Agarin EMB-perusta, valmistelu ja käyttö



EMB-agari on selektiivinen ja differentiaalinen kiinteä viljelyväliaine, jota käytetään gramnegatiivisten bakteerien, pääasiassa Enterobacteriaceae-perheen, ja muiden ei-vaativien gram-negatiivisten bakteerien eristämiseen. Se tunnetaan myös lyhenteellä EAM, joka tarkoittaa eosiini-metyleenisinistä.

Holt-Harris ja Teague loivat tämän väliaineen vuonna 1916. Se sisältää peptonia, laktoosia, sakkaroosia, dikaliumfosfaattia, agaria, eosiinia, metyleenisinistä ja vettä. Se on hyvin samanlainen kuin MacConkey-agarilla, varsinkin jos käytetään Levine-muunnettua EMB-agaria, joka ei sisällä sakkaroosia.

Jokainen laboratorio päättää itse, toimiiko se yhdessä tai toisessa, koska ne täyttävät saman tehtävän, vaikka biokemiallisesti ne ovat erilaisia.

Proteus-suvun tuotannossa on jopa sama haitta kuin klassisessa MacConkey-agarissa. Tämän vuoksi tämän ilmiön välttämiseksi voit lisätä agarin pitoisuutta jopa 5%: iin..

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Valikoiva
    • 1.2
  • 2 Valmistelu
  • 3 Käyttö
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Lopulliset näkökohdat
  • 6 Viitteet

perusta

valikoiva

EMB-agar on hienovarainen selektiivinen, koska se sisältää anilinisia väriaineita (eosiini ja metyleenisiniset), jotka toimivat inhibiittoreina estäen useimpien grampositiivisten bakteerien ja joidenkin vaativien gram-negatiivisten bakteerien kasvua..

Tällä agarilla on kuitenkin se haittapuoli, että jotkut Gram-positiiviset bakteerit voivat vastustaa inhiboivien aineiden läsnäoloa ja kasvaa pieninä värittöminä punctiformisina pesäkkeinä, kuten Enterococcus faecalis ja jotkut stafylokokki.

Voit myös kasvattaa tiettyjä hiivoja, kuten Candida albicans -kompleksi, Se antaa hyvin pieniä vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä. Tästä hiivasta voidaan kehittää jopa klamydosporeja, jos näyte kylvetään syvyydellä.

ero

Toisaalta EMB-agar on myös differentiaalinen väliaine, koska näillä väriaineilla yhdessä (eosiini ja metyleenisiniset) on ominaisuus muodostaa saostuma happamassa pH: ssa, joten ne toimivat niiden tuotannon indikaattoreina..

Siksi heikosti fermentoituvat laktoosi- tai sakkaroosibakteerit tuottavat violetteja pesäkkeitä 24 - 48 tunnin kuluessa. Esimerkiksi suku Klebsiella, Enterobacter ja Serratia.

Ne bakteerit, jotka voimakkaasti fermentoivat laktoosia, kuten Escherichia coli, tai sakkaroosi, kuten Yersinia enterocolitica tai Proteus penneri, muodostavat vihertävän mustan sakan, joka antaa näille lajeille metallisen kiillon.

On huomattava, että jos käytetään EMB-leviiniväliainetta (ilman sakkaroosia), Yersinia enterocolitica ja Proteus penneri ne tuottavat läpinäkyviä pesäkkeitä.

Bakteereja, jotka eivät fermentoi laktoosia tai sakkaroosia, ravitsevat peptonien läsnäololla, jotka tarjoavat bakteerien kehityksessä tarvittavia aminohappoja ja typpeä, ja tuottavat läpinäkyviä pesäkkeitä. Esimerkiksi Salmonella- ja Shigella-suvut.

Samoin on tärkeää huomata, että Acinetobacter-suku voi esittää laventelin sinisen pesäkkeitä, vaikka se ei ole laktoosin eikä sakkaroosin fermentori, mutta niillä on ominaisuus kiinnittää metyleenisinisä soluseinään. Tämä voi tapahtua myös muiden oksidatiivisten bakteerien kanssa.

valmistelu

Alkuperäinen kuivattu väliaine on vaalea beige.

Tämän viljelyalustan valmistamiseksi 36 grammaa dehydratoitua väliainetta on punnittava ja suspendoitava injektiopulloon, joka sisältää yhden litran tislattua vettä..

Kun seos on jätetty 5 minuutin ajaksi lepoon, tuo fiola lämpölähteeseen, sekoita voimakkaasti ja jatkuvasti, kunnes se kiehuu ja se on täysin liuennut..

Tämän jälkeen liuenneen viljelyalustan on oltava steriloitu käyttäen autoklaavia 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Ajan päätyttyä se poistetaan autoklaavista ja jätetään jäämään hetkeksi. Sitten sitä käytetään jopa kuumana (45 - 50 ° C) 15 - 20 ml agaria kussakin steriilissä petri-astiassa. Välineen tulisi olla sininen litmus.

Levyjen tarjoamisen jälkeen levyt jätetään hieman paljaiksi, kunnes agari jäähtyy hieman. Sitten ne peitetään ja niiden annetaan kovettua kokonaan. Myöhemmin ne tilataan käänteiseen plakin pidikkeeseen ja säilytetään jääkaapissa (8 ° C), kunnes niitä käytetään.

Tämä toimenpide suoritetaan edullisesti laminaarivirtaushupussa tai Bunsen-polttimen edessä saastumisen välttämiseksi.

On tärkeää pitää mielessä, että jokainen kaupallinen talo ilmoittaa punnittavan määrän kasvualustan valmistamiseksi.

Väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,2 ± 0,2

sovellukset

Tätä väliainetta käytetään kylvämään virtsaa ja ulosteita tai minkä tahansa tyyppisiä kliinisiä näytteitä, varsinkin jos epäillään Gram-negatiivisia bakteereita, kuten Enterobacteriaceae-sukuun kuuluvia bakteereja, jotka kasvavat hyvin tällä väliaineella.

Shigellan ja Salmonellan suvun enteropatogeeniset bakteerit erottuvat väritöntä tai hieman meripihkaisia ​​pesäkkeitä.

Myös muita fermentoimattomia laktoosibakileja kasvaa muun muassa Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Samoin tämä elatusaine on hyvin käyttökelpoinen ruoan ja veden mikrobiologisessa analyysissä, koska se on ihanteellinen koliformien määrittämisen täydelliseen vahvistusvaiheeseen, so. E. coli myrkyllisiä EY-liemiä, todennäköisimpiä numerotekniikoita (NMP) \ t.

Laadunvalvonta

Sen varmistamiseksi, että äskettäin viljelty viljelyväliaine toimii hyvin, voidaan kontrollikantoja istuttaa tarkkailemaan pesäkkeiden ominaisuuksia ja varmistamaan, että ne antavat odotetusti.

Tätä varten ATCC-kannat tai hyvin tunnistetut kannat E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa ja jotkut grampositiiviset bakteerit, kuten S. aureus.

On odotettavissa, että E. coli Luo hyvin kehittyneitä sinertävän mustia pesäkkeitä, joissa on vihreä metallinen kiilto. Niin kauan kuin, Enterobacter aerogenes ja Klebsiella sp niiden on annettava hyvin kehittyneet limakalvot sinertävä-musta.

Oman puolestaan, salmonella typhimurium ja Shigella flexneri, niiden on kehitettävä suuria pesäkkeitä, jotka ovat väritöntä tai hieman väriltään keltaista.

Lopuksi genre Pseudomonas aeruginosa se kasvaa värittöminä pesäkkeinä, joiden koko on epäsäännöllinen, kun taas grampositiiviset bakteerit on täysin estettävä tai kasvava säästäväisesti hyvin pienillä pesäkkeillä.

Lopulliset näkökohdat

Joskus sterilointi saa metyleenisinisen vähentymään, kun otetaan huomioon oranssi elatusaine. Jotta metyleenisiniset hapettuvat ja purppuran väri palautuisi, se on sekoitettava varovasti, kunnes väri palautuu.

Steriloinnin jälkeen väriaine voi myös saostua, joten se on sekoitettava hyvin ennen Petri-astioiden tarjoamista.

viittaukset

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. 2009. Elintarvikkeiden mikrobiologisen analyysin tekniikat. 2nd ed. Kemian tiedekunta, UNAM. Meksiko.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. \ t Escherichia coli Potentiaalisesti patogeeniset eristetyt siipikarjan broileri siipikarjatiloilta Perussa. Rev. vet. Peru 2012 23 (2): 209-219. Saatavilla osoitteessa: scielo.org.
  3. Laboratories Conda S.A. Eosiiniagar ja metyleenisiniset. 2010. Saatavilla osoitteessa: condalab.com
  4. Laboratories Britania. Levine E.M.B (With Eosin ja Methylene Blue) 2011. Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin-metyleenisiniset agarit), muokattu. 2013. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, toimittaja Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen