Agar M.R.S-säätiö, valmistelu ja käyttö



agar M.R.S. on selektiivinen kiinteä viljelyväliaine, jota käytetään maitohappobakteerien, erityisesti Lactobacillus-suvun, eristämiseen ja laskemiseen. Tämä agar luotiin vuonna 1960 Man, Rogosa ja Sharpe, jonka keskellä oli sama nimi, mutta sen monimutkaisuuden vuoksi käytetään usein lyhennettä M.R.S..

Se koostuu proteosipeptonista, lihauutteesta, hiivauutteesta, glukoosista, sorbitaanimonoleaatista, dikaliumfosfaatista, natriumasetaatista, ammoniumsitraatista, magnesiumsulfaatista, mangaanisulfaatista ja agarista..

Tämä koostumus sallii maitohappobakteerien asianmukaisen kehittymisen kliinisistä näytteistä, kuten ulosteista, emättimen erittymisestä, suun kautta otetuista näytteistä ja rintamaidosta sekä maitotuotteista ja lihatuotteista..

Sitä ei käytetä rutiininomaisesti kliinisissä laboratorioissa, koska maitohappobakteerit ovat harvoin mukana patologisissa prosesseissa. M.R.S agarin käyttö on kuitenkin yleisempää ruoka-mikrobiologian alueella..

Toisaalta tätä tietovälinettä käyttävät jotkin tutkimuskeskukset, joiden tavoitteena on maitohappobakteerien tutkiminen.

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Valmistelu
  • 3 Käyttö
    • 3.1 Pesäkkeiden ominaisuudet
    • 3.2 Maitohappobakteerien eristäminen
    • 3.3 Maitohappobakteerien laskeminen
    • 3.4 Tutkimustasolla
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Viitteet

perusta

Agar Man, Rogosa ja Sharpe on melko monimutkainen koostumus. Leikkaamalla jokaisen sen komponentin tehtävän, sen perustaa voidaan selittää.

Proteosipeptoni, lihauute, hiivauute ja glukoosi ovat ravintoaineita, jotka tarjoavat bakteerikasvun kannalta välttämättömän hiilen, typen, vitamiinien ja kivennäisaineiden lähteen. Lisäksi glukoosi on yleinen energialähde, jota käytetään useimmissa viljelyvälineissä.

Toisaalta maitohappobakteerien kasvun edistämiseksi on välttämätöntä, että Lactobacillus ja siihen liittyvät bakteerit ovat välttämättömiä kofaktoreita (kationeja); Nämä yhdisteet ovat natrium-, magnesium- ja mangaanisuoloja.

Samoin sorbitaanimonoleaatti tai polysorbaatti 80 ovat tärkeiden rasvahappojen lähde, kun ne imeytyvät ravintoaineina.

Lisäksi sorbitaanimonoleaatti ja ammoniumsitraatti vaikuttavat inhiboimalla mukana olevan kasviston, erityisesti gramnegatiivisten bakteerien, kehittymistä, mikä antaa tämän agarin selektiivisen luonteen.

Lopuksi agar-agar on se, joka antaa alustalle kiinteän konsistenssin.

Man Rogosa Sharpe-agarilla on muitakin vaihtoehtoja; yksi niistä on sellainen, jota on täydennetty kysteiinillä (M.R.S.c), joka on erittäin hyödyllinen bifidobakteerien eristämiseksi muiden mikro-organismien joukossa. Toisaalta on olemassa MRS-väliaine, johon on lisätty neomysiiniä, paromomysiiniä, nalidiksiinihappoa ja litiumkloridia, erityisesti bifidobakteerien selektiiviseen laskemiseen maitotuotteissa.

valmistelu

Punnitaan 68,25 grammaa kuivattua väliainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Anna seistä 5 minuuttia. Kokonaan liukeneminen tuo lämpölähteeseen sekoittaen usein ja anna kiehua 1-2 minuuttia. Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Kun autoklaavista poistutaan, anna seistä muutama minuutti ja jaa vielä kuuma steriileissä petrimaljoissa.

Anna jähmettää ja kääntää levyt, tilata levyihin ja säilytä jääkaapissa ennen käyttöä. Anna levyt ottaa huoneenlämpötilaa ennen niiden käyttöä.

Väliaineen pH: n tulisi olla 6,4 ± 0,2. Jotkut kaupalliset talot suosittelevat pH-arvoa 5,5 - 5,9.

Dehydratoitu väliaine on beige ja valmistettu tumman keltaisena.

Sekä kuivattu väliaine että valmistetut levyt tulee säilyttää 2 - 8 ° C: ssa.

sovellukset

Agar-levyt M.R. ne voidaan kylvää pinnalle (uupumus tai Drigalskin lastalla). Se voidaan myös kylvää syvyydellä. Levyjä tulisi inkuboida 37 ° C: ssa mikroaerofiilisessä (4% O2 ja 5 - 10% CO: sta2) 24–72 tuntia.

Kylvömenetelmä valitaan tavoitteen mukaisesti (eristäminen tai laskeminen).

Pesäkkeiden ominaisuudet

Lactobacilluksen oletetut pesäkkeet kasvavat valkoisina ja niillä on limakalvo tai kermainen esiintyminen tällä agarilla. Sitten heidän on tunnistettava.

Maitohappobakteerien eristäminen

Tätä varten käytetään istutusta pinnan mukaan. Istutettavat näytteet edellyttävät aikaisempaa menettelyä. 

Rintamaidon näytteiden osalta on suositeltavaa sentrifugoida 1 ml näytettä 14 000 rmp: llä 10 minuutin ajan rasva- kerroksen poistamiseksi. 900 μl heitetään pois, ja jäljellä olevissa 100 μl: ssä sedimentti suspendoidaan ja kaadetaan M.R.S. Sitten se on jaettava tasaisesti Drigalskin lastalla.

Ulosnäytteiden tapauksessa punnitaan yksi (1) gramma ulosteita ja homogenoidaan 9 ml: ssa 0,1% steriiliä peptonoitua vettä, joka vastaa 1/10 laimennusta. Sitten tehdään sarjalaimennuksia, kunnes saadaan lopullinen 10-laimennos-4.

Lopuksi otetaan 100 μl laimennoksia 10-2, 10-3 ja 10-4 ja jokainen laimennus siemenetään MRS-agariin, jakautuen tasaisesti Drigalski-lastalla.

Maitohappobakteerien laskeminen

Tässä tapauksessa kylvö tehdään syvyydellä.

Ottaa rintamaidon näytteitä ottamalla 1 ml ja laita se steriiliin kartiomaisen muoviputkeen. MRS-agaria lisätään noin 40 ° C: n lämpötilassa 25 ml: n lopulliseen tilavuuteen saakka, jolloin saadaan homogeeninen seos. Sen jälkeen se kaadetaan steriileihin Petri-maljoihin tasaisesti ja annetaan seistä kunnes se polymeroituu..

Laimennukset tehdään ulostenäytteille edellä kuvatulla tavalla. Ota 1 ml kutakin laimennosta ja laitetaan steriileihin kartiomaisiin muoviputkiin. Sula MRS-agaria lisätään 25 ml: n tilavuuteen.

Kunkin laimennoksen seos kaadetaan tasaisesti steriileihin Petri-maljoihin. Lopuksi anna sen seistä, kunnes se polymeroituu.

Tutkimustasolla

Joka päivä maitohappobakteerien tutkimus muuttuu mielenkiintoisemmaksi; erityisesti tutkijat pyrkivät tuntemaan uusia kantoja ja niiden potentiaalia, kun ne käynnistävät meijerituotteita maitotuotteiden valmistuksessa, muun muassa.

Tässä mielessä Alvarado et ai. (2007) käytti M.R. suorittaa tutkimus, jossa ne eristivät, tunnistivat ja karakterisoivat käsityöläisten savustetussa Venezuelan juustossa esiintyviä maitohappobakteereita.

Juustossa he havaitsivat Lactococcus- ja Lactobacillus-sukujen bakteerien esiintymisen ja totesivat, että eristettyjen kantojen seokset ovat sopivia käynnistyskannoille pastöroidusta maidosta valmistettujen juustojen valmistuksessa..

Toisaalta Sánchez et ai. (2017) käytti M.R. tutkia maitohappobakteerien esiintymistä porsaiden ruoansulatuskanavassa, jotta niitä voitaisiin käyttää natiivisina probiooteina, jotka lisäävät terveiden porsaiden tuottavuutta.

Tällä välineellä he onnistuivat eristämään neljä lajia: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae ja Pediococcus pentosaceus.

Samoin Báez et ai. (2019) käytti M.R. arvioida maitohappobakteereja (BAL) ja bifidobakteereja, joilla on probioottinen potentiaali äidinmaitossa ja pikkulasten ulosteissa.

He onnistuivat eristämään 11 ​​BAL ja 3 Bifidobacteria sp äidinmaitoon ja 8 BAL ja 2 Bifidobacteria sp. ulosteessa Kaikki täyttivät tietyt parametrit, jotka akkreditoivat niitä probioottisen aktiivisuuden bakteereina.

Tekijät totesivat, että sekä rintamaidon että yksinomaan rintaruokinnassa olevien lasten ulosteet toimivat probioottisten bakteerien luonnollisina lähteinä.

Laadunvalvonta

Arvioida M.R.S. kontrollikantoja voidaan käyttää, kuten:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli ja Bacillus cereus.

Odotetut tulokset ovat tyydyttävä kasvu kuudelle ensimmäiselle bakteerille E. coli ja Bacillus cereus on estettävä kokonaisuudessaan.

viittaukset

  1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Andien käsityönä valmistetun savustetun venezuelalaisen juuston maitohappobakteerien eristäminen, tunnistaminen ja karakterisointi. Sen käyttö aloitusviljelyssä. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301 - 308. Saatavilla osoitteessa: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro-maitohappobakteerien eristäminen porsaan ruoansulatuskanavasta. Rev. vet. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Saatavilla osoitteessa: scielo.org.
  3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Maitohappobakteerien ja Bifidobakteerien arviointi probioottipotentiaalilla äidinmaitossa ja pikkulasten ulosteissa Acevedon kunnassa, Miranda 2017. biotesteissä. Carabobon yliopisto, Venezuela.
  4. Britannian laboratorio M.R.S agar. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  5. Wikipedia-avustajat. MRS-agari Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. tammikuuta 2018, 19:44 UTC. Saatavilla osoitteessa: wikipedia.org Käytetty 17. helmikuuta 2019.
  6. Roy D. Media bifidobakteerien eristämiseen ja lukemiseen maitotuotteissa. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.