Agar CLED -perusta, käyttö ja valmistus

CLED-agar (Kystiini-laktoosi-elektrolyytit-puutteellinen) on erilainen kiinteä viljelyväliaine, jota käytetään virtsateiden infektioiden diagnosointiin. Viljelyalustan koostumus on suunniteltu virtsatie- patogeenien hyvää kasvua varten ja on ihanteellinen pesäkkeiden muodostavien yksiköiden (CFU) kvantifioimiseksi..

CLED-viljelyväliaine ei ole selektiivinen, koska siinä voi kasvaa gram-negatiivisia ja myös grampositiivisia mikro-organismeja. Tämä ei kuitenkaan ole ongelma, koska useimmat virtsateiden infektiot johtuvat yksittäisestä mikro-organismityypistä.

Polymikrobisten infektioiden tapauksessa voidaan saada 2 tai 3 erilaista bakteeria, mutta se on hyvin harvinaista ja suurimmaksi osaksi se on saastunut näyte.

Gram-negatiivisissa bakteereissa, jotka voivat kasvaa tässä elatusaineessa, ovat perheeseen kuuluvat bacillit enterobacteriaceae ja muut suolistossa olevat bacillot, joita uropatogeenit eristetään useimmiten virtsanäytteissä, seuraavaa: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, muun muassa.

Samoin Gram-positiivisten bakteerien joukossa, jotka voivat kasvaa tässä elatusaineessa, ovat Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp. ja ne voivat jopa kasvaa hiivaa, kuten monimutkainen Candida albicans.

Kuitenkin elatusaineen kemiallisen koostumuksen vuoksi se ei salli joidenkin vaativien urologisten patogeenien, kuten Neisseria gonorrhoeae, Gardnerellaa vaginalis, muun muassa.

indeksi

• 1 CLED-agarin perustaminen
• 2 CLED-agarin perustaminen (Bevis)
• 3 Käyttö
  • 3.1 Virtsanäytteiden kylväminen
  • 3.2 Tulkkaus
  • 3.3 Tunnistaminen
• 4 Valmistelu
• 5 Viitteet

CLED-agarin perustaminen

CLED-viljelyalustalla on energialähteen lihauute, kaseiinin haiman hydrolysaatti ja gelatiinihydrolysaatti. Ne tarjoavat ravinteita tarpeettomien bakteerien kehittymiselle.

Se sisältää myös kystiinia, aminohappoa, joka sallii koliformien kasvun, joka erottuu sen pienestä koosta.

Samoin laktoosi sisältää fermentoitavaa hiilihydraattia, tästä syystä tämä väliaine on differentiaalinen; kykenee erottamaan fermentoivat bakteerit ei-fermentoivasta laktoosista.

Fermentoivat bakteerit kääntävät elatusaineen pH-arvoa happojen valmistuksella, kehittävät keltaisia ​​pesäkkeitä, kun taas ei-fermentoivat bakteerit eivät aiheuta muutoksia väliaineessa, joten ne ottavat alkuperäisen agarin värin, vihreän värin.

Fermentointireaktio paljastuu pH-indikaattorin läsnäolon ansiosta, joka tässä kasvualustassa on bromitymolin sininen.

Toisaalta väliaineen alhainen elektrolyyttikonsentraatio estää suvun tyypillisen invasiivisen kasvun Proteus, kutsutaan swarming-vaikutukseksi. Tämä luo etua muihin keinoihin nähden, koska se sallii UFC: ien laskemisen, myös Proteus-suvun ollessa läsnä.

Kuitenkin elektrolyyttien alhainen pitoisuus estää joidenkin suvun lajien kasvua Shigella, tämä on epäedullinen suhteessa muihin keinoihin.

CLED-agarin (Bevis) perusta

Bevis on tehnyt tämän väliaineen muunnoksen tai muunnoksen, joka sisällytti alkuperäisen fuchsinihappokoostumuksen (Andrade-indikaattori) alkuperäiseen koostumukseen. Se toimii yhdessä bromimyymisinisen kanssa erilaistamaan fermentointia ei-fermentoivista bakteereista.

Tavanomaisen ja modifioidun väliaineen välinen ero on pesäkkeiden hyväksymä väri. Laktoosin fermentoivien bakteerien tapauksessa pesäkkeet saavat punertavan oranssin värin vaaleanpunaisella tai punaisella halolla, kun taas ei-fermentoivat ovat sinertävän harmaita..

sovellukset

CLED-agaria käytetään yksinomaan virtsanäytteiden kylvämiseen. Tämän väliaineen käyttö on erityisen yleistä eurooppalaisissa laboratorioissa, kun taas Amerikassa sitä käytetään vähemmän.

Näytteen keräämisen on täytettävä tietyt parametrit luotettavien tulosten saamiseksi, mukaan lukien:

• Ei ota antibiootteja ennen näytteen ottamista.
• Ota virtsa mieluiten aamun ensimmäisestä tunnista, koska se on keskittyneempi, kun näytteitä ei voida ottaa invasiivisilla menetelmillä.
• Pese sukupuolielimet perusteellisesti ennen näytteen ottamista.
• Hävitä ensimmäinen virtsaamisvirta ja aseta säiliö.
• Kerätään 25–30 ml virtsaa steriileihin leimattuihin astioihin.
• Ota välittömästi laboratorioon, jota ympäröi jää.
• Se on käsiteltävä ennen 2 tunnin päästöjä tai jäähdytettävä 4 ° C: ssa enintään 24 tuntia.

Virtsanäytteiden kylväminen

Virtsanäyte on laimennettava 1:50.

Laimennusta varten laitetaan 0,5 ml potilaan virtsaa ja laimennetaan 24,5 ml: lla steriiliä fysiologista liuosta.

Mittaa 0,1 ml laimennettua virtsaa ja kylvää pintaan drigalski-lastalla CLED-alustassa. Tämä on kylvömenetelmä, joka on tarkoitettu pesäkkeiden laskemiseen. Siksi sitä käytetään virtsanäytteissä, koska tulokset on ilmoitettava CFU / ml.

Saatujen pesäkkeiden kvantifiointi tapahtuu seuraavasti: lasketaan levyn pesäkkeet ja kerrotaan 10: llä ja 50: llä. Näin saat virtsan CFU / ml: n määrän..

tulkinta

Laskettaessa yli 100 000 CFU / ml -indikaattorin virtsatieinfektiota

Lasketaan alle 1 000 CFU / ml - Ei infektiota

Lasketaan välillä 1000-10 000 CFU / ml - epäilyttävä, mahdollinen kontaminaatio, toistuva näytteenotto.

tunnistaminen

CLED-agarilla kasvatetut pesäkkeet tulisi tehdä grammaksi ja mikro-organismin morfiittisistä ominaisuuksista riippuen suoritetaan tietty subkultuuri.

Esimerkiksi, jos se on Gram-negatiivinen bacillus, se kylvetään MacConkey-agarilla, jossa laktoosin fermentointi on vahvistettu. Lisäksi on kiinnitetty ravitsevaa agaria oksidaasitestin suorittamiseksi.

Jos gramma paljastaa grampositiiviset kookit, se voidaan subkultoida suolaisessa mannitoli-agarissa ja ravitsevassa agarissa. Jälkimmäisessä suoritetaan katalaasitesti. Lopuksi, jos havaitaan hiivoja, se kylvetään Sabouraud-agarilla.

Monet laboratoriot estävät CLED-väliaineen käytön ja käyttävät mieluummin vain veriagaria, MacConkey- ja ravitsevaa agaria kylvämään virtsanäytteitä.

valmistelu

Yhdessä litraan tislattua vettä sisältävässä injektiopullossa liuotetaan 36,2 g jauhettua CLED-agaria. 5 minuutin lepoajan jälkeen lämmitetään uudelleen suspendoitua agaria, sekoittaen jatkuvasti kiehuvaksi 1 minuutiksi.

Sitten steriloidaan 121 ° C: ssa 15 minuuttia autoklaavissa. Kun aika on päättynyt, se poistetaan autoklaavista ja sen annetaan jäähtyä, kunnes lämpötila on 45 ° C. Myöhemmin annettiin 15 - 20 ml kussakin steriilissä Petri-astiassa.

Levyjen annostelumenetelmä on suoritettava laminaarisen virtaussuojuksen sisällä tai Bunsen-polttimen edessä saastumisen välttämiseksi..

Tarjottujen levyjen annetaan jähmettyä, tilataan levynpidikkeeseen ylösalaisin ja säilytetään jääkaapissa (2-8 ° C) käyttöön asti.

Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,3 ± 0,2.

viittaukset

1. Suositukset virtsateiden infektioiden mikrobiologista diagnosointia varten. chil. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Saatavilla osoitteessa: scielo.org.
2. Panchi J. Mikrobilääkkeen tunnistaminen, joka aiheuttaa virtsatulehduksia sisäpotilailla, joille tehdään virtsarakon katetrointi. 2016. Yliopistotyöt hakea lisensiaatin nimeä kliinisessä laboratoriossa. Ambatin teknillinen yliopisto. Ecuador.
3. Laboratories Britania. Half CLED. Saatavilla osoitteessa: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories Käyttöohjeet, CLED Agar. 2013 Saatavilla osoitteessa: www.renylab.ind.br.
5. Viljellyt laboratoriot Mikrobiologian peruskäsikirja. Saatavilla osoitteessa: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED-agarin vaihtoehto virtsakulttuurirutiinissa. Tulevaisuuden ja vertaileva arviointi. Diagnostinen Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA-julkaisupalvelu.