Agar Sabouraudin säätiö, valmistelu ja käyttö



Sabouraud-agari, Se tunnetaan myös nimellä Sabouraud-dekstroosiagar, se on kiinteä viljelyväliaine, joka on erityisesti rikastettu sienien eristämiseksi ja kehittämiseksi, kuten hiivat, muotit ja dermatofyytit..

Siksi tätä keinoa ei voida puuttua mikrobiologian laboratoriossa patogeenisten tai opportunististen sienten esiintymisen tutkimiseksi joko kliinisistä tai ei-kliinisistä näytteistä. Samoin se on myös ihanteellinen filamenttien bakteerien, kuten Streptomycesin ja Nocardian, kasvulle. Sen käyttö on hyvin laajaa, sitä voidaan käyttää ihmisten, eläinten, kasvien ja teollisuuden mykologiassa.

Tämän median loi vuonna 1896 tunnettu ihotautilääkäri Raimond Sabouraud, joka tuli maailman tunnetuksi päänahan sairauksien asiantuntijaksi, pääasiassa dermatofyyttien aiheuttamaksi..

Sen luominen oli niin tärkeää, että sitä on käytetty sen jälkeen, ja se jatkuu tänään, vaikkakin muutamalla.

Vaikka se on erityistä sienille, tässä kasvualustassa bakteerit voivat kasvaa, joten sekoitetuilla kasvistoilla varustettujen näytteiden osalta on välttämätöntä sisällyttää antibiootit niiden valmistukseen ja siten estää bakteeriflooran kasvua, joka saattaa esiintyä.

Antibiootin valinta on tehtävä huolellisesti ja ottaen huomioon sen, millaista sientä haluat palauttaa, koska jotkut ovat estyneitä tiettyjen aineiden läsnä ollessa.

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Useimmat Sabouraud-dekstroosiagarin ja antibioottien yhdistelmät
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 Dextrose Sabouraud Agar 
    • 2.2 Sabouraud-dekstroosiagar (muutosten muuttaminen)
    • 2.3 Sabouraud-dekstroosiagar (muutos Emmons) klooramfenikolilla
    • 2.4 Dekstroosi Sabouraud Emmonin agar, jossa on sykloheksimidiä
    • 2.5 Dekstroosi Sabouraud-agari (Emmons), jossa on kloramfenikolia ja sykloheksimidiä
    • 2.6 Muut antibiootit, joita voidaan lisätä
  • 3 Erityiset näkökohdat
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Käyttö
    • 5.1 Ensisijainen viljely
    • 5.2 Sporulaatio
    • 5.3 Säilytys
    • 5.4 Mikrokulttuurit
    • 5.5 Ihmisen mikologiassa
    • 5.6 Eläinten mikologia
    • 5.7 Ympäristön mykologia
    • 5.8 Teollisuuden mikologia
    • 5.9 Kasvimikologia
  • 6 Viitteet

perusta

Sabouraud-dekstroosiagar on väliaine, joka sen alkuperäisessä formulaatiossa on heikosti selektiivinen, koska se on hapan pH-arvonsa 5,6 ± 0,2, mutta bakteerit voivat kuitenkin kehittyä, lähinnä pitkäkestoisissa inkubaatioissa.

Väliaine sisältää kaseiinipeptonia ja haiman digestoitua eläinkudosta, jotka tuottavat hiilen ja typen lähteen mikro-organismien kehittämiseksi..

Se sisältää myös suuren glukoosipitoisuuden, joka toimii energialähteenä ja joka edistää sienien kasvua bakteereihin nähden. Kaikki sekoitetaan agar-agariin, joka on oikea johdonmukaisuus.

Toisaalta Sabouraud-dekstroosiagar voi olla valikoiva, jos lisätään antibiootteja.

Antibioottien kanssa se on erityisen käyttökelpoinen haavanäytteissä, avoimissa haavoissa tai missä tahansa näytteessä, jossa epäillään suurta bakteerien saastumista..

Useimmat Sabouraud-dekstroosiagarin yhdistelmät antibioottien kanssa

-Sabouraud-agar klooramfenikolilla: ihanteellinen hiivojen ja rihmasienien talteenottoon.

-Sabouraud-agari, jossa on gentamysiiniä ja kloramfenikolia: tällä kasvualustalla kasvaa lähes kaikki rihmasienet ja hiiva, ja se estää suuren määrän bakteereja, mukaan lukien Enterobakteerit, Pseudomonas ja Staphylococcus.

-Sabouraud-agar sykloheksimidillä: se on erityisen hyödyllinen ihon tai hengitysteiden näytteille, kunhan epäily on dimorfisia sieniä.

Sykloheksimidiä tulisi käyttää varoen; Vaikka sitä käytetään estämään ei-patogeenisten tai ympäristösienien ja hiivojen kasvua, jotka voivat olla läsnä epäpuhtauksina näytteessä, se myös estää joidenkin sienien, kuten Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp ja muita opportunistisia sieniä.

-Sabouraud-agaria kloramfenikolilla ja sykloheksimidillä: käytetään pääasiassa dimorfisten dermatofyyttien ja sienien eristämiseen. Sen haittana on se, että se estää jotkin opportunististen sienien lajit Candida ei albicans, Aspergillus, Zygomycetes tai C. neoformans.

-Sabouraud-agar, jossa on kloramfenikolia, streptomysiiniä, penisilliiniä G ja sykloheksimidiä: se on ihanteellinen näytteille, jotka ovat erittäin saastuneita bakteereilla ja saprofyyttisillä sienillä, mutta sillä on se haittapuoli, että se estää kasvun. Actinomyces ja Nocardias, edellä mainittujen opportunististen sienien lisäksi.

valmistelu

Jos sinulla on ainekset erikseen, voit valmistaa sen seuraavalla tavalla:

Dekstroosiagar Sabouraud 

Regret:

- 40 g dekstroosia

- 10 g peptonia

- 15 g agar-agaria

- Mittaa 1000 ml tislattua vettä

Kaikki aineosat sekoitetaan, pH säädetään arvoon 5,6. Liuotetaan liuokset keittämällä, jaetaan 20 ml väliainetta 25 x 150 mm: n putkiin, ilman laippaa ja puuvillalevy edullisesti..

Muita putkikokoja voidaan käyttää myös saatavuudesta riippuen.

Niitä autoklavoidaan 10 minuuttia paineilmakehässä (121 ° C). Älä ylitä autoklaavitusaikaa. Kun autoklaavista poistutaan, putket kallistetaan tuella, kunnes ne kiinteytyvät huilun huipussa..

Toinen tapa on liuottaa ainesosat lämmittämällä, kunnes se kiehuu. Samassa autoklaavissa 10 minuuttia ja sitten jaetaan 20 ml Petri-astioihin.

Jos käytettävissä on Sabouraud-dekstroosiagariväliaine, joka sisältää jo kaikki ainesosat, punnitaan kaupallisen talon määrittämä määrä yhdelle litralle vettä. Loput vaiheet ovat samat kuin edellä kuvatut.

Dekstroosiagar Sabouraud (muutos Emmons)

Regret:

-  20 g dekstroosia

- 10 g peptonia

-  17 g agar-agaria

-  Mittaa 1000 ml tislattua vettä

Kaikki ainesosat sekoitetaan, pH säädetään arvoon 6,9. Jatka samalla tavalla kuin edellisessä tapauksessa.

On kaupallisia taloja, jotka tarjoavat keskipitkän kaikki ainesosat. Tällöin punnitaan ja valmistetaan lisäyksessä kuvatulla tavalla.

Sabouraud-dekstroosiagar (muutos Emmons) klooramfenikolilla

Kloramfenikolivarastoliuos

- Punnitaan 500 mg kloramfenikolipohjaa

- Mittaa 100 ml 95-prosenttista etanolia

- sekoittaa

Sabouraud-dekstroosiagarialusta (Emmons) valmistetaan edellä kuvatulla tavalla ja lisäksi kutakin litraa kohti lisätään 10 ml kloramfenikolivarastoliuosta ennen autoklavointia..

Dekstroosiagar Sabouraud Emmons sykloheksimidillä

Sykloheksimidivarastoliuos

- Punnitaan 5 g sykloheksimidiä

- Mittaa 100 ml asetonia

- sekoittaa

Sabouraud-dekstroosiagariväliaine (Emmons) valmistetaan kuten on jo kuvattu, ja lisäksi kutakin liuosta kohti lisätään 10 ml sykloheksimidivarastoliuosta ennen autoklavointia.

Sabouraud-dekstroosiagar (Emmons) kloramfenikolin ja sykloheksimidin kanssa

Sabouraud-dekstroosiagariväliaine (Emmons) valmistetaan edellä kuvatulla tavalla ja lisäksi kutakin liuosta varten lisätään 10 ml kloramfenikolivarastoliuosta ja 10 ml sykloheksimidivarastoliuosta ennen autoklaavia.

Muut antibiootit, joita voidaan lisätä

20 000 - 60 000 yksikköä penisilliiniä litraa kohti.

30 mg streptomysiiniä litraa kohti.

Molemmat tulisi sisällyttää väliaineen autoklaavissa, hieman jäähdytettynä (50-55 ° C).

0,04 g neomysiiniä litrassa väliainetta.

0,04 g gentamisiinia litrassa väliainetta.

Erityiset näkökohdat

Turvallisuuden kannalta on edullista istuttaa Sabouraud-dekstroosiagaria kiilamuotoisiin putkiin (kallistettu huilun huippuun) eikä Petri-astioihin, jotta vältetään itiöiden hajoaminen ja hengittäminen..

On tärkeää, että Sabouraud-agarilla varustetut putket peitetään puuvillalla eikä ruuvilla, koska on osoitettu, että semianaerobiset olosuhteet estävät itiöiden muodostumista joissakin kannoissa. Coccidioides immitis. Lisäksi useimmat sienet ovat aerobisia.

Älä käytä tiiviisti, jos käytät ruuvikorkkia.

Laadunvalvonta

Valmistusmateriaalilla on oltava laadunvalvonta niiden oikean toiminnan varmistamiseksi. Tätä varten kylvetään tiettyjä kontrollikantoja.

Sabouraud-dekstroosiagaria voidaan käyttää kloramfenikoli-ATCC-kannoilla. Candida albicans, jonka on oltava erinomainen kasvu. Toinen levy siirrostetaan kantoihin Escherichia coli, on estettävä kokonaan.

Inokuloimaton levy inkuboidaan, jossa mikään mikro-organismi ei saa kasvaa.

Sabouraud-dekstroosiagaria, jossa on kloramfenikolia ja sykloheksimidiä, voidaan käyttää  Trichophyton mentagrophytes, täytyy kehittyä hyvin. Toista levyä siirrostetaan Aspergillus flavus, kasvua tai kasvua ei ole. Lisäksi inkuboimaton levy inkuboidaan sen steriiliyden osoittamiseksi.

Sabouraud - dekstroosiagarille, jossa on sykloheksimidiä,. \ T Candida albicans, Trichophyton rubrum  tai Microsporum canis, jonka pitäisi osoittaa hyvää kasvua.

Samoin Aspergillus flavus, kasvua tai kasvua ei ole. Inkuboidaan lopuksi käsittelemätöntä levyä steriilisyyden säätämiseksi.

sovellukset

Ensisijainen viljely

Classic Sabouraud -dekstroosiagar sisältää 4 grammaa dekstroosia ja on erinomainen ensisijainen eristysväliaine, koska se osoittaa kunkin sienen tyypillisen morfologian.

Se on myös erinomainen osoittamaan pigmenttien tuotantoa. Se ei kuitenkaan ole sopivin keino havaita sporulaatiota.

Sitä ei myöskään suositella kasvaa Blastomyces dermatitidis, joka on estetty läsnä olevan suuren glukoosipitoisuuden vuoksi.

Toisaalta viljelyssä on pidettävä mielessä tietyt näkökohdat.

Jotkut sienet kehittyvät paremmin huoneenlämpötilassa, kuten muotit, toiset kehittyvät onnistuneesti 37 ° C: ssa, kuten jotkut hiivat, ja muut voivat kehittyä molemmissa lämpötiloissa (dimorfiset sienet).

Tästä syystä on joskus tarpeen käyttää useita Sabouraud-agarilevyjä samalle näytteelle, koska ne istutetaan usein kahtena kappaleena yhden levyn inkuboimiseksi huoneenlämpötilassa ja toisen levyn 37 ° C: ssa..

Esimerkiksi, Sporothrix schenckii se kylvetään kahteen levyyn; toista inkuboidaan huoneenlämpötilassa muottivaiheen saamiseksi ja toista inkuboidaan 37 ° C: ssa hiivamaisen faasin saamiseksi, mutta jälkimmäisessä on tarpeen lisätä 5% verta verenkiertoon.

Muissa tapauksissa, kuten myseettien näytteissä, kylvetään kaksi Sabouraud-agaria, joista toisessa on kloramfenikoli ja toinen sykloheksimidillä. Ensimmäinen mahdollistaa sienen alkuperän (Eumicetoma) syövyttävien aineiden ja bakteeriperäisten myseettien toisen syövän, kuten aktinomyketoomien, kasvun..

itiöinnin

Emmonsin modifioima dekstroosi Sabouraud-agari sisältää 2 grammaa dekstroosia ja sitä ei käytetä ainoastaan ​​eristämiseen, vaan myös sienien sporuloimiseen ja säilyttämiseen.

Tässä välineessä, jos voit palauttaa kantoja Blastomyces dermatitidis.

säilyttäminen

Sieniviljelmien säilyttäminen voidaan säilyttää jääkaapissa (2-8 ° C). Varastointiaika voi vaihdella 2-8 viikkoa. Tämän ajan jälkeen ne on alaviljeltävä prosessin toistamiseksi.

Jotkut sienet on parasta säilyttää huoneenlämpötilassa, kuten Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum ja Microsporum audounii.

Kannan ylläpitoa voidaan pleomorfismin välttämiseksi pidentää, jos dekstroosi poistetaan kokonaan agarista ja jos agarin määrä väliaineessa pienenee kuivuuden välttämiseksi.

mikroviljelmiä

Joidenkin rihmasienien tunnistamiseksi on tarpeen tehdä mikrokulttuureja käyttäen Sabouraud-agaria tai muita erityisiä keinoja seksuaalisen ja epätavallisen lisääntymisen rakenteiden havaitsemiseksi..

Ihmisen mykologiassa

Sitä käytetään pääasiassa sienisairauksien, erityisesti iholle ja sen kiinnitykseen (hiukset ja kynnet) vaikuttavien sairauksien diagnosointiin..

Näytteet voivat olla eritteitä, eksudaatteja, ihoa, hiuksia, kynnet, sylkeä, CSF: ää tai virtsaa. Yleisesti eristetyt patogeenit ovat dermatofyyttejä, sieniä, jotka aiheuttavat ihonalaisia ​​ja systeemisiä sieni-infektioita.

Eläinten mykologia

Sieni-infektiot vaikuttavat usein eläimiin, joten Sabouraud-agar on yhtä hyödyllinen eläimessä kuin ihmisen mykologiassa..

Esimerkiksi dermatofyytit voivat usein vaikuttaa eläimiin. Näin on myös Microsporum canis var distortum, joka usein tartuttaa koiria, kissoja, hevosia, sikoja ja apinoita. myös, Microsporum gypseum tartuttaa koiria, kissoja ja karjaa.

Lintuja, kuten kanoja, kääpiöitä ja kanoja, vaikuttavat Microsporum gallinae.

Muut sienet, kuten Zymonema farciminosum, ne ovat myös syynä sairauksiin eläimissä, pääasiassa hevosissa, muulissa ja aasissa, jotka aiheuttavat merkittävän tulehduksen imusolmukkeissa..

Sporothrix schenkii ja Histoplasma capsulatum vaikuttaa kotieläimiin ja ihmisiin.

Ympäristön mykologia

Monet patogeeniset tai opportunistiset sienet voidaan keskittää milloin tahansa tietyssä ympäristössä, erityisesti klinikkojen ja sairaaloiden käyttöhuoneissa ja intensiivihoitoyksiköissä. Siksi on tarpeen hallita niitä.

Muita haavoittuvia alueita ovat kirjastot ja vanhat rakennukset, joihin ympäristön sieni voi keskittyä.

Ympäristötutkimuksissa Sabouraud-dekstroosiagaria käytetään sienien eristämiseen.

Teollinen mikologia

Sabouraud-dekstroosiagaria ei voi puuttua sieni-epäpuhtauksien tutkimukseen kosmetiikan, elintarvikkeiden, juomien, nahan, tekstiilien, mm..

Kasvien mykologia

Kasvit kärsivät myös sienien aiheuttamista sairauksista, jotka vaikuttavat laitoksen eri osiin, jotka voivat jopa lopettaa sadon, mikä aiheuttaa suuria tappioita maataloudessa.

viittaukset

  1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mykoosien mikrobiologinen diagnoosi ja herkkyystutkimukset sienilääkkeille. Espanjan tartuntatautien ja kliinisen mikrobiologian yhdistyksen suositukset. Saatavilla osoitteessa: coesant-seimc.org
  2. ValteK-laboratorio. (2009). Sabouraud-dekstroosiagar sykloheksimidillä. Saatavilla osoitteessa: andinamedica.com.
  3. Navarro O. (2013). Eläinlääketieteellinen mikologia. Kansallinen maatalousyliopisto. nicaragua.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen
  5. Casas-Rincon G. Yleinen mykologia. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, kirjastoversiot. Venezuela, Caracas.