Papa-dekstroosipohja, valmistelu ja käyttö



papa-dekstroosiagar se on kiinteä, ei-selektiivinen ravitseva elatusaine. Se voi kasvattaa bakteeri- ja sienilajeja, mutta sen käyttö on osoitettu erityisesti rihmasienien ja hiivojen eristämiseen. Sitä kutsutaan myös PDA-väliaineeksi englanninkielisellä ilmaisulla Potato Dextrose Agar.

Se on erityisen käyttökelpoinen fytopatogeenisten sienien, toisin sanoen sellaisten, jotka vaikuttavat kasveihin, eristämiseen. Näytteiden istuttamiseksi tartunnan saaneista kasveista voidaan käyttää muita väliaineita, kuten Sabouraud-agaria tai malta-agaria, mutta rutiinikäytössä perunan dekstroosiagar on edullinen, koska se on sporulaatio suurempi..

Sitä käytetään myös sienisolujen laskemiseen kosmetiikan, lääkkeiden ja joidenkin maitotuotteiden näytteissä. Samoin on tarkoituksenmukaista istuttaa näytteitä ihonkaavista, jotka etsivät dermatofyyttejä, jotka kasvavat hyvin tällä väliaineella ja kehittävät niiden tunnusomaisia ​​pigmenttejä.

Perunan dekstroosiväliaine on hyvin yksinkertainen ja helppo valmistaa laboratoriossa. Se sisältää, kuten nimikin viittaa, perunan infuusiota, dekstroosia ja agar-agaria. Lisäksi voidaan lisätä inhiboivia aineita bakteerikasvun estämiseksi ja selektiivisyyden lisäämiseksi sienilajeille.

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 - Papa-dekstroosiagarin kotitekoinen (ei-kaupallinen) valmistus
    • 2.2 - Papa-dekstroosiagarin kaupallinen valmistus
  • 3 Käyttö
    • 3.1 Kasvien näytteiden istutusmenetelmä perunan dekstroosiagarilla
    • 3.2 Prosessi ihon, hiusten tai kynsien astioiden istuttamiseksi papa-dekstroosiagarille
    • 3.3 Tunnistamismenettely
    • 3.4 Colony count
    • 3.5 Sienikantojen ylläpito
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Viitteet

perusta

Papa-dekstroosiagar on kasvualusta, joka tarjoaa tarvittavat ravintoaineet rihmasienien ja hiivojen kehittämiseksi..

Perunan infuusion ja glukoosin yhdistelmä tarjoaa täydellisen energianlähteen sienien tyydyttävälle kasvulle. Vaikka agari on sellainen, joka tarjoaa johdonmukaisuuden ympäristöön.

Pelkästään elatusaine ei estä bakteerien kasvua, joten se on ei-selektiivinen väliaine. Sen selektiiviseksi tekeminen edellyttää lisäaineiden, kuten viinihapon tai antibioottien, lisäämistä.

valmistelu

-Kotitekoinen (ei-kaupallinen) valmistus perunan dekstroosiagarista

Petri-astiat

Se valmistetaan seuraavasti:

Ensinnäkin perunat pestään hyvin, poistamalla niiden lika. Ne leikataan ohuiksi viipaleiksi kaiken ja kuoren kanssa. 200 g perunaa punnitaan ja asetetaan kiehumaan litraan tislattua vettä puolen tunnin ajan.

Ajan jälkeen suodatetaan tai kiristetään kaikki valmiste harson läpi.

Saatu neste valmistetaan tislatulla vedellä, kunnes se saavuttaa yhden litran. Infuusioon lisätään 20 g agaria ja 20 g dekstroosia, sekoitetaan hyvin ja autoklavoidaan 121 ° C: ssa 15 kiloa painetta 15 minuutin ajan.

Annetaan jäähtyä 50 ° C: seen ja ne voidaan käyttää steriileissä Petri-maljoissa. Valmistetut levyt säilytetään jääkaapissa.

kiilat

Voit myös valmistaa papa-dekstroosiagar-kiiloja.

Tässä tapauksessa ennen sterilointia autoklaavissa 12 - 15 ml väliainetta sijoitetaan putkiin, sitten ne autoklaavataan ja jätetään ne erityisille alustoille, kunnes ne kiinteytyvät. Säästä jääkaapissa.

Väliaine pysyy pH: ssa 5,6 ± 0,2, mutta jotkut laboratoriot lisäävät 10% viinihappoa pH: n alentamiseksi 3,1 ± 0,1: een bakteerikasvun estämiseksi.

Tässä mielessä muut laboratoriot haluavat lisätä antibiootteja, jotta se olisi valikoiva sienien viljelylle ja estäisi bakteerien kehittymistä..

-Perunan dekstroosiagarin kaupallinen valmistus

Punnitaan 39 g kaupallisesti saatavilla olevaa kuivattua väliainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Jätä lepo 5 minuuttia.

Seosta kuumennetaan sekoittaen usein, kunnes se täysin liukenee. Sen jälkeen steriloitiin autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuuttia.

Levyt tai kiilat voidaan valmistaa. Toimi edellä kuvatulla tavalla.

PH pysyy arvossa 5,6 ± 0,2. Jos halutaan pH-arvoa 3,1, 14 ml 20-prosenttista steriiliä viinihappoa tulisi lisätä ennen annostelua levyille..

Valmistamattoman väliaineen väri on beige ja valmistettu kevyesti keltaisena, jossa on hieman samea tai opaalinen ulkonäkö.

sovellukset

Menetelmä kasvien näytteiden istuttamiseksi perunan dekstroosiagariin

-Lehdille, joissa on täplät

Lehdet leikataan palasiksi.

50cc: n lasissa, jossa on 50% alkoholia, aseta lehtien palat (värjätyt ja terveelliset), jotta pinta desinfioidaan 20 - 30 sekunniksi. Vedä alkoholi ja lisää 20% natriumhypokloriittia 40 - 50 sekunnin ajan, jos ne ovat ohuita lehtiä, ja lisää aikaa 80 sekuntiin, jos se on kuori ja lokit.

Vedä natriumhypokloriitti ja ota desinfioidut kappaleet steriilillä leikkeellä ja aseta ne alustan pinnalle (enintään 10 kpl). Aseta päivämäärä ja inkuboi 20 - 30 ° C.

-Hedelmien ja mukuloiden osalta

Jos hedelmä on mehevä, avaa sienestä kärsivät hedelmät ja ota palat steriilillä skalpellillä, sekä sairaalla osalla että terveellä osalla, ja laita se agarin pinnalle..

Jos hedelmä on sitrushedelmiä, kuten sitruuna tai oranssi, sinun on avattava ja kylvettävä siemeniä.

Kun hedelmän pinta vaikuttaa ja itiöitä havaitaan, on parasta käyttää levyllä olevaa raastettua menetelmää; tämä koostuu itiöiden koskettamisesta "L"-steriloidun ja jäähdytetyn lastan kanssa, ja sitten suoritetaan siksakki, joka kylvää 2-3 kertaa agarilla.

-Viljaa varten

Ne desinfioidaan lehtien mukaisesti ja sijoitetaan sitten agariin.

-Haaroille ja varret

Kuoren kaavinta suoritetaan ja sitten otetaan terveitä ja sairaita osia ja kylvetään suoraan agarille..

Kylvettyjä levyjä inkuboidaan aerobioosissa 20 - 30 ° C: ssa 72 tuntia.

Prosessi ihon, hiusten tai kynsien astioiden istuttamiseksi papa-dekstroosiagarille

Näyte on otettava käyttäen skalpeliterää nro 11 joko leikkaamaan altistuneet hiukset, ihon hiutaleet tai kynnet dermatofyyttien etsimisessä. Ennen näytteen ottamista alue tulisi desinfioida 70% alkoholilla.

-Ihon näyte

Pehmeissä leesioissa leesion reunan tulisi olla kaavittu, koska sieni löytyy todennäköisemmin.

Eksudatiivisissa vaurioissa näyte otetaan kuivalla tai märkäpyyhkeellä. Kylvetään välittömästi perunan dekstroosiagariin tai Sabouraud-agariin. Vältä kuljetusvälineitä.

Toinen näytteenottomenetelmä on Mariatin ja Adan Camposin maton neliön tekniikka. Tällöin haavoittunut alue hierotaan 5 kertaa steriilillä villalla lisäkasvatusta varten.

Näyte voidaan sijoittaa suoraan kasvualustaan.

-Hiusten näyte

Patologiasta riippuen juuret voivat leikata tai rikkoa kärsineen osan. Aseta näyte kasvatusalustaan.

-Kynsinäyte

Voit kaavata tai leikata tietyn osan tarttuneesta naulasta. Se riippuu vahingon tyypistä.

Leikkaa näyte 1 mm: n palasiksi ennen kylvöä, jotta sienen ja kasvualustan kosketuksen todennäköisyys kasvaa.

Tunnistamismenettely

Levyllä saadut pesäkkeet eristetään putkissa, jotka sisältävät perunan dekstroosiagaria, jotta voidaan suorittaa pesäkkeiden makroskooppinen tutkimus (ulkonäkö, väri, johdonmukaisuus, kehitysaste)..

Mikroskooppinen tutkimus (rakenteiden ja niiden muodostumien havainnointi) voidaan tehdä mikrokulttuureilla tai suoralla tarkkailulla mikroskoopin läpi laminaatin ja lamellin välillä.

Colony count

Tätä elatusainetta voidaan myös käyttää kasvien näytteissä, elintarvikkeissa, kosmetiikassa tai huumeissa olevien sienien ja hiivojen kuormituksen määrittämiseen. Tätä tarkoitusta varten käytetään papa-dekstroosiagaria, johon on lisätty antibiootteja, kuten: (kloramfenikoli, klorotetrasykliini tai molemmat).

Kaada 1 ml näytettä - edullisesti laimennettu - steriiliin ja tyhjään petri-astiaan, sitten sulatetaan perunan dekstroosiagar-pistoke ja anna jäähtyä 45 ° C: seen. Kaada petrimalja ja pyöritä, kunnes se on homogenoitu. Jätä se levoon, kunnes se jähmettyy.

Inkuboidaan aerobioosissa 20 - 25 ° C: ssa (muotit) tai 30 - 32 ° C: ssa (hiiva) 5 - 7 vuorokautta tai enemmän riippuen haettavan sienen tyypistä ja näytteen tyypistä. Kaksi levyä voidaan käyttää inkuboimaan molemmissa lämpötila-alueissa.

Sienikantojen ylläpito

Papa-dekstroosiagaria voidaan käyttää elävien sieni-kantojen ylläpitämiseen useita vuosia.

Tätä varten sieni viljellään papa-dekstroosiagar-kiiloissa ja sen jälkeen kun sieni on kasvanut, se peitetään mineraaliöljyllä. Öljy on steriloitava autoklaavissa 45 minuutin ajan ja sen likimääräinen viskositeetti on 300 - 330 Saybolt. Öljyn tulee ylittää viistokärki 1 - 2 cm.

Laadunvalvonta

Jokaisesta valmistetusta erästä tulisi ottaa yksi tai kaksi levyä ja niitä inkuboidaan 25 ° C: ssa 48 tuntia tai 20 ° C: ssa 96 tuntia. Hyvä steriiliysohjaus on sellainen, jossa pesäkkeitä ei ole kehitetty.

Tunnetut tai sertifioidut kontrollikannat, kuten:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Kaikissa tapauksissa odotetaan hyvää kasvua.

viittaukset

  1. Laboratories Britania. Papa glukosado-agar. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories Perunan dekstroosiagar. Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
  3. Insumolab-laboratorio Perunan dekstroosiagar. Saatavilla osoitteessa: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  5. Casas-Rincon G. Yleinen mykologia. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, kirjastoversiot. Venezuela, Caracas.
  6. Aceitunossa M. arviointi mikrobiologisen laadun luomiväri, jauhe kompakti tyyppi kansallinen tuotanto Laboratory mukaan vertailumenetelmää farmakopean Usp 2005. Työn otsikko farmaseuttisen kemian. San Carlos de Guatemalan yliopisto.
  7. Cuétara M. Pintanäytteiden käsittely. Iberoamerican Mycology -lehti. 2007; ss. 1-12