoittaa hyvin yksinkertaista valmistaa.

Punnitaan 63 grammaa kuivattua kaupallista elatusainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Kuumenna liuos ja sekoita. Seos voi kiehua jopa minuutteja.

Tämän väliaineen ei pitäisi olla autoklaavissa. Liukenemisen jälkeen se annetaan suoraan yksittäisille tai kaksoissteriileille levyille.

Vahvistettaessa ne on järjestetty käänteisesti plakinvalmistajiin ja säilytetään jääkaapissa (2–8 ° C), kunnes niitä käytetään.

Väliaineen valmistuksen jälkeen tulisi olla pH 7,2 ± 0,2 ja oranssinpunainen.

On tärkeää, että levyt lämmitetään ennen näytteiden kylvämistä. Voit suoraan siemenet alkuperäisen näytteen, tyhjentää materiaalia agarin osaan ja sitten sieltä poispäin.

Jos käytät rikastettuja liemiä, siirrä osa seleeni- liemestä ja kylvetään drigalski-lastalla..

Inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 tuntia aerobioosissa.

Muista, että punnittavien grammojen määrä ja väliaineen lopullinen pH voivat vaihdella kaupallisessa talossa. Väliaineen pohjalevy tuo aina sen valmistuksen merkit.

käyttö

Sitä käytetään usein ulosteenkulttuurien analysointiin ja jäännösvesinäytteiden, juomaveden ja ruoan mikrobiologiseen tutkimukseen.

Usein valmistetaan kaksinkertaiset levyt, toisella puolella Salmonella-Shigella-agar ja toiselle puolelle XLD-agaria..

rajoituksia

-Jotkut Shigellan kannat eivät kasva tässä kasvualustassa. Siksi sitä ei suositella tämän suvun ensisijaiselle eristämiselle.

-Ei jokainen selkeä siirtokunta, jossa on musta keskus, osoittaa Salmonellaa; biokemialliset testit on tehtävä oikean tunnistuksen tekemiseksi, koska joidenkin Proteus-kantojen pesäkkeet ovat erottamattomia Salmonellan kantojen kanssa..

-Dehydratoidun väliaineen tulisi olla varovainen ympäristölle altistumisen suhteen, koska se on hyvin hygroskooppinen. Siksi se on säilytettävä kuivassa ja hyvin suljetussa ympäristössä. Avoinna hyvin lyhyeksi ajaksi.

-Ajan kuluessa sappisuolat väliaineessa voivat saostua, jolloin muodostuu samankaltainen kuva kuin agarissa, mutta tämä ei vaikuta tuloksiin.

-Jotkut Shigellan kannat voivat hitaasti fermentoida laktoosia.

Laadunvalvonta

Todistamaan, että väliaine toimii oikein, on suositeltavaa istuttaa tunnettuja tai sertifioituja kontrollikantoja ja tarkkailla, jos kasvu vastaa odotettuja ominaisuuksia.

Tätä tarkoitusta varten E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium tai Enterococcus faecalis.

Odotetut tulokset ovat:

Escherichia coli --vaaleanpunaiset kupera pesäkkeet.

Enterobacter ja Klebsiella- suuret pesäkkeet ja punainen tai vaaleanpunainen limakalvo.

Shigella flexneri --kirkkaat tai värittömät tasaiset pesäkkeet.

Salmonella typhimurium - värittömiä pesäkkeitä mustalla keskellä.

Enterococcus faecalis-- täydellinen esto.

viittaukset

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella-agar. 2009. Saatavilla osoitteessa: f-soria.es
  2. BD-laboratorio. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  3. Laboratories Britania. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  4. Valtekin diagnostiikka. Salmonella-shigella-agar (SS-agar) .2010. Saatavilla osoitteessa: andinamedica.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5th ed. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.