Ravitseva agarin perusta, valmistus ja käyttö



ravitseva agar se on epäselektiivinen ja ei-differentiaalinen kiinteä viljelyalusta. Tässä ympäristössä kasvaa kaikenlaisia ​​bakteereja, jotka eivät vaadi ravitsemuksellisesta näkökulmasta.

Se on yksinkertainen keino ja nimestään huolimatta sisältää vähemmän ravintoarvoa verrattuna muihin vastaaviin väliaineisiin, kuten aivojen sydämen infuusioagariin tai tryptikaasin soija-agariin..

Sen hyödyllisyys laboratoriossa on hyvin vaihteleva. Käytetään pääasiassa lajien alakulttuuriin, kantojen ylläpitoon, pesäkkeiden laskemiseen perustana muun muassa veren agarin valmistamiseksi..

Samoin, koska se on vaalea beige väri, joidenkin bakteerikantojen tuottamat pigmentit, kuten vihreän pigmentin, muodostuvat Pseudomonas aeruginosa, valmistama tiili punainen pigmentti Serratia marcescens huoneenlämpötilassa, kultainen keltainen pigmentti Staphylococcus aureus, muun muassa.

Lisäksi se on yksi markkinoiden taloudellisimmista kasvualustoista.

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Koostumus
  • 3 Valmistelu
  • 4 Käyttö
    • 4.1 Veren agarin valmistuksen perustana
    • 4.2 Kannustetaan itiöitä muodostavien bakteerien itiöitä
    • 4.3 Kantojen ylläpito
    • 4.4 Colony counting
    • 4.5 Diagnostisten testien suorittaminen
    • 4.6 Mesofiilisten aerobisten vapaa-ajan suolaveden talteenotto (rannat)
  • 5 Viitteet

perusta

Kuten jo mainittiin, se on hyvin yksinkertainen keino, joka perustuu ravintoaineiden tuottamiseen bakteerikasvulle ilman rajoituksia ja ilman monimutkaisia ​​reaktioita tulkitsemaan.

Koska väliaine on läpikuultava, se on ihanteellinen pesäkkeiden laskemiseen syvyyden avulla.

koostumus

Se koostuu pääasiassa lihauutteesta tai hiivauutteesta, peptoneista tai haiman gelatiinista, agar-agarista, natriumkloridista ja tislatusta vedestä..

Lihan tai hiivan ja peptonien uute edustaa hiilen ja välttämättömien mineraalien (typpi, fosfori ja rikki) lähteitä, joita bakteerit käyttävät energialähteenä ja kasvutekijöinä.

Samalla tavoin agar-agari on kaikkien kiinteiden kasvatusalustojen perusta, joka korvaa gelatiinin, joka oli ensimmäinen emäksinen yhdiste, jota Robert Koch käytti antamaan mediaansa kiinteälle konsistenssille..

Agar on polysakkaridi, joka koostuu galaktoosista, galaktomannaanista, agaroosista ja agaropektiinistä. Se asetetaan 40 ° C: een ja sulaa lähes 100 ° C: een.

Natriumkloridi puolestaan ​​antaa alustalle bakteerien kehitykseen tarvittavan osmolaarisuuden.

Lopuksi vesi toimii hydrolysoimalla ja liuottamalla lyofilisoidut yhdisteet. Käytetään tislattua vettä, joka on säädetty neutraaliin pH-arvoon. Vesijohtovettä ei pitäisi käyttää, koska se sisältää kalsiumia ja magnesiumia, jotka voivat reagoida fosfaattien kanssa alustassa ja muodostaa liukenemattomia suoloja.

valmistelu

Yhden litran ravitsevaa agaria varten punnitaan 31 g kuivattua väliainetta. Se asetetaan fiolaan ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Viiden minuutin lepoajan jälkeen lämmitä lämmönlähteellä ja sekoita jatkuvasti, kunnes se kiehuu 1 tai 2 minuuttia.

Aseta fiola autoklaaviin ja steriloi 121 ° C: ssa 20 minuuttia.

Ajan päätyttyä se poistetaan autoklaavista ja sitä tarjotaan steriileissä Petri-maljoissa käyttäen laminaarista virtausta tai Bunsen-poltinta..

Jos Petri-astiat ovat kertakäyttöisiä (muovia), väliaine tulisi jakaa, kun agarin lämpötila on noin 50 ° C, jotta estetään liiallinen kuumuus..

Annetaan jähmettyä ja säilyttää levyn pidikkeessä käänteisenä ja säilytetään kylmässä 2-8 ° C: ssa käyttöön asti.

Levyt on karkaistu ennen kylvämistä. Ravitsevia agarlevyjä ei saa käyttää, jos ne ovat saastuneita tai kuivattuja.

Valmistetun väliaineen pH on säädettävä 7,3 ± 0,2: een.

sovellukset

Se on mikrobiologian laboratoriossa käytettävä yksinkertaisin viljelyväliaine. Sen formulaatio on erinomainen vaativien bakteerien kasvuun.

Sen tärkeimmät käyttötarkoitukset on selitetty seuraavassa:

Pohjana veren agarin valmistamiseksi

Tätä väliainetta käytetään joskus emäksenä veriagarin valmistamiseksi, mutta se ei ole yleisimmin käytetty emäs.

Stimuloida itiöitä muodostavien bakteerien sporulaatiota

Tämä viljelyväliaine on erityisen käyttökelpoinen itiöiden muodostavien bakteerien, kuten Bacillus sp.

Tätä varten kylvetään suvun kanta basilli ja inkuboidaan 24 tuntia 37 ° C: ssa aerobioosissa. Kun pesäkkeet on kasvatettu, levy altistetaan lämpötilalle, ts. Keittimen lämpötila nostetaan 44 ° C: seen ja jätetään 24 tunnin ajan tai se lisätään jääkaapissa 24 tuntia..

Viljelyn lopussa viljelmät pidentyvät ja värjätään Gram-värillä tai Shaeffer-Fultonin itiö- värillä. Niissä havaitaan bakteereja, joissa on endosporeja (itiöitä bacilluksen sisällä) ja eksosporoja (itiöt bacilluksen ulkopuolella)..

Strain-huolto

Joidenkin tutkimuslaboratorioiden tai yliopistojen opetuslaboratorioiden on säilytettävä elinkelpoisia kliinisesti tärkeitä bakteereja niin kauan kuin mahdollista, jotta bakteeripankkia (bakteeri) voidaan käyttää tutkimustyöhön tai opetuskäytäntöjen valmisteluun. Opiskelija oppii manipuloimaan ja tunnistamaan nämä mikro-organismit.

Tätä tarkoitusta varten voidaan käyttää sekä ravitsevaa agaria että aivojen sydämen infuusioagaria. Agar valmistetaan, kaadetaan bakeliittikalvoihin ja kallistetaan alustalle siten, että agar jähmettyy muodostaen lohkon pohjaan ja viistoon pintaan (huilun huippu).

Jokainen putki on merkitty asettamalla istutettavien bakteerien nimi ja päivämäärä. Kehyksessä kukin bakteeri istutetaan ja inkuboidaan 24 tuntia, kun pesäkkeet kasvatetaan, putkia säilytetään huoneenlämpötilassa..

Bakterioteka on uudistettava 1–3 kuukauteen, jotta vältetään välineen saastuminen ja dehydraatio sekä bakteerien kuolema.

Tällä tavalla voidaan ylläpitää vain ei-vaativia bakteereja.

Colony counting

Vaikka on olemassa erikoistuneita keinoja pesäkkeiden laskemiseen, kuten tavallinen agar, voidaan käyttää tähän tarkoitukseen ravitsevaa agaria joko kylvämällä pinnalla drigalski-lastalla tai syvyydellä. Siksi se on erittäin hyödyllinen ruoan ja veden mikrobiologisessa analyysissä.

Diagnostisten testien suorittaminen

Koska se on väliaine, joka ei sisällä verta tai mitään muuta lisäainetta, on ihanteellista ottaa tässä kasvualustassa kasvatettuja pesäkkeitä katalaasitestin suorittamiseksi..

Samoin selkeän värinsä vuoksi on osoitettu suorittavan oksidaasitestit suoraan kylvetyn agarin alueelle ilman häiriöitä.

Mesofiilisten aerobisten vapaa-ajan suolaliuosten talteenotto (rannat)

Ravintoagarilla, joka on valmistettu 10% merivedestä, on hyötyä mesofiilisten aerobien arvioinnissa rantavesillä.

Tällä tavoin voimme arvostaa veden todellisen kontaminaation tasoa näiden mikro-organismien kanssa, koska tämäntyyppisissä näytteissä tulokset ovat päällekkäisiä käytettäessä tavanomaisella tavalla valmistettua viljelyalustaa.

Tämän osoitti Cortez et ai. vuonna 2013 tutkimuksessa.

Tämä on selittävää johtuen äkillisestä muutoksesta, jota bakteerit käyvät läpi, kun ne menevät hyper-suolaliuoksesta matalaan suolaympäristöön, joten mikro-organismit tulevat letargian tilaan, jossa ne ovat elinkelpoisia, mutta ei viljeltäviä.

viittaukset

  1. "Ravitseva agar." Wikipedia, vapaa tietosanakirja. 13. syyskuuta 2016, 20:33 UTC. 29. joulukuuta 2018, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, toimittaja Panamericana S.A..
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L Valbuena O. vaikutus valmistetut elatusaineet meriveden terveyteen indikaattoreita merivedessä kylpylöissä Chichiriviche, Falcon valtion, Venezuelan. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M ja Cardoso M. Vesien mikrobiologinen laatu annoksille, Suinos \ t.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA-julkaisupalvelu.