Agar Endo säätiö, valmistelu ja käyttö



Endo-agar tai väliaine Endo on kiinteä, differentiaalinen viljelyalusta, jolla on tietty selektiivisyys. Alkuperäinen kaava on luotu Endo vuonna 1904 erottamaan laktoosin fermentoivat bakteerit ei-fermentoivista bakteereista. Alussa se oli suunniteltu Salmonella typhi, mutta myöhemmin median tavoite kääntyi etsimään koliformeja.

Endo-agarin periaate on säilytetty, mutta sen muotoilu on vuosien mittaan muuttunut lukemattomasti. Tällä hetkellä väliaine koostuu peptidillä pilkotusta eläinkudoksesta, laktoosista, dikaliumvetyfosfaatista, natriumsulfitista, emäksisestä fuksiinista ja agarista..

Väliaineen pääasiallinen käyttö on liittynyt Enterobacteriaceae-sukuun kuuluvien gram-negatiivisten bakteereiden eristämiseen ja erilaistumiseen sekä muihin läheisiin perheisiin..

Sitä käytettiin pitkään koliformien havaitsemisessa vesi-, meijeri- ja elintarvikenäytteissä, mutta nykyään tämän väliaineen käyttöä on siirtynyt muiden vastaavien toimintojen avulla. Jotkut mikrobiologiset laboratoriot käyttävät tätä agaria kuitenkin Enterobacteriaceae-eristyksen eristämiseksi kliinisestä alkuperästä.

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 Endo-agari
    • 2.2 Agarin m-Endo-muunnos
  • 3 Käytä
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Rajoitukset
  • 6 Viitteet

perusta

Endo-agar sisältää peptoneja, jotka toimivat aminohappojen, typen, hiilen ja energian lähteenä, jotka ovat välttämättömiä vähäisten mikro-organismien kasvulle.

Toisaalta agarin hieman selektiivinen luonne saadaan aikaan lisäämällä natriumsulfiittia ja emäksistä fuksiinia; molemmat komponentit estävät osittain tai kokonaan useimpien grampositiivisten bakteerien kehittymistä.

Ero- merkin antaa fermentoituvan hiilihydraatin läsnäolo, joka tässä tapauksessa on laktoosi ja perusfuksiini, joka toimii myös pH: n indikaattorina..

Gramnegatiiviset bakteerit, jotka kasvavat tällä agarilla ja pystyvät fermentoimaan laktoosia, muodostavat vahvoja vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä; on. \ t Escherichia coli tummanpunaisen pesäkkeen muodostuminen, jossa on vihreä metallinen kiilto. Tämä johtuu hiilihydraattien fermentoinnista johtuvien happojen suuresta tuotannosta.

On huomattava, että pesäkkeiden ympärillä oleva väliaine muuttuu myös vahvaksi vaaleanpunaiseksi. Vaikka laktoosin ei-fermentoivat gram-negatiiviset bakteerit muodostavat vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä, jotka ovat samanlaisia ​​kuin keski- tai väritön.

Dikaliumvetyfosfaatti tasapainottaa väliaineen pH: ta ja agar on komponentti, joka tuottaa kiinteän konsistenssin.

valmistelu

Endo Agar

Punnitaan 41,5 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Kuumenna seosta sekoittaen usein, kunnes väliaine on täysin liuennut. Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: n lämpötilassa 15 minuutin paineessa 15 minuutin ajan.

Kun autoklaavista poistetaan, anna sen jäähtyä noin 45 - 50 ° C: n lämpötilaan, ravista seosta homogenisoimiseksi ennen annostelua. Kaada 20 ml steriileihin Petri-maljoihin.

Anna levyjen jähmettyä, kääntää ja säilyttää laatikossa tai kääri tummalla paperilla ennen säilytystä jääkaapissa. On erittäin tärkeää suojata valmistettua väliainetta suoralta valolta. Suositeltava käytäntö on valmistella tarkka määrä, jota tarvitaan.

Jos niitä säilytetään jääkaapissa, ne on karkaistu ennen käyttöä.

Väliaineen pH: n tulisi olla 7,2 - 7,6 ja valmistetun väliaineen väri on vaaleanpunainen..

Variantti agar m-Endo

Endo-agarilla (m-Endo) on toinen versio, joka noudattaa McCarthyn, Delaneyn ja Grasson kaavaa, joka sisältää enemmän yhdisteitä ja vaihtelee valmistusmuodossa..

Tämä muunnos sisältää: laktoosia, triptoosia, kaseiinin entsymaattista pilkkomista, eläinkudoksen entsymaattista pilkkomista, natriumkloridia, kaksiemäksistä kaliumfosfaattia, natriumsulfiittia, hiivauutetta, kaliumfosfaattia, yksivaiheista, emäksistä fuksiinia, natriumdeoksikolaattia, lauryylisulfaattia natriumia ja agaria.

Tällöin punnitaan 51 g kuivattua väliainetta ja suspendoidaan se 1 litraan tislattua vettä, joka sisältää 20 ml etanolia..

Kuumenna hieman sekoittaen, kunnes väliaine on täysin liuennut. Älä kuumenna ja älä steriloi autoklaavissa. Kun seos on homogeeninen, käytä sitä steriileissä petrimaljoissa ja anna sen kiinteytyä.

käyttö

Joissakin maissa sitä käytetään edelleen koko- ja ulosteen koliformien laskemiseen vedessä ja elintarvikkeiden näytteissä, varsinkin kun on olemassa Escherichia coli ulosteen saastumisen pääasiallisena indikaattorina.

American Public Health Association (APHA) suosittelee M-Endo-agaria desinfiointi- ja jätevedenpuhdistusohjelmien seurantaan ja valvontaan sekä juomaveden laadun arviointiin.

Käytetyin menetelmä on kalvofiltrointi, näytteen rikastamisen jälkeen Lauryl-sulfaatti- liemellä 2-4 tuntia.

Sitä voidaan käyttää myös korvaamaan EMB-agaria elintarvikkeen ja veden mikrobiologisessa analyysissä todennäköisimmällä lukumäärätekniikalla (NMP), erityisesti täydellisessä vahvistusvaiheessa, jolla vahvistetaan E. coli myrkylliset EY-liemet.

Laadunvalvonta

Valmistettujen Endo-agar-erien laadun arvioimiseksi tunnetaan tunnettuja tai sertifioituja kontrollikantoja.

Tähän tarkoitukseen käytettäviä kantoja ovat: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 ja Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Kantoja kylvetään uupumuksella ja inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 tuntia aerobioosissa.

Odotetut tulokset ovat:

  • että Escherichia coli: pesäkkeet ovat vahvoja punaisia, metallinen kiilto.
  • että E. cloacae ja K. pneumoniae pesäkkeiden tulisi olla vaaleanpunainen.
  • S: n tapauksessa. typhimurium, S. flexneri ja P. mirabilis pesäkkeet ovat tavallisesti vaaleanpunaisia ​​tai värittömiä.
  • vihdoin, E. faecalis sen odotetaan olevan osittain estetty, joten sen kasvun pitäisi olla huono hyvin pienillä, vahvan vaaleanpunaisilla pesäkkeillä.

rajoituksia

-Endo-alustalla on alhainen selektiivinen voima, joten on mahdollista, että jotkut grampositiiviset mikro-organismit, kuten Staphylococcus, Enterococcus ja jopa hiivat voivat kasvaa.

-Muut bacillot, jotka eivät kuulu Enterobacteriaceae-perheeseen, voivat kehittyä tässä elatusaineessa, kuten esimerkiksi Pseudomonas sp ja Aeromonas sp. Näiden kantojen ominaisuudet ovat värittömiä epäsäännöllisiä pesäkkeitä.

-Tämä valmistettu väliaine on hyvin herkkä valolle, joten pitkäaikainen altistuminen tästä heikentää indikaattorijärjestelmää, vahingoittamalla peruuttamattomasti väliainetta.

-Väliaineen komponentteja pidetään syöpää aiheuttavina, joten suoraa kosketusta on vältettävä.

-Dehydratoitu väliaine on erittäin hygroskooppinen ja se on säilytettävä alkuperäisessä säiliössä huoneenlämmössä, tiiviisti suljettuna ja kuivassa ympäristössä..

viittaukset

  1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedia, vapaa tietosanakirja. 7. syyskuuta 2017, 08:27 UTC. 28. helmikuuta 2019, 22:55. Saatavana: en.wikipedia.
  4. MercK-laboratorio. Endo-agar 2019. Saatavilla osoitteessa: merckmillipore.com
  5. Laboratories Technical Sheet. M -Endo Agar LES. 2015. Saatavilla osoitteessa: liofilchem.net