MIO-keskipohja, valmistelu ja käyttö



puolet MIO on biokemiallinen testi, jota käytetään auttamaan Enterobacteriaceae-sukuun kuuluvien bakteerien lajien tunnistamisessa. Se on melko ravitsevaa ja se koostuu glukoosista, hiivauutteesta, peptonista, tripteiinistä, L-ornitiinihydrokloridista, bromikresolista ja agarista..

Sen lyhenne (MIO) tarkoittaa kaikkia parametreja, joita voidaan havaita tällä välineellä; liikkuvuus, indoli ja ornitiini. Motivaatio on mikro-organismin kyky liikkua lipun läsnä ollessa. Jotta tämä ominaisuus voitaisiin havaita, väliaineen konsistenssin on oltava puolikiinteä, joten valmisteessa on vähemmän agaria..

Indolituotanto osoittaa, että tryptofanaasientsyymi, joka vaikuttaa aminohappo-tryptofaaniin, on välttämätön, jotta indolituotanto olisi näkyvissä..

Lopuksi ornitiini määrittää, pystyykö bakteeri dekarboksyloimaan aminohappoa, eli jos sillä on orinitiinidekarboksylaasin entsyymi.

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Peptoni, hiivauute ja tripteiini
    • 1.2 Liikkuvuus
    • 1.3 Glukoosi
    • 1.4 L-ornitiini
    • 1.5 pH-indikaattori
  • 2 Kylvö- ja kehitystekniikka
  • 3 Valmistelu
    • 3.1 MIO Medium
    • 3.2 Kovacsin reagenssi (Indolen testin kehittäjä)
  • 4 Käytä
  • 5 Laadunvalvonta
  • 6 Viitteet

perusta

Peptoni, hiivauute ja tripteiini

Nämä elementit edistävät tämän elatusaineen ravintoa. Ne toimivat ravintoaineiden ja välttämättömien aminohappojen lähteenä bakteerien kehittämisessä.

Lisäksi tripteiini on tryptofaanin lähde todistamaan tryptofanaasin entsyymin läsnäolo, joka hajottaa tryptofaania pelkistävällä deaminaatiolla vapauttavalla indolilla, pyruvihapolla, ammoniakilla ja energialla.

Indoli on väritön, joten sen läsnäolo paljastuu lisäämällä viisi tippaa Ehrlich- tai Kovacs-reagenssia, molemmat p-dimetyyliaminobentsaldehydillä.

Tämän yhdisteen aldehydiryhmä reagoi indolin kanssa muodostaen renkaanmuotoisen fukso-punaisen tuotteen agar-pinnalla.

Kaikki värin jäljet ​​olisi pidettävä myönteisinä todisteina. Testi on luettava välittömästi, koska jonkin aikaa väri hajoaa.

Toisaalta tämä testi tulisi ilmoittaa sen jälkeen, kun on kirjattu ornitiinin liikkuvuuden ja dekarboksyloinnin tulokset..

tulkinta

Positiivinen testi: fuksejapunaisen renkaan muodostuminen, kun lisätään Kovacs-reagenssia.

Negatiivinen testi: ei ole renkaan muodostumista.

liikkuvuutta

Bakteerien liikkumiskyky osoitetaan, jos havaitaan sameaa väliainetta tai jos on olemassa paksu kasvualue, joka laajenee ensimmäisen inokulaation ympärille.

Negatiivinen motiliteettitesti osoitetaan tarkkailemalla ohutta kasvualuetta, ja ympärillä on ilman kasvua.

On tärkeää, että liikkuvuus luetaan ennen indolin paljastamista, koska reagenssin lisääminen pilvittää koko väliaineen.

Liikkuvilla mutta hitaasti kasvavilla bakteereilla on vaikeaa osoittaa liikkuvuuttaan tällä väliaineella. Tässä tapauksessa on suositeltavaa käyttää muita testejä tai menetelmiä, kuten liikkuvuusväliainetta tai pudotusmenetelmää.

glukoosi

Glukoosi on fermentoituva hiilihydraatti, joka tuottaa energian lisäksi happamaksi väliaineen, mikä on välttämätön edellytys ornitiinin aminohapon dekarboksyloimiselle..

Glukoosin käyminen tulee aina tapahtua sen periaatteen mukaisesti, että kaikki Enterobacteriaceae-suvun ryhmään kuuluvat bakteerit fermentoivat glukoosia.

L-ornitiini

Jos bakteeri tuottaa entsyymin ornitiinidekarboksylaasia, se voi toimia, kun väliaine on happamoitu fermentoimalla glukoosia.

Ornitiinidekarboksylaasin entsyymi vaikuttaa aminohapon karboksyyliryhmään, joka tuottaa amiini, jota kutsutaan putresiiniksi, joka alkaloi alustan uudelleen.

Tämä testi on luettava 24 tunnin inkubaation jälkeen, koska jos yrität lukea ennen kuin voit tulkita väärin negatiivisen testin..

On muistettava, että ensimmäinen reaktio, joka tapahtuu, on glukoosin fermentointi siten, että väliaine muuttuu keltaiseksi alkuvaiheessa (ensin 10 - 12 tuntia). Jos ornitiinin dekarboksylointi tapahtuu myöhemmin, väliaine muuttuu violetiksi.

On tärkeää tulkita ornitiinidekarboksylaatiotesti ennen indolin paljastamista, koska Kovacsin reagenssin lisääminen muuttaa väliaineen väriä..

tulkinta

Negatiivinen testi: keskikeltainen tai keltaisella taustalla.

Positiivinen testi: täysin violetti.

PH-ilmaisin

Tässä tapauksessa käytetään bromikresolin purppuraa; henkilö, joka on vastuussa paljastamisesta, kun keskellä on pH-muutos. Hapottamisen jälkeen indikaattori muuttuu keltaiseksi, ja kun alkaloitu muuttuu violetiksi.

Siemen- ja kehitystekniikka

MIO-väliaineen istuttamiseksi käytetään suoraa silmukkaa tai neulaa ja sen kanssa kerätään osa tutkittavasta pesäkkeestä..

MIO-väliaineessa on syvä pistos suorassa linjassa. Ei ole suositeltavaa suorittaa kaksinkertaista puhkaisua, koska se voi antaa vääriä liikkuvuuskuvia, jos lävistyksiä ei suoriteta samassa paikassa.

Inkuboidaan 24–48 tuntia 37 ° C: ssa aerobioosissa. Tarkkaile tuloksia tässä järjestyksessä: liikkuvuus, ornitiinin dekarboksylointi ja lopulta paljastaa indoli.

On suositeltavaa ottaa aseptisesti 2 ml väliainetta, siirrä se steriiliin putkeen ja suorittaa siellä indoli-testi siten, että jos negatiivinen, loput alkuperäisestä putkesta voidaan inkuboida 24 tunnin ajan indolin paljastamiseksi uudelleen..

Indolin kehittyminen suoritetaan seuraavalla tavalla: 3 - 5 tippaa Kovacs-reagenssia lisätään MIO-alustaan ​​ja sekoitetaan voimakkaasti. Se havaitaan, jos fuksiapunainen rengas näkyy tai ei.

valmistelu

Puolet MIO

Punnitaan 31 g MIO-alustaa ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä.

Kuumenna, kunnes seos kiehuu minuutin ajan, sekoittaen usein, kunnes agari on täysin liuennut. Jaetaan 4 ml elatusainetta 13/100 koeputkessa puuvillan kannella.

Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poista autoklaavista ja anna sen seistä suoraan telineeseen siten, että muodostuu puolikiinteä lohko.

Säilytä jääkaapissa 2-8 ° C. Annetaan lievittää ennen bakteerikantaa.

Dehydratoidun väliaineen väri on beige ja väliaineen, joka on valmistettu hieman purppuranpunaisena, väri.

Valmistetun väliaineen lopullinen pH on 6,5 ± 0,2

Väliaine muuttuu keltaiseksi happaman pH: n kanssa ja on violetti pH-arvossa.

Kovacsin reagenssi (Indole-testin kehittäjä)

Tämä reagenssi valmistetaan seuraavasti:

150 ml amyyliä, isoamyyliä tai butyylialkoholia (mikä tahansa kolmesta) mitataan. Siinä liuotetaan 10 g p-dimetyyliaminobentsaldehydiä. Sitten lisätään hitaasti 50 ml väkevää kloorivetyhappoa.

Valmistettu reagenssi on väritön tai vaaleankeltainen. Se on säilytettävä keltaisessa pullossa ja säilytettävä jääkaapissa. Tummanruskea väri osoittaa sen heikkenemisen.

Myös Kovacsin reagenssi voidaan korvata Ehrlichin reagenssilla. Jälkimmäinen, joka on herkempi, on edullista paljastaa indolia bakteereissa, jotka tuottavat sitä pieninä määrinä, kuten joissakin gram-negatiivisissa ei-fermentoivissa baciloissa ja tietyissä anaerobeissa.

käyttö

Tämä väline on testi, joka täydentää biokemiallisten testien akkua Enterobacteriaceae-sukuun kuuluvien bakteerien tunnistamiseksi..

Ornitiinin de-karboksylointitieto palvelee erilaistumista Shigella sonnei, joka antaa positiivisen Shigella boydii, Shigella flexneri ja S. dysenterieae, jotka antavat negatiivisia.

Se erottaa myös suvun Klebsiella, joka antaa negatiivisen, Enterobacter-suvun, jossa suurin osa sen lajista on positiivinen.

Laadunvalvonta

Joka kerta, kun valmistetaan MIO-alustan erä, voidaan suorittaa kontrollitesti. Tätä varten käytetään tunnettuja tai varmennettuja kantoja väliaineen käyttäytymisen havaitsemiseksi.

Käytettävät kannat ovat Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes ja Proteus mirabilis.

Odotetut tulokset ovat E. coli ja M. morganii. Dan M: +, I: + ja O: +.

Klebsiella pneumoniae antaa kaikki negatiiviset (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis ja Enterobacter aerogenes dan M: + I: - ja O: +.

viittaukset

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisesti merkittävien bakteerien tunnistamiseksi. 3. ed. Toimituksellinen Panamericana. Buenos Aires Argentiina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5th ed. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.
  4. Laboratories Britania. MIO Medio 2015. Saatavana osoitteessa: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Motility Indole Ornitiini (MIO) Medium. 2007. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Motility, Indole, Ornitiini. 2010. Saatavilla osoitteessa: andinamedica.com