Agar Hektoenin säätiö, valmistelu ja käyttö



Hektoen-agari tai enteerinen Hektoen-agar on kiinteä, selektiivinen ja differentiaalinen kasvualusta. Se luotiin Hektoen-instituutissa kuningas ja Metzger Shigellan ja Salmonellan sukujen enteropaattisten bakteerien eristämiseksi..

Väliaine koostuu proteosipeptonista, hiivauutteesta, sappisuoloista, laktoosista, sakkaroosista, salisiinista, natriumtiosulfaatista, natriumkloridista, rautasitraatista, ammoniumsitraatista, bromitymolisinisestä, happofuksiinista ja agarista. Tämä formulaatio sallii Shigellan ja Salmonellan sukujen erottamisen muusta bakteerista, joka pystyy kasvamaan tässä kasvualustassa.

Vaikka on olemassa muitakin keinoja, joilla on sama toiminto kuin Hektoen-agarilla, tämä on suurempi etu verrattuna muihin keinoihin, varsinkin kun haluat palauttaa Shigellan lajit.

Molempien sukujen lajit aiheuttavat ihmiselle vaikeita ruoansulatuskanavan ongelmia, jotka johtuvat saastuneen ruoan kulutuksesta; siksi siirto on uloste - suun kautta. Siksi Hektoen-agarin käyttö osoitetaan pääasiassa ulosteen ja elintarvikkeiden näytteiden mikrobiologisessa analyysissä..

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Valmistelu
  • 3 Käytä
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Rajoitukset
  • 6 Viitteet

perusta

Hektoen-agar sisältää ravinteiden lähteenä peptoneja ja hiivauutetta..

Siinä on kuitenkin myös sappisuoloja, jotka vaikuttavat estämällä joidenkin bakteerien, erityisesti grampositiivisen ja jonkin verran gramnegatiivisen kasvun. Tästä syystä sitä pidetään valikoivana väliaineena.

Toisaalta Hektoen-agari on differentiaalinen väliaine. Tämä ominaisuus johtuu fermentoituvien hiilihydraattien, kuten laktoosin, sakaroran ja salisiinin, läsnäolosta yhdessä pH-indikaattorijärjestelmän kanssa, jota edustaa bromimyymisinisä ja happofuksiini..

Kaikki bakteerit, jotka kykenevät kasvamaan tässä kasvualustassa, jotka eivät kuulu Salmonella- ja Shigella-sukuun, kehittävät lohen tai oranssin pesäkkeitä, lukuun ottamatta Proteus-sukua. Tämä johtuu yhden tai useamman läsnä olevan hiilihydraatin fermentoinnista, joka happamoittaa elatusaineen, mikä saa pH-indikaattorin kääntymään.

Shigellan ja Salmonellan suku ei omalta osaltaan kykene fermentoitumaan mihinkään läsnä olevaan hiilihydraattiin käyttäen vain peptoneja energialähteenä, joka alkalisoi ympäristöä ja siksi sen pesäkkeet ovat sinivihreitä.

Myös tässä väliaineessa voidaan erottaa bakteerit, jotka kykenevät muodostamaan vety- sulfidia (väritön kaasu). Natriumtiosulfaatti toimii rikin lähteenä, kun taas rautasitraatti on paljastava aine. Molemmat yhdisteet mahdollistavat rautasulfidin mustan sakan muodostumisen, joka osoittaa reaktion.

Mustan saostuman, joka on pesäkkeen keskellä ja jossa on läpinäkyvä halo, antaa kalansilmän. Tämä ominaisuus viittaa Salmonella-suvun esiintymiseen.

Lopuksi natriumkloridi ylläpitää osmoottista tasapainoa ja agar antaa kiinteän konsistenssin väliaineelle.

valmistelu

Punnitaan 76 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Ravista seosta voimakkaasti ja anna sen levätä 10 - 15 minuuttia. Se voidaan lämmittää ja keittää, jolloin pyörivät liikkeet ovat täysin purkautuneet. Tätä väliainetta ei ole autoklavoitu.

Kun väliaine saavuttaa noin 45 ° C: n lämpötilan, tilavuus 20 ml kaadetaan suoraan steriileihin Petri-maljoihin..

Agarin annetaan jähmettyä. Tuolloin ne ovat valmiita käyttöön. On suositeltavaa käyttää niitä välittömästi. Jos ne eivät ole mahdollisia, ne on säilytettävä jääkaapissa, kunnes niitä käytetään.

Levyt on poistettava varhain jääkaapista ennen niiden istuttamista huoneenlämpötilaan.

Väliaineen pH: n tulisi olla 7,5 ± 0,2. Dehydratoidun väliaineen väri on violetti ja valmistettu ruskeanvihreäksi.

käyttö

Hektoen-agarin käyttöä suositellaan Shigellan ja Salmonellan suvun bakteerien etsimiseksi ulosteeseen ja elintarvikenäytteisiin..

Mahdollisuus eristää näitä bakteereja lisääntyy huomattavasti, jos näyte on aikaisemmin rikastettu erityisistä liemistä, kuten seleeni- liemi, seleniitti kystiiniliemi, tetrationaattiliemi jne..

Inokulaatin on oltava vahva ja kylvö suoritettava juoksutuksella. Levyjä inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 - 48 tuntia aerobioosissa.

Inkubointia suositellaan 48 tunnin ajan, koska pesäkkeiden ominaisuudet ovat selkeämpiä niiden tulkintaa ja erilaistumista varten.

Laadunvalvonta

Laadunvalvonnan suorittamiseksi tällä väliaineella käytetään sertifioituja bakteerikantoja, kuten: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 ja Shigella sonnei ATCC 25931.

Odotetut tulokset ovat seuraavat: Salmonella typhimurium ja  Salmonella enteritidis niiden on kehitettävä vihreänsinisiä pesäkkeitä mustan keskuksen kanssa tai ilman sitä. Vaikka Shigellan lajit kasvavat sinivihreinä pesäkkeinä.

Voit myös sisältää Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 ja Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Näissä tapauksissa havaitut ominaisuudet ovat seuraavat: E. coli ja K. pneumoniae Tässä väliaineessa ne kehittävät lohen-oranssia pesäkkeitä, joiden ympärillä on samanvärinen sakka. Samalla Proteus kehittää sinivihreitä pesäkkeitä mustan keskuksen kanssa tai ilman sitä.

kun taas S. aureus ja  E. faecalis joskus on estettävä E. faecalis onnistuu kasvamaan keltaisina pesäkkeinä, hyvin pieninä.

Toisaalta, koska tätä elatusainetta ei steriloida autoklaavissa, on tärkeää arvioida väliaineen steriiliys. Siksi jokaista valmistettua erää on inkuboitava yhdestä kahteen levyyn ilman, että niitä siirrostetaan 37 ° C: ssa 24 tuntia aerobioosissa..

On selvää, että levyllä ei ole minkäänlaista kasvua.

rajoituksia

-Proteus-lajit voivat kehittyä tässä ympäristössä ja niiden pesäkkeiden ominaisuudet voidaan sekoittaa Salmonella- tai Shigella-lajeihin. Tästä syystä kaikki epäilyttävät pesäkkeet on vahvistettava biokemiallisilla testeillä.

-Tämän väliaineen käyttö on välttämätöntä liittää muihin vähemmän selektiivisiin agareihin, koska jos haluttu mikro-organismi löytyy alhaisina pitoisuuksina, se ei välttämättä kehitty tällä väliaineella.

-Älä ylikuumene valmistuksen aikana, koska liiallinen kuumuus muuttaa väliaineen koostumusta.

-Epätavallisesti laktoosin fermentoivat Salmonella-pesäkkeet saattavat näkyä huomaamatta.

viittaukset

  1. Wikipedia-avustajat. Hektoen-enterokartta. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. maaliskuuta 2019, 23:38 UTC. Saatavilla osoitteessa: .wikipedia.org / 16.3.2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  3. Laboratories Britania. Hektoen Enteric Agar. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Saatavilla osoitteessa: f-soria.es
  5. Difco & BBL käsikirja, Hektoen Enteric Agar. 2. painos. Saatavilla: bd.com/europe