Agar-suklaapohja, käyttö ja valmistus



suklaa-agar se on kiinteä, rikastettu, ei-selektiivinen ja ei-differentiaalinen kasvualusta. Sitä käytetään pääasiassa ravitsemuksellisesta näkökulmasta vaativien mikro-organismien eristämiseen, vaikka se voi kasvattaa minkä tahansa tyyppisiä bakteereja.

Siksi sen käyttökelpoisuus kasvaa etenkin normaalisti steriilien näytteiden, kuten CSF: n ja nivelnesteen, kylvämisessä. Vaikka se on sisällytetty myös keinoihin, jotka on valittu polymikrobisten näytteiden kylvämiseen, mutta näissä tapauksissa on tarpeen lisätä antibiootteja, jotka estävät samanaikaisen kasviston.

Tällä väliaineella on tyypillinen ruskea väri, joka on hyvin samanlainen kuin suklaa, joten sen nimi on. Valmiste on hyvin samankaltainen kuin veri-agarilla, vain tässä tapauksessa veri on lämmitettävä, jotta punasolut rikkoutuvat.

Sen valmistus, kuten veriagar, on hyvin herkkä, koska se on helposti saastuttavaa. Tästä syystä monet laboratoriot haluavat hankkia tämän väliaineen, joka on jo valmistettu kaupallisten talojen laatua.

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Käyttö
    • 2.1 Columbia-agarilla valmistettu suklaagar
    • 2.2 Suklaagar, joka on valmistettu GC-emäsagarilla (gonokokkeille)
    • 2.3 Suklaagar, joka on valmistettu Müeller Hintonin agarilla
    • 2.4 Thayer Martin agarilla valmistettu suklaagar
  • 3 Valmistelu
    • 3.1 Laskelmat
    • 3.2 Punnitaan ja liuotetaan
    • 3.3 Steriloi
    • 3.4 Veren aggregaatio
    • 3.5 Toinen tapa valmistaa suklaa-agaria ilman verta
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Viitteet

perusta

Tämä väliaine koostuu agarista, joka sisältää runsaasti ravinteita ja kuumennettua verta. Punasolujen hemolyysissä on tekijä X (hemin) ja tekijä V (NAD), jotka ovat välttämättömiä joidenkin mikro-organismien, kuten suvun, kasvulle. Haemophilus. Se on myös erittäin hyödyllinen Neisserias sp.

Verinäytteen tapaan erilaisia ​​väliaineita voidaan käyttää perusagarina tarpeen mukaan. Käytettyjen välineiden joukossa ovat aivojen sydämen infuusio ja tryptikaasi-soija-agar, vaikka suositeltavimpia ovat Columbia-agar, Müeller Hinton, GC-agar ja Thayer Martin-agar..

Joitakin suklaa-agarin variantteja ovat kaupallisesti saatavilla oleva rikastettu lisäaine, jota kutsutaan nimellä Isovitalex tai Polivitex.

Nämä lisäravinteet sisältävät B-vitamiinia12, L-glutamiini, adeniini, guaniinihydrokloridi, p-aminobentsoehappo, nikotiiniamidiadenukleotidi (NAD), tiamiinipyrofosfaatti, ferriumnitraatti, tiamiinihydrokloridi, kysteiinihydrokloridi, L-kystiini ja glukoosi.

On tärkeää huomata, että suklaa-agari on enemmän rikastettua kuin veriagar, mutta ei salli hemolyysikuvioiden tarkkailua.

sovellukset

Suklaagar, joka on valmistettu Columbia-agarilla

Tämä väliaine sisältää kaseiinia ja sydämen haiman digestoitua, pilkottua lihapeptidiä, natriumkloridia, agaria, hiivauutetta ja maissitärkkelystä. Se on myös runsaasti vitamiineja, mineraaleja ja välttämättömiä aminohappoja.

Tämä pohja, jossa on lämmitetty veri, on ihanteellinen Neisseria-suvun bakteerien eristämiseen. Toisaalta, jos lisäaine Brucellalle lisätään väliaineeseen, edellä mainittu mikro-organismi voidaan eristää. Tuloksia parannetaan hevosen veren avulla.

Suklaagar, joka on valmistettu GC-emäsagarilla (gonokokkeille)

Tämä väliaine sisältää peptoneja, maissitärkkelystä, mono- ja kaksiemäksisiä puskureita, natriumkloridia ja agaria.

Useimmat kaupallisesti valmistetut suklaa-agar-esitykset tulevat tämän emäksen mukana, eivätkä sisällä kuumennettua verta, vaan synteettistä heminin seosta ja kasvutekijöiden, vitamiinien, mineraalien, aminohappojen, tekijän V ja glukoosin kemiallista lisäystä..

Suklaagar, joka on valmistettu Müeller Hintonin agarilla

Sitä käytetään vaativien mikro-organismien, kuten Streptococcus pneumoniae käyttäen 5% kuumennettua ram-verta.

Se palvelee myös Neisseriasin ja Haemophiluksen ensisijaista eristämistä, mutta erityisessä tapauksessa Haemophilus hevosen veren käyttö on edullista, koska se on rikas tekijä X: n ja V: n lähde.

Toisaalta, jos kylvettävä näyte tulee ei-steriilistä alueesta, suositellaan antibioottien lisäämistä alueen normaalin kasviston estämiseksi..

Esimerkki hengityselimistä, joissa epäillään sukuun kuuluvien bakteerien läsnäoloa Haemophilus Bacitracinia käytetään estämään kasvun Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus ja Saprophytic Neisseria.

Sellaisten sukuelinten näytteiden osalta, joissa sitä epäillään Haemophilus ducreyi, Seuraavalla tavalla valmistettua suklaagaria on käytetty onnistuneesti: Müeller-Hinton-agar, jossa on 5% chocolatized hevosen verta, 1% Isovitalex-rikastus ja 3 μg / ml vankomysiiniä.

Suklaagar, joka on valmistettu Thayer Martin agarilla

Tämä väline on erityinen eristys Neisseria gonorrhoeae. Sen on sisällettävä antibiootteja, jotka estävät mukana olevan kasviston. Käytetään karitsan verta.

valmistelu

Käytettävän emäksisen agarin valmistusta koskevat ohjeet tulisi nähdä. Ne ovat dehydratoidun väliaineen pakkauksen takana. Ne kuvaavat yleensä, kuinka paljon punnitaan yhden litran viljelyalustan valmistamiseksi.

Laboratoriossa voit valmistaa tarvittavan määrän, se voi olla enemmän tai vähemmän kuin yksi litra.

laskelmat

Kolmen säännön tarkoituksena on laskea, kuinka paljon punnitaan halutun tilavuuden valmistamiseksi. esimerkiksi:

Jos 1 litran paino on tarpeen painaa 40 grammaa ja laboratorio tarvitsee 800 ml, sanotaan:

1000 ml -40 g

800 ml - X

Kaava on seuraava:

X = 32 gr (määrä, jonka paino on 800 ml).

Punnitaan ja liuotetaan

Punnitsemme tarvittavan määrän ja asetamme sen vedessä olevaan fiolaan.

Kuumennetaan kohtuulliseen kuumuuteen ja sekoitetaan kevyesti pyörivillä liikkeillä, kunnes kuivattu väliaine on täysin liuennut, jolloin sen annetaan kiehua 1 minuutti.

steriloida

Fiola lisätään autoklaaviin väliaineen steriloimiseksi 121 ° C: ssa 20 minuutin ajan.

Veren koko

Kun autoklaavi poistuu, se jätetään lepotilaan, kunnes väliaineen lämpötila on noin 56-70 ° C veren sijoittamiseksi ja sekoittumaan, kunnes väliaine muuttuu ruskeaksi.

Jos aiot lisätä täydennyksiä, on aika tehdä se. Sen jälkeen sekoitetaan ja annetaan 20 ml kutakin steriiliä Petri-maljaa.

Koko toimenpide on suoritettava laminaarivirtaushupussa tai Bunsen-polttimen ympärillä.

Anna seistä, kunnes ne jähmettyy ja säilytetään jääkaapissa.

Toinen tapa valmistaa suklaa-agaria ilman verta

Emäsväliaine valmistetaan kuten edellä on kuvattu, kaupallisesti saatua dehydratoitua hemoglobiinia liuotetaan ja steriloidaan autoklaavissa.

Molempien liuosten annetaan jäähtyä 50 ° C: seen, liittyä ja lisätä lisäaine. Sekoita aseptisissa olosuhteissa ja sitten käytä steriileissä petrimaljoissa.

Laadunvalvonta

On tärkeää, että veri asetetaan ilmoitettuun lämpötilaan, koska se on ihanteellinen punasolujen hajottamiseksi ja samalla säilyttää lämpöherkkä tekijä V.

Agarin pinnalla ei saa olla kuplia. Jokainen 100 levyn erä on inkuboitava yksi tai kaksi levyä uunissa 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan sen steriiliyden tarkistamiseksi..

Parhaan tuloksen saamiseksi suklaa-agaria tulisi käyttää pian valmistuksen jälkeen.

Laboratoriossa on otettava kontrollibakteerikantoja, jotta voidaan arvioida juuri valmistetun väliaineen tehokkuus tärkeimpien vaativien mikro-organismien kasvua varten..

viittaukset

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA-julkaisupalvelu.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiinassa. Panamericana S.A Toimituksellinen.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, toimittaja Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. GC-Biocen Agarin perusviljelyalustan käyttökelpoisuus mikrobiologian laboratoriossa. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237 - 238. Saatavilla osoitteessa: scielo.sld.
  5. Wikipedia-avustajat. Suklaagar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. joulukuuta 2018, 19:54 UTC. Saatavilla osoitteessa: en.wikipedia.org.