Agarin BHI-pohja, valmistus ja käyttö



BHI-agari tai aivojen sydämen infuusioagar on ravitseva kiinteä viljelyväliaine. Espanjassa viitataan siihen aivojen sydäninfuusionagarina. Se on ei-selektiivinen viljelyväliaine, mikä tarkoittaa, että voidaan kehittää kaikenlaisia ​​Gram-positiivisia ja Gram-negatiivisia bakteereja sekä joitakin hiiva- ja rihmasieniä.

Se koostuu vasikan aivoista ja sydämen infuusiosta, eläinkudosten peptisestä hydrolysaatista, kaseiinin haiman hydrolysaatista, natriumkloridista, glukoosista, dinatriumfosfaatista ja agarista..

On huomattava, että BHI-agar on yksi yleisimpiä kasvualustoja bakteriologisissa laboratorioissa. Sitä voidaan käyttää ilman lisäravinteita ensisijaisena viljelmänä, muissa selektiivisissä väliaineissa saatujen pesäkkeiden subkultuurina tai kannan ylläpitämiseksi laboratoriossa.

Toisaalta se on ihanteellinen väliaine käytettäväksi emäksenä rikastetun väliaineen, kuten veren agarin ja suklaa- agarin valmistuksessa. Molemmat ovat ihanteellisia vaativien mikro-organismien eristämiseksi ravitsemuksellisesta näkökulmasta. On kuitenkin otettava huomioon, että koska se sisältää glukoosia, ei ole riittävästi havaita hemolyysin malleja.

Samoin BHI-agaria voidaan käyttää erityisten välineiden valmistamiseen patogeenisten mikro-organismien eristämiseksi, joilla on vaikea kasvu tavallisissa väliaineissa, mukaan lukien: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae ja Histoplasma capsulatum.

Antibioottisen lisäaineen BHI-agarista tulee selektiivinen väliaine sienien eristämiseksi.

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 Kiilat
    • 2.2 Levyt
    • 2.3 Veren agarin valmistus
  • 3 Käyttö
    • 3.1 Käytä ilman lisäravinteita
    • 3.2 Pohjaagarina muiden väliaineiden valmistamiseksi
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Viitteet

perusta

Se on ravitseva viljelyväliaine, joka eristää kohtalaisen vaativia mikro-organismeja ja joka pystyy lisäämään sen rikastumista lisäämällä verta ja muita ravintolisäaineita.

Se on ei-selektiivinen viljelyväliaine, joten se sallii useimpien grampositiivisten ja gram-negatiivisten bakteerien sekä joidenkin sienien kasvun. Se voi kuitenkin tulla valikoivaksi lisäämällä antibiootteja.

Väliaine sisältää vasikan aivojen ja sydämen infuusion, eläinkudoksista peräisin olevan peptidihydrolysaatin ja kaseiinin haiman hydrolysaatin; kaikki nämä yhdisteet toimivat vitamiinien, aminohappojen, typen ja hiilen lähteinä.

Glukoosi on hiilihydraatti, joka tuottaa energiaa mikro-organismeille, kun ne ovat fermentoineet sen. Natriumkloridi ja dinatriumfosfaatti säilyttävät osmoottisen tasapainon ja tarjoavat pH: n lähellä neutraalia. Lopuksi agar antaa väliaineelle kiinteän konsistenssin.

valmistelu

Punnitaan 52 grammaa kuivattua väliainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Tuo seos lämmönlähteeseen, kunnes se kiehuu, sekoittaen usein liukenemisprosessin aikana.

Voit valmistaa kiiloja tai levyjä BHI-agarista ilman lisäaineita.

kiilat

Kiilojen valmistamiseksi palvella valmistetta kunnes täytetään puolet kustakin putkesta, peitä ja steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan, kun menee ulos pohjaan, kunnes ne kiinteytyvät. Sitten säilytä jääkaapissa ennen käyttöä.

levyt

Liuotettu seos autoklavoidaan 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan, kun se lähtee, sen annetaan jäähtyä 50 ° C: seen ja 20 ml väliainetta annetaan steriileissä Petri-maljoissa. Niiden annetaan jähmettyä, kääntää ja säilyttää jääkaapissa, kunnes niitä käytetään. Anna levyt ottaa huoneenlämpötilaa ennen istutusta.

Väliaineen pH: n tulisi olla 7,4 ± 0,2.

Valmistamaton väliaine on beige ja valmistettu kevyesti keltaisena.

Veren agarin valmistus

Elatusaineen steriloinnin jälkeen se jäähdytetään noin 45 - 50 ° C: n lämpötilaan, tällä hetkellä lisätään veri (50 ml), sekoitetaan varovasti homogenisoimiseksi ja aseptisesti palvelemaan 20 ml kutakin Petri-astiaa. Jos levylle muodostuu kuplia, polttimen liekki tulee siirtää nopeasti kuplien yli niiden poistamiseksi.

Samoin erityisiä väliaineita voidaan valmistaa lisäämällä vastaavat lisäaineet, kun seos saavuttaa lämpötilan 45 - 50 ° C.

Väliaine on kirsikanpunainen.

sovellukset

Käytä ilman lisäravinteita

BHI-agar ilman lisäaineita on käyttökelpoinen primääriviljelmänä ja puhtaiden mikro-organismikantojen istuttamiseen, jotka ovat keskipitkän tai kohtalaisen vaativia myöhempää tunnistamista varten..

Koska se on vaalea väriaine, se on ihanteellinen pigmenttien tarkkailuun ja koska se ei sisällä häiritseviä aineita, sitä voidaan käyttää biokemiallisten testien, kuten oksidaasin ja katalaasin, suorittamiseen tai muiden biokemiallisten testien asentamiseen tästä peräisin olevista pesäkkeistä agaria.

Samoin BHI-agar-kiiloja käytetään laajalti kantojen ylläpitämiseen määritetyn ajan laboratoriossa (bakterioteka).

Levyjä tai kiiluja, jotka on istutettu pinnalle bakteerikantojen kanssa, inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 - 48 tuntia. Sienissä lämpötila ja inkubointiaika riippuvat haetun sienen tyypistä.

Pohjaagarina muiden väliaineiden valmistamiseksi

Tällä pohjalla voidaan valmistaa rikastettua ja selektiivistä väliainetta.

rikastettu

Sen päätehtävä on toimia perustana veriagarin valmistuksessa rutiinikäyttöön mikrobiologian laboratorioissa. Erityisesti BHI-emäs edesauttaa kantojen eristämistä Streptococcus sp. Sen haittana on kuitenkin se, että se ei sovi hemolyysikuvioiden tarkkailuun, koska se sisältää glukoosia.

Sitä käytetään myös kanin tai hevosen veri-agarin valmistuksessa Haemophilus sp. Parempien tulosten saamiseksi voit lisätä rikastuslisää (IsoVitaleX).

Jos näytteet tulevat hengitysteistä agariin, bacitrasiinia voidaan lisätä estämään mukana olevaa kasvistoa ja lisäämään todennäköisyyttä saada kantojen kantaa. Haemophilus sp.

Toisaalta voidaan valmistaa verta-agaria (karitsaa tai ihmistä) telluriittikystiinin kanssa eristämiseksi Corynebacterium diphtheriae. Samoin on hyödyllistä valmistaa kanin veri-agaria lisäämällä kystiiniä ja glukoosia, jotta eristettäisiin Francisella tularensis.

Verenagarilevyjen kylvö suoritetaan tyhjentämällä ja inkuboidaan 35-37 ° C: ssa 24-48 tuntia mikroaerofiilisessä (5 - 10% CO).2).

valikoiva

Tämä väliaine, johon on lisätty antibiootteja, voi korvata Sabouraud-agarin sienien eristämiseksi.

BHI-agarin ja kloramfenikolin - gentamisiinin tai penisilliinin, streptomysiinin ja hevosen veren yhdistelmä on ihanteellinen eristyksessä Histoplasma capsulatum.

Erotettavasta mikro-organismista riippuen on suositeltavaa inkuboida 35 - 37 ° C: ssa tai huoneenlämpötilassa aerobioosissa. Joskus inkubointi on välttämätöntä molemmissa lämpötila-alueissa käyttämällä tätä varten 2 levyä.

Jotkut sienet Trichophyton mentagrophytes niitä tulisi inkuboida huoneenlämpötilassa enintään 7 vuorokautta.

Laadunvalvonta

Jokaisesta valmistetusta erästä on suositeltavaa inkuboida 1 levy tai kiila 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan ja varmistaa, ettei kasvua ole; Erityisen tärkeää on, kun valmistellaan veriagaria, koska se on helposti saastunut väliaine.

Toisaalta väliaineen laatua voidaan arvioida inokuloimalla tunnettuja tai sertifioituja standardikantoja ja tarkkailemalla niiden kehitystä.

Tässä mielessä arvioidaan BHI: n agaria ilman lisäaineita Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 tai Candida albicans ATCC 10231. Niitä inkuboidaan 37 ° C: ssa aerobioosissa 24 - 48 tunnin ajan. Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää kasvua.

Veren agarlevyjen arvioimiseksi  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 tai Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteerikantoja inkuboidaan 37 ° C: ssa microaerophilicuksessa 24 tuntia, kun taas sientä inkuboidaan huoneenlämpötilassa kosteassa kammiossa enintään 7 vuorokautta. Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää kasvua.

viittaukset

  1. Laboratories Britania. Aivojen sydäninfuusio Agar. 2015. Saatavilla: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Aivojen sydämen infuusion (BHI) agar. 2013. Saatavilla osoitteessa: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Brain Heart Infusion Agar. 2009.
  4. Neogeenilaboratorio. Brain Heart Infusion Agar. Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agarin veri: säätiö, käyttö ja valmistus. 2018. Saatavilla osoitteessa: lifeder.com.
  6. Wikipedia-avustajat. Aivojen sydämen infuusio Wikipedia, The Free Encyclopedia. 19. syyskuuta 2018, 03:58 UTC. Saatavilla osoitteessa: wikipedia.org. Pääsy 2. maaliskuuta 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.