Agar LIA (Lysine Iron) -perusta, valmistus ja käyttö



LIA-agar (Lysiini Rauta) on biokemiallinen testi, jota käytetään tunnistamaan Enterobacteriaceae-perheen bakteerit. Tämän median on luonut Edwards ja Fife, Falkowin kaavan perusteella.

Tämä testi oli alun perin peptoneja, hiivauutetta, glukoosia, L-lysiiniä, bromikresolia purppuraa ja tislattua vettä sisältävä liemi. Edwards ja Fife lisäsivät agar-agaria, rauta-ammoniumsitraattia ja natriumtiosulfaattia.

Testi koostuu periaatteessa siitä, että osoitetaan lysiinidekarboksylaasin entsyymin läsnäolo, joka kykenee reagoimaan aminohapon L-lysiinin karboksyyliryhmän kanssa. Aminohapon deaminointi voi tapahtua myös entsyymin lysiinideaminaasin läsnäolon vuoksi.

Lisäksi väliaineen koostumus sallii joidenkin bakteerien sukujen kyvyn tuottaa vety- sulfidia. Lopuksi on myös mahdollista tarkkailla keskellä olevaa kaasua tai ei.

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Peptonit ja hiivauute
    • 1.2 Glukoosi
    • 1,3 L-lysiini
    • 1.4 pH-indikaattori (bromikresoli violetti)
    • 1.5 Ammonium-ferrositraatti ja natriumtiosulfaatti
  • 2 Testin tulkinta
    • 2.1 Lysiinin dekarboksylointi
    • 2.2 Lysiinin desaminaatio
    • 2.3 Vetyisulfidin (H2S) tuotanto \ t
  • 3 Tulosten kirjaaminen
  • 4 Valmistelu
  • 5 Käyttö
  • 6 Viitteet

perusta

Peptonit ja hiivauute

Kuten useimmat viljelyalustat, rauta-lysiini-agar sisältää komponentteja, jotka tarjoavat bakteerikasvun kannalta välttämättömiä ravintoaineita. Näitä komponentteja edustavat peptonit ja hiivauute.

glukoosi

Tämä agar sisältää myös fermentoitavaa hiilihydraatti- glukoosia. On tunnettua, että kaikki Enterobacteriaceae-suvun bakteerit fermentoivat glukoosia.

Tämä vaihe on ratkaiseva, koska se on vastuussa väliaineen happamoitumisesta, olennaisena edellytyksenä lysiini-dekarboksylaasin entsyymille, jos se on läsnä, toimimaan substraatillaan.

Joissakin bakteeri-sukuissa voidaan havaita glukoosin fermentoinnista johtuva kaasuntuotanto.

Kaasu osoitetaan, kun agarissa on siirtymä putkessa, jolloin putken pohjaan jää tyhjä tila tai murtamalla väliaine kahteen tai useampaan osaan.

L-lysiini

Kun lysiini on dekarboksyloitu, muodostuu diamiini (kadaveriini) ja hiilidioksidi.

Dekarboksylointi tapahtuu koentsyymipyridoksaalifosfaatin läsnä ollessa. Tämä reaktio on peruuttamaton.

PH-indikaattori (bromikresoli violetti)

Kaikki pH: n muutokset, joita esiintyi väliaineessa erilaisilla reaktioilla, havaitaan bromikresolin purppuran pH-indikaattorilla.

Tässä mielessä, kun happamoituminen tapahtuu, elatusaine muuttuu keltaiseksi, ja kun on alkalisointia, elatusaine palaa alkuperäiseen purppuran tai violetin väriin.

Kun lysiinin deaminoituminen tapahtuu lysiinideaminaasin entsyymin läsnä ollessa, pintaan muodostuu punertava väri, joka on tyypillinen Proteus-, Providencia- ja joillekin Morganella-lajeille..

Tämä johtuu siitä, että deaminoinnin aikana muodostuu alfa-ketokarbonihappo, joka reagoi ammoniumtsitraatin kanssa hapen läsnä ollessa, mikä aiheuttaa edellä mainitun värin..

Ammonium-rautasitraatti ja natriumtiosulfaatti

Toisaalta vety- sulfidia tuottavia bakteereita osoittaa natriumtiosulfaatin (rikin lähde) ja rauta- ammoniumtsitraatin läsnäolo, joka on H: n kehittäjä.2S.

Tiosulfaatti-reduktaasientsyymiä sisältävillä bakteereilla on kyky toimia vähentämällä läsnä olevaa natriumtiosulfaattia muodostamalla sulfiittia ja vety- sulfidia (H2S).

Jälkimmäinen on väritön kaasu, mutta kun se reagoi rautasuolan kanssa, se muodostaa metallisen ferrosulfidin, joka on liukenematon yhdiste (näkyvä musta saostuma).

H: n muodostumisen kapasiteetti kuitenkin2S tämän väliaineen kanssa ei ole kovin luotettava, koska jotkut negatiiviset lysiinidekarboksylaasibakteerit, jotka kykenevät tuottamaan H2S ei muodosta mustaa sakkaa, koska väliaineen happamuus häiritsee. Siksi on suositeltavaa tarkistaa muilla rautaa sisältävillä keinoilla.

Testin tulkinta

Lysiinin dekarboksylointi

Putket on luettava 24 tunnin inkuboinnin jälkeen, muuten on olemassa riski, että reaktio tulkitaan väärin ja raportoidaan vääriä negatiiveja.

On muistettava, että ensimmäinen reaktio, joka tapahtuu, on glukoosin fermentointi, joten kaikki putket 10 - 12 tunnin kuluttua muuttuvat keltaisiksi.

Jos inkubointiajan (24 tuntia) lopussa havaitaan keltainen tausta, jossa on violetti tai violetti pinta, reaktio on negatiivinen. Pinnan violetti väri vastaa alustan alkalointia peptoneilla.

Positiivinen reaktio on sellainen, jossa putken pohja ja pinta ovat täysin purppura, eli se palaa alkuperäiseen väriin.

Siksi, joka määrittää testin positiivisuuden, on alustan pohja tai pohja. Jos sinulla on epäilyksiä väristä, voit vertailla sitä inokuloimattomaan LIA-putkeen.

Lysiinin deaminointi

Putkella, joka osoittaa lysiinin deaminoinnin, on punertavanruskea pinta ja keltainen tausta (happo) tai koko punertavanruskea putki..

Tätä reaktiota tulkitaan negatiiviseksi lysiinin dekarboksyloinnissa, mutta positiivinen lysiinin deaminoinnissa.

Tämä reaktio määritellään ja tulkitaan viistossa.

Vety- sulfidin valmistus (H2S)

Positiivinen reaktio havaitaan, kun musta sakka esiintyy koko väliaineessa tai sen osassa. Yleensä viistoreunan ja pohjan välillä.

Jos sakka esiintyy koko putkessa, se ei näytä muita reaktioita, jotka esiintyvät väliaineessa.

Kirjaa tulokset

Testin tulkinnassa tulokset kirjataan seuraavasti:

Lue ensin viisto, sitten pohja tai taco, sitten H: n tuotanto2S ja lopulta kaasun tuotanto.

Esimerkki: K / A + (-). Tämä tarkoittaa:

  • K: Alkalinen kehys (violetti)
  • A: Happo (keltainen) tausta, eli negatiivinen dekarboksylointireaktio ja negatiivinen deaminointi.
  • +: Vetyisulfidin valmistus
  • (-): Ilman kaasua.

valmistelu

Punnitaan 35 grammaa lysiini-agaria, joka on kuivattu rauta, ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä.

Kuumenna, kunnes agar on täysin liuennut, joten kiehauta se sekoittaen usein. Jaetaan 4 ml elatusainetta 13/100 koeputkessa puuvillan kannella.

Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Irrota autoklaavista ja anna levätä kaltevalla tavalla siten, että siinä on syvä pohja ja lyhyt viisto.

Säilytä jääkaapissa 2-8 ° C. Annetaan lievittää ennen bakteerikantaa.

Dehydratoidun väliaineen väri on beige ja keskipitkä on punertavan violetti.

Valmistetun väliaineen lopullinen pH on 6,7 ± 0,2.

Elatusaine muuttuu keltaiseksi, pH on yhtä suuri tai pienempi kuin 5,2, ja violetti pH 6,5: ssä.

sovellukset

Tätä testiä yhdessä muiden biokemiallisten testien kanssa käytetään tunnistamaan bacillot Enterobacteriaceae-sukuista..

Väliaine kylvetään suoralla silmukalla tai neulalla, yksi tai kaksi lävistintä tehdään putken pohjaan, ja sitten alustan pinta on siksakoitu.

Sitä inkuboidaan 24 tuntia 35 - 37 ° C: ssa aerobioosissa. Tarvittaessa se jätetään inkuboimaan vielä 24 tuntia.

Pääasiassa on hyödyllistä erottaa negatiiviset Citrobacter-laktoosilajit Salmonellas sp.

viittaukset

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisesti merkittävien bakteerien tunnistamiseksi. 3. ed. Toimituksellinen Panamericana. Buenos Aires Argentiina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5th ed. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  4. Laboratories Britania. Lysiinin rauta-agari. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL-lysiini-rauta-agaraattia. 2007. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Saatavilla osoitteessa: andinamedica.com