Baird Parker Agarin säätiö, valmistelu ja käyttö



Baird Parkerin agar se on kiinteä, selektiivinen ja differentiaalinen kasvualusta. Se luotiin vuonna 1962 positiivisen Staphylococcus-laskennan havaitsemiseen ja koagulaasiin (Staphylococcus aureus).

Se koostuu kaseiinin haiman hydrolysaatista, lihauutteesta, hiivauutteesta, litiumkloridista, glysiinistä, natriumpyruvaatista, kalium-telluurista, agarista ja munankeltuaisen emulsiosta.

Baird Parkerin agar perustuu kykyyn S. aureus pelkistämällä telluriittia ja tuottamalla lesitinaasia. Molemmat ominaisuudet luovat pesäkkeen, jolla on erityispiirteitä tälle lajille. Siksi se tarjoaa suurta tehokkuutta tämän mikro-organismin havaitsemisessa.

Tyypilliset pesäkkeet S. aureus ne ovat mustia tai tummanharmaita, joissa on väritön raja ja selkeä halo, joka ympäröi heitä ja erottuu muista mikro-organismeista. Tämä patogeeni löytyy kliinisistä näytteistä, vesistä, kosmetiikasta ja raaka- tai keitetystä elintarvikkeesta.

Sen diagnosointi tai havaitseminen on erittäin tärkeää, koska se tuottaa erilaisia ​​patologioita, kuten ruokamyrkytyksiä, palanut ihosyndrooma, myrkyllisen sokin oireyhtymä, paiseet, aivokalvontulehdus, septikemia, endokardiitti..

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Ravitsemusvoima
    • 1.2 Valikoiva
    • 1.3
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 Munankeltuaisen emulsio
    • 2.2 Kalium-telluriitti 1 paino-%
    • 2.3 Viljelyalustan valmistus
  • 3 Käytä
    • 3.1 Kliiniset näytteet
    • 3.2 Elintarvikenäytteet
    • 3.3 Vesinäytteet
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 suositusta
  • 6 Viitteet

perusta

Ravitseva voima

Kaseiinin haiman hydrolysaatti, lihauute ja hiivauute ovat yleisten mikrobien kehitykseen tarvittavien ravintoaineiden, vitamiinien ja kivennäisaineiden lähteitä, kun taas pyruvaatti ja glysiini ovat yhdisteitä, jotka suosivat spesifistä kasvua. Staphylococcus aureus.

valikoiva

Baird Parkerin agar on valikoiva, koska se sisältää aineita, jotka estävät mukana olevan kasviston kasvua ja edistävät samalla kehitystä. S. aureus. Estävät yhdisteet ovat litiumkloridi ja kalium-telluriitti.

ero

Tämä tarkoittaa, että voidaan erottaa S. aureus muiden koagulaasipositiivisten stafylokokkien osuus. S. aureus kykenee vähentämään telluuria mustaksi metalliseksi vapaaksi telluuriksi, jolloin muodostuu mustia tai tummanharmaita pesäkkeitä.

Samoin munankeltuainen antaa substraateille todisteet lecitinaasin ja lipaasin entsyymin läsnäolosta. S. aureus se on positiivinen lesitinaasi, ja siksi pesäkkeen ympärillä havaitaan kirkas halo, joka osoittaa, että lesitiiniä hydrolysoitiin.

Tässä mielessä mustien tai tummanharmaiden pesäkkeiden, jotka ovat kirkkaita ja halogeenin ympärillä, esiintyminen tässä agarissa osoittaa, että läsnä on S. aureus. 

Jos muodostuu saostusvyöhyke, on viitteellistä, että on lipaasiaktiivisuutta. Jotkut S. aureus ne ovat positiivisia lipaaseja ja muita negatiivisia.

Jos S. aureus Jos lipaasi on positiivinen, mustan tai tummanharmaan pesäkkeen ympärillä havaitaan läpinäkymätön vyöhyke ja sitten kirkas halo lecitinaasin vaikutuksesta..

Muiden bakteerien pesäkkeet kuin S. aureus tämä kasvualusta voi kasvaa värittömiä tai ruskeita pesäkkeitä.

Epätyypillisiä mustia pesäkkeitä voidaan havaita myös värittömällä reunalla tai ilman sitä, mutta ilman kirkasta haloa. Näitä pesäkkeitä ei pitäisi ottaa huomioon, ne eivät vastaa S. aureus.

valmistelu

Munankeltuaisen emulsio

Ota tuoretta kananmunaa, pese se hyvin ja laita se 2-3 tuntia 70% alkoholiin. Sitten muna avautuu aseptisesti ja munanvalku erotetaan huolellisesti keltuaisesta. Sen jälkeen otetaan 50 ml keltuainen ja sekoitetaan 50 ml: aan steriiliä fysiologista liuosta.

Kalium-telluriitti 1 paino-%

Jotkut kaupalliset talot myyvät 1% kalium-telluuria valmiina käyttöön. Se lisätään väliaineeseen ennen väliaineen jähmettymistä.

Liuoksen valmistamiseksi laboratoriossa punnitaan 1,0 g kalium-telluriittia ja liuotetaan osaan vettä. Tämän jälkeen veden määrä valmistuu 100 ml: ksi. Liuos on steriloitava suodatusmenetelmällä.

Viljelyalustan valmistus

Punnitaan 60 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 940 ml: aan tislattua vettä. Jätä seos lepotilassa noin 5 - 10 minuuttia.

Levitä lämpöä sekoittamalla väliainetta usein liukenemisprosessin parantamiseksi. Anna kiehua minuutin ajan. Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuuttia.

Anna seistä, kunnes se saavuttaa 45 ° C: n lämpötilan ja lisää 50 ml munankeltuaisen emulsiota ja 10 ml 1-prosenttista telluuria. Sekoita hyvin ja anna 15 - 20 ml steriilejä petrimaljoja.

Annetaan jähmettyä, järjestys käännetään ylösalaisin ja säilytä jääkaapissa ennen käyttöä.

Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 6,8 ± 0,2.

Ennen näytteen istuttamista odota, kunnes levy ottaa ympäristön lämpötilan. Kylvä levyt juovalla tai kylvämällä pinnalla Drigalski-lastalla.

Dehydratoidun väliaineen väri on vaaleanruskea ja valmistetun väliaineen väri on kevyt keltainen.

käyttö

Kliiniset näytteet

Kliiniset näytteet kylvetään suoraan poistamalla osa materiaalista levyn toisesta päästä, ja sieltä se kulkee pois loppuun. Inkuboidaan 24 - 48 tuntia 35-37 ° C: ssa.

Elintarvikenäytteet

Punnitaan 10 g elintarvikenäytettä ja homogenoidaan 90 ml: ssa 0,1-prosenttista peptonoitua vettä, tarvittaessa valmistetaan laimennoksia. Siirretään levyt kolminkertaisesti 0,3 ml: lla valmistettuja liuoksia ja kylvetään pinnalle Drigalski-lastalla. Inkuboidaan 24 - 48 tuntia 35-37 ° C: ssa.

Tällä menetelmällä voidaan laskea saadut tyypilliset pesäkkeet ja se on ihanteellinen, kun läsnä on S. aureus yli 10 CFU / g / ml näytettä.

Jos epäilet, että summa on S. aureus se on pieni tai siinä on paljon mukana olevaa kasvistoa, on suositeltavaa rikastaa näytettä tripticase soijaliemessä 10% NaCl: lla ja 1% natriumpyruvaatilla. Tämä edistää kasvua S. aureus ja se estää mukana olevan kasviston kehittymisen. Pilviset putket kylvetään Baird Parkerin agarille.

Vesinäytteet

Tyhjiösuodatusjärjestelmässä ja steriloituna 100 ml vettä suodatetaan, ja sitten 0,4 mikronin mikropoorinen kalvo poistetaan steriilillä puristimella ja sijoitetaan Baird Parker -levylle. Inkuboidaan 24 - 48 tuntia 35-37 ° C: ssa. Tämä tekniikka sallii tyypillisten kolonioiden laskemisen S. aureus.

Laadunvalvonta

Baird Parkerin agarin laadun arvioimiseksi voidaan käyttää tunnettuja kantoja, kuten Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 tai Proteus mirabilis ATCC 43071.

Jos kyseessä on. \ T S. aureus ATCC: n tiedetään vähentävän telluuria, ja ne ovat positiivisia lipaaseja ja lesitinaasia. Sen vuoksi kehityksessä on oltava tyydyttävä kehitys ja kuperien pesäkkeiden kasvattaminen mustalla keskellä ja värittömällä reunalla..

Toisaalta S. epidermidis huonoa kehitystä odotetaan tällä väliaineella, harmahtavanruskean ja mustan pesäkkeen välillä, ilman selkeää haloa.

että E. coli ja P. mirabilis sen odotetaan olevan kokonaan tai osittain estetty. Kasvamisen tapauksessa ruskeat pesäkkeet kehittyvät ilman läpinäkymättömiä vyöhykkeitä eikä kirkasta haloa.

suosituksia

-Väliainetta ei saa lämmittää tellurin ja keltuaisen lisäämisen jälkeen.

-Munankeltuaisen emulsion valmistus ja sen lisääminen väliaineeseen on erittäin haavoittuva kontaminaatiovaihe. Äärimmäistä varovaisuutta on noudatettava.

-Jos esiintyy tyypillisiä. \ T S. aureus on vahvistettava kiinnittämällä koagulaasitesti mainittuun kantaan.

-Jos koagulaasin tulokset ovat epäilyttäviä, on tehtävä muita vahvistavia testejä.

-Varo sekoittamasta tyypillisten kolonioiden läsnäoloa S. aureus epätyypillisiä mustan värin pesäkkeitä.

viittaukset

  1. Wikipedia-avustajat. Baird-Parkerin agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15.3.2017, 19:36 UTC. Saatavilla osoitteessa: wikipedia.org/ Pääsy 18. helmikuuta 2019.
  2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  3. Laboratories Britania. Baird Parkerin agaripohja. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Saatavilla osoitteessa: http://f-soria.es/Inform
  5. Laboratories Britania. Kalium-telluriitti. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Staphylococcus aureus enterotoksigeeninen tyyppi A, nenä- ja nielusuojeluissa elintarvikkeiden käsittelijöissä. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
  7. Venezuelan standardi Covenin 1292-89. (1989). Food. Eristäminen ja laskeminen Staphylococcus aureus. Saatavana:sencamer.gob.ve