Simmons-sitraatti-agarin perusta, valmistus ja käyttö



Simmons-sitraatti-agari Se on kiinteä väliaine, jota käytetään biokemiallisena testinä mikro-organismien, erityisesti gram-negatiivisten bakteerien tunnistamiseksi. Alkuperäinen väline luotiin Koserin vuonna 1923.

Koserin sitraattiväliaine koostui liemestä, joka sisälsi natriumfosfaattia, ammoniumfosfaattia, monokaliumfosfaattia, magnesiumsulfaattia ja natriumsitraattia..

Kuten voidaan nähdä, ainoa hiililähde väliaineessa on sitraatti, ja typpi on ammoniumfosfaatti, proteiinit ja hiilihydraatit jätetään näiden alkuaineiden lähteenä, ne ovat tavallisesti läsnä muissa väliaineissa..

Siksi kyseiseen väliaineeseen inokuloitu bakteeri voi lisääntyä vain, jos se kykenee ottamaan sitraattihiiltä. Testi oli positiivinen, jos väliaineessa oli sameutta, mutta sillä oli se haittapuoli, että epäspesifinen sameus voi esiintyä.

Tämä ongelma ratkaistiin Simmonsin avulla lisäämällä agarin ja bromotymolin sinisen Koserin alkuperäiseen kaavaan. Vaikka periaate on sama, sitä tulkitaan eri tavalla.

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Kylvötila
    • 1.2 Tulkkaus
  • 2 Valmistelu
  • 3 Käytä
  • 4 Lopulliset näkökohdat
    • 4.1 Inokulaatti
    • 4.2 Seeded
    • 4.3 Värin voimakkuus
  • 5 Viitteet

perusta

Joillakin bakteereilla on kyky selviytyä ilman maitohapon fermentaatiota tai tuotantoa, ja niiden täytyy saada energiaa käyttämällä muita substraatteja. Tässä testissä ainoa tarjottu hiilen lähde on sitraatti.

Bakteerit, jotka kykenevät selviytymään näissä olosuhteissa, metaboloivat sitraatin nopeasti perinteisen reitin vaihtoehdon avulla käyttämällä trikarboksyylihapposykliä tai sitraattikäsittelysykliä.

Sitraatin katabolia bakteereilla käsittää entsymaattisen mekanismin ilman koentsyymi A: ta. Tätä entsyymiä kutsutaan sitraasiksi (sitraattioksaloasetaatti-lyaasi) tai sitraatti-desmolaasiksi. Reaktio vaatii kaksiarvoisen kationin läsnäolon, joka tässä tapauksessa toimitetaan magnesiumin avulla.

Reaktio tuottaa oksaloasetaattia ja pyruvaattia, joka sitten synnyttää orgaanisia happoja emäksisen pH: n keskellä, joka muodostuu käyttämällä typpilähdettä. Näitä orgaanisia happoja käytetään hiililähteenä, joka tuottaa karbonaatteja ja bikarbonaatteja, edelleen alkaloimalla väliaine.

Kylvötila

Simmons-sitraattiväliainetta on siirrettävä kevyesti kalaan hännään käyttäen suoraa silmukkaa tai neulaa ja inkuboidaan 24 tuntia 35-37 ° C: ssa. Ajan lopussa tulokset havaitaan.

Kylvö tapahtuu vain agarin pinnalla. Älä tee lävistyksiä.

tulkinta

Jos väliaine on alkuperäisen värin (vihreä) ja ei ole näkyvää kasvua, testi on negatiivinen, mutta jos väliaine muuttuu siniseksi, se osoittaa alkalisten tuotteiden läsnäolon, joka havaitaan pH-indikaattorin avulla. Tällöin testi on positiivinen.

Tämä johtuu siitä, että jos bakteeri käyttää sitraatin hiiltä, ​​se pystyy myös ottamaan ammoniumfosfaatin typen, jonka kanssa se vapauttaa ammoniakkia, alkalisoimalla väliaine.

Toisaalta, jos bakteerien kasvua havaitaan elatusaineessa, mutta väri ei muutu, testiä on pidettävä myös positiivisena, koska jos kasvua on, se tarkoittaa, että bakteerit pystyivät käyttämään sitraattia hiililähteenä, vaikka pH ei muutu tällä hetkellä (joskus se voi kestää).

Jos lopullisen värin tulkinnassa on epäilyksiä, sitä voidaan verrata tarttumattoman sitraatin putkeen.

valmistelu

Punnitaan 24,2 g kuivattua väliainetta yhden litran vettä kohti. Sekoita ja anna seistä noin 5 minuuttia. Lopuksi liuotetaan väliaine kuumentamalla 1 tai 2 minuuttia sekoittaen usein.

Tarjoile 4 ml koeputkissa ja autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuuttia. Kun autoklaavista poistutaan, kallistetaan tukikappaleen avulla siten, että agar jähmettyy huilunhuipun muodossa, jossa on vähän piikkiä tai pohjaa ja enemmän viistoa.

Sitraattiväliaineen lopullinen pH on 6,9 (vihreä). Tämä väliaine on hyvin herkkä pH-muutokselle.

PH 6: ssa tai sen alapuolella väliaine muuttuu keltaiseksi. Tätä väriä ei havaita bakteereja koskevassa testissä.

Ja pH: ssa 7,6 tai sitä korkeammalla keskiarvo muuttuu voimakkaaksi Preussin siniseksi.

käyttö

Simmons-sitraatti-agaria käytetään tiettyjen mikro-organismien, erityisesti Enterobacteriaceae-sukuun kuuluvien bakteerien, tunnistamiseen ja muihin glukoosi-fermentoimattomiin bakteereihin..

Lopulliset näkökohdat

Simmons-sitraattiväliaine on erittäin herkkä testi, koska vääriä positiivisia tuloksia voidaan saada, jos tehdään tiettyjä virheitä.

Varovaisuutta on noudatettava seuraavasti:

ymppiä

Älä tee kovin paksua tai kuormitettua bakteeri-inokulaattia, koska se voi aiheuttaa istutuskohdassa keltaisen värin kehittymisen vaikuttamatta muuhun väliaineeseen, mutta se voi johtaa siihen, että kasvua on. Sama ei tarkoita testin positiivisuutta.

Samoin paksu inokulaatti voi tuottaa vääriä positiivisia, koska esivalmistetut orgaaniset yhdisteet kuolevat bakteerien soluseinämissä voivat vapauttaa tarpeeksi hiiltä ja typpeä pH-indikaattorin kääntämiseksi.

Siksi ihanteellinen on istuttaa neulaa platina- kahvan sijasta, jotta vältetään ylimääräisen materiaalin ottaminen.

istutettu

Toisaalta, kun biokemiallisten testien akkua istutetaan kyseessä olevan mikro-organismin tunnistamiseksi, on tärkeää, että sitraatti- testi on ensimmäinen, joka siirretään, jotta vältetään proteiinien tai hiilihydraattien vetäminen toisesta väliaineesta.

Tässä tilanteessa on mahdollista saada vääriä positiivisia, koska jokin näistä virheellisesti tuotuista aineista metaboloituu ja aiheuttaa pH: n muutoksen..

Toinen tapa välttää aineiden vetäminen on polttaa kahva hyvin ja ottaa uusi inokulaatti yhden testin ja toisen välillä.

Varovaisuutta on myös noudatettava kosketettaessa siirtokuntaa inokulaatin suorittamiseksi, koska on vältettävä vetää osaa agaria viljelmästä, josta bakteerit tulevat, johtuen aikaisemmin selostetusta.

Tässä mielessä Matsen, Sherris ja Branson suosittelevat inokulaatin laimentamista fysiologisessa liuoksessa ennen kuin sitraattitesti siirrostetaan muiden hiililähteiden siirron välttämiseksi.

Värin voimakkuus

On otettava huomioon, että testin ollessa positiivinen, tuotetun värin voimakkuus voi vaihdella kaupallisen talon mukaan.

Lisäksi on olemassa mikro-organismeja, jotka testaavat positiivisia 24 tunnin aikana, mutta on muitakin kantoja, jotka vaativat 48 tuntia tai enemmän pH-arvon muutoksen aikaansaamiseksi..

viittaukset

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisesti merkittävien bakteerien tunnistamiseksi. 3. ed. Toimituksellinen Panamericana. Buenos Aires Argentiina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5th ed. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  5. Laboratories Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2016. Saatavilla osoitteessa: andinamedica.com.