Agar-suolan ja manitolin perusta, valmistus ja käyttö

suolan agar ja mannitoli tai suolainen mannitoli on kiinteä, selektiivinen ja differentiaalinen kasvualusta. Chapman loi sen erityisesti patogeenisen grampositiivisen kookin eristämiseksi Staphylococcus aureus.

On kuitenkin myös hyödyllistä eristää Staphylococcus epidermidis, joka voi joskus esiintyä opportunistisena patogeeninä ja Staphylococcus saprophyticus, muiden virallisten patogeenien joukossa.

Jotkut Enterococcus -bakteerit pystyvät kasvamaan tässä kasvualustassa samoin kuin tietyt Gram-positiiviset itiöitä muodostavat bakteerit.

Tämä väliaine on erittäin hyödyllinen kliinisten näytteiden analysoinnissa, mutta sitä käytetään myös elintarvikkeiden mikrobiologisessa tutkimuksessa ja muun muassa teollisuustuotteiden, kuten kosmetiikan, lääkkeiden laadunvalvonnassa..

Suolattu mannitoli-agari koostuu naudanlihan, tripteiinin, mannitolin, natriumkloridin, fenolipunan ja agarin uutteista ja peptoneista..

indeksi

• 1 Säätiö
• 2 Valmistelu
• 3 Käyttö
• 4 Laadunvalvonta
• 5 Lopulliset näkökohdat
• 6 Viitteet

perusta

Mannitoli-agar on selektiivinen, koska sen suolapitoisuus on suuri. Suolapitoisuus toimii inhiboivana aineena ja estää gramnegatiivisten bakteerien kasvun.

Se on myös ero johtuen mannitolihiilihydraattien ja fenolipunaisen pH-indikaattorin läsnäolosta. Tästä aiheutuvat mannitolin fermentoimiseksi kykenevät bakteerit tuottavat happoja, happamoittavat elatusainetta, muuttavat pesäkkeet ja keskikeltaisen.

Toisaalta pesäkkeet, jotka eivät fermentoi mannitolia, kasvavat väliaineessa ottamalla lihan ja tripteinan uutteiden ja peptonien aikaansaamat ravintoaineet. Sieltä bakteerit uuttavat niiden kasvun kannalta välttämättömän hiilen, typen, vitamiinien ja mineraalien.

Tässä tapauksessa pesäkkeet voivat olla heikkoja tai voimakkaita vaaleanpunaisia, ja väliaine pysyy samana värisenä tai muuttuu fuksiaan.

Agar on aine, joka antaa konsistenssin väliaineelle.

valmistelu

Yhden litran suolatun mannitoli-agarin valmistamiseksi 111 g kaupallisen etusijatilan dehydratoitua väliainetta punnitaan ja liuotetaan 1000 ml: aan tislattua vettä, käyttäen fiola-ainetta..

Lämpö johdetaan poistamalla väliaine usein liukenemisprosessin parantamiseksi. Anna sen kiehua minuutin ajan.

Aseta fiola autoklaaviin 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Ajan päätyttyä fiola otetaan pois autoklaavista, annetaan seistä ja se on 15 - 20 ml steriileille petri-astioille, kun lämpötila on noin 50 - 55 ° C.

Sen annetaan jähmettyä, tilata käänteisessä muodossa ja säilyttää jääkaapissa sen käyttötarkoitukseen saakka. Ennen näytteen istuttamista sinun täytyy odottaa, että levy ottaa ympäristön lämpötilan.

Levyt kylvetään juoksutuksella tai kylvämällä pintaan drigalski-lastalla. Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,4 ± 0,2

Dehydratoidun väliaineen väri on vaalea beige ja valmistetun väliaineen väri on oranssi punainen.

sovellukset

Suuren selektiivisyytensä ansiosta tämä väliaine sopii erinomaisesti istutettaessa näytteitä sekoitetulla kasvistolla, jossa halutaan etsiä läsnäoloa Staphylococcus aureus, tämän suvun pääasiallisena patogeeninä.

Tässä mielessä yksi sen yleisimmistä käyttötavoista on nielun eksudaattien näytteiden ja nenän purkauksen mikrobiologinen analyysi, erityisesti havaitsemaan oireettomia kantajia. S. aureus.

Jotkin maat ovat panneet tämän analyysin täytäntöön pakollisena vaatimuksena niille, jotka haluavat työskennellä elintarviketoimittajina.

Tämä ohjaus estää sellaisten henkilöiden palkkaamisen, jotka ovat S. aureus, näin vältetään massiivinen ruokamyrkytys, staphylococcus-enterotoksiinilla saastuneiden elintarvikkeiden kulutuksesta.

Se voidaan myös sisällyttää muun muassa haavainfektioiden, veriviljelmien, CSF: n, keuhkoputkilohkareiden huuhteluun..

Suolattu mannitoli-agari on käyttökelpoinen uudestaan ​​eristämään virtsakulttuurien pesäkkeitä CLED-agarista tai veriagarista, jonka gramma on paljastanut Gram-positiivisia kokkeja klustereissa.

Se on myös voimassa elintarvikkeiden, juomaveden, maaperän ja muiden sovellusten mikrobiologisessa analyysissä.

Laadunvalvonta

Kun levyt on valmistettu suolatulla mannitoli-agarilla, on suositeltavaa suorittaa laadunvalvonta. Ohjauskannat kylvetään osoittamaan, onko kasvua vai ei.

Positiivisena kontrollina tunnetaan Staphylococcus aureus. Sen täytyy kasvaa tyydyttävästi kehittämällä keltaisia ​​pesäkkeitä, ja väliaineesta tulee myös sama väri.

Samoin on kätevää sisällyttää tunnettu kanta Staphylococcus epidermidis. Sen täytyy kasvaa tyydyttävästi kehittämällä vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä, ja väliaine pysyy samana värisenä tai tummenee vahvemmalla vaaleanpunaisella.

Negatiivisena kontrollina käytetään kantoja, joiden ei pitäisi kasvaa tässä elatusaineessa. Voit esimerkiksi istuttaa tunnetun kannan Escherichia coli tai Klebsiella pneumoniae. Odotettu tulos on täydellinen esto eli ei kasvua.

Lisäksi levyä ilman inokulaatiota tulisi inkuboida. Siinä ei pitäisi olla kasvua, värien muutosta.

On tärkeää, että levyä ei käytetä, jos on olemassa viitteitä muun muassa saastumisesta, nestehukkauksesta, värinmuutoksesta..

Lopulliset näkökohdat

Suolatun mannitoli-agar-väliaineen käytössä on otettava huomioon joitakin tärkeitä näkökohtia:

-Keltaisten pesäkkeiden kasvun saaminen ei osoita, että se on Staphylococcus aureus. On muistettava, että jotkut Enterococcus-kannat voivat kasvaa tässä elatusaineessa ja fermentoida mannitolia sekä tiettyjä grampositiivisia itiöitä muodostavia bakteereja..

Siksi on tärkeää suorittaa Gram kolooniaan ja katalaasitestiin.

-Toisaalta on katsottava, että muut Staphylococcus-lajit poikkeavat aureus Ne pystyvät myös fermentoimaan mannitolia. Siksi on tärkeää siirtää pesäkkeitä aliviljelyksi ravinneliemeen, joka sieltä otetaan ja suorittaa koagulaasitesti.

Mannitolia fermentoivan ihmisen Staphylococcus-lajin joukossa ovat: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, muun muassa.

Toiset voivat antaa vaihtelevan reaktion, toisin sanoen joskus positiivisen ja joskus negatiivisen. Jotkut ovat S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, muun muassa.

-Ei ole suositeltavaa ottaa pesäkkeitä suoraan mannitoli-agarista koagulaasitestin suorittamiseksi, koska väliaineen korkea suolapitoisuus voi häiritä tulosta.

-Lopuksi on suositeltavaa inkuboida suoloja, jotka on istutettu suolaisen mannitolin kanssa, jopa 48 tunnin ajan, koska jotkut kanto- S. aureus Ne voivat käydä mannitolia hitaasti, vaikka tämä ei ole kovin yleistä.

viittaukset

1. Laboratories Britania. Mannitolisuolainen agar. 2015. Saatavilla: britanialab.com
2. "Suolattu mannitoli-agar". Wikipedia, vapaa tietosanakirja. 31. lokakuuta 2018, 19:08 UTC. 17. tammikuuta 2019, 20:55, saatavilla osoitteesta: en.wikipedia.org.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, toimittaja Panamericana S.A..
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen
5. BD Laboratories BD Mannitol Salt Agar. 2013. Saatavilla osoitteessa: bd.com.