Seleniitti liemi säätiö, valmistus ja käyttö



seleeni-liemi Se on selektiivinen nestemäinen kasvualusta. Leifson on suunnitellut sen näytteiden rikastamiseen, jossa epäillään Salmonella-suvun enteropatogeenisten bakteerien esiintymistä..

Tämä väline täyttää American Public Health Associationin (APHA) vaatimukset ja on siksi hyväksytty tutkimaan muun muassa salmonellan esiintymistä ulostenäytteissä, virtsassa, nestemäisissä tai kiinteissä elintarvikkeissa..

Kemiallinen koostumus, joka sillä on, suosii näiden mikro-organismien talteenottoa ja puolestaan ​​estää muiden kasvua. Se on pääasiassa myrkyllistä useimmille Enterobacteriaceae-perheeseen kuuluville bakteereille. Se sallii kuitenkin myös Shigellan kantojen talteenoton eikä estä Pseudomonasin ja Proteuksen kasvua..

Se koostuu vedettömästä natriumvetyseniitistä, vedettömästä natriumfosfaatista, peptoneista ja laktoosista. On olemassa myös muunnos, johon kystiini lisätään, joten sen nimi on seleniitti-kystiini-liemi.

Tällä hetkellä seleeni-kystiini-liemen käyttö on edullista, koska saavutetaan suurempi salmonellan talteenoton prosenttiosuus, joka on sama kuin muilla selektiivisillä väliaineilla, joilla on sama tarkoitus, kuten Tetrathionate-natriumliemi..

indeksi

  • 1 Säätiö
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 - Selena
    • 2.2 - Kaupallisen väliaineen valmistus
    • 2.3 Variantin seleniitti-kystiini-liemi
  • 3 Käyttö
  • 4 Seeded
  • 5 Laadunvalvonta
  • 6 Rajoitukset
  • 7 Viitteet

perusta

Liemessä olevat peptonit toimivat ravintoaineina mikro-organismien asianmukaista kehittämistä varten. Salmonellakannat käyttävät peptoneja typen, vitamiinien ja aminohappojen lähteenä.

Laktoosi on fermentoituva hiilihydraatti, kun taas natriumseliitti on inhiboiva aine, joka hidastaa grampositiivisten bakteerien ja useimpien suolistofloorassa olevien bakteerien, erityisesti Enterobacteriaceae-perheen, kasvua. Natriumfosfaatti on puskuri, joka stabiloi väliaineen pH: n.

L-kystiinia sisältävän seleeni-liemen muunnoksen tapauksessa tämä lisäyhdiste on pelkistävä aine, joka minimoi seleniitin toksisuuden, mikä lisää salmonellan talteenottoa.

valmistelu

-Seleniitti liemi

Jos sinulla on seoksen komponentit, voit punnita:

4 g vedetöntä natriumvetyseniittiä.

10 g vedetöntä natriumfosfaattia.

5 g peptonia.

4 g laktoosia.

Liuotetaan yhdisteet 1 litraan steriiliä tislattua vettä. Se voidaan lämmittää hieman liukenemaan kokonaisuudessaan.

Jotkut laboratoriot altistavat väliaineen 10 minuutin ajan sujuvasti höyrylle sen steriloimiseksi, koska autoklaavia ei pitäisi käyttää. Jos väliaine on steriloitu, se voidaan säilyttää jääkaapissa, kunnes sitä käytetään.

Se voidaan valmistaa myös steriloimatta ja suoraan 10 - 15 ml: aan steriileihin koeputkiin.

Tässä tapauksessa se on jätettävä lepoon ja käytettävä välittömästi. Koska väliaine ei ole steriili, sitä ei voi säilyttää jääkaapissa myöhempää käyttöä varten.

-Kaupallisen väliaineen valmistaminen

Jos kaupallinen elatusaine on saatavilla, 23 g kuivattua väliainetta punnitaan ja liuotetaan yhteen litraan steriiliä tislattua vettä. Lämmitä lyhyesti liukenemisen loppuun. Älä steriloi autoklaavissa. Tarjoa aseptisesti 10 tai 15 ml steriileissä koeputkissa.

Väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,0 ± 0,2.

On huomattava, että dehydratoidun väliaineen väri on beige ja valmiste on kirkas ja läpikuultava keltainen.

Variantin seleniitti-kystiini-liemi

Se sisältää seleeni-liemen samoja yhdisteitä, mutta lisätään 10 mg kystiiniä. Loput menettelystä on täsmälleen sama kuin edellä on kuvattu.

sovellukset

Tämä väliaine on erityinen käytettäväksi epidemiologisissa tutkimuksissa tapauksissa, joissa tauti ei ole akuutissa vaiheessa, oireettomia potilaita tai terveitä kantajia..

Salmonella-suvun eristäminen on yleensä vaikeaa, koska niiden havaitaan yleensä saastuttavan näytteitä niukasti. Pienissä määrissä oleminen on päällekkäistä muiden suuremmassa määrin esiintyvien bakteerien sukujen kasvun kanssa.

Toisaalta raaka-aine, johon jalostetut elintarvikkeet jalostetaan, altistuvat usein lämmölle, kuivumisprosesseille, desinfiointiaineiden, säteilyn ja säilöntäaineiden käytölle..

Siksi raaka-aineessa esiintyviä salmonelloja kohdellaan väärin tuotteen toimittamisella edellä mainittuihin teollisiin prosesseihin. Samoin kliinisissä näytteissä, kuten ulosteissa, kannat voivat olla heikkoja, jos ne ovat peräisin potilaista, joita on hoidettu antibiooteilla..

Siksi minkä tahansa näytteen, jossa epäillään salmonellan esiintymistä, on oltava etukäteen rikastettu laktoosiliemeen ja sitten rikastettu seleniitti- liemellä optimoimaan sen talteen selektiivisissä väliaineissa, kuten SS-agarissa, ksyloosiagarissa, lysiinidoksikolaatissa (XLD) ), muun muassa suolistossa oleva Hektoen-agar (HE) ja vihreä kirkas agar.

istutettu

Ulosäytteitä varten otetaan 1 g näytettä ja suspendoidaan putkeen, jossa on 10–15 ml seleniitti-lientä. Jos uloste on nestemäistä, ota 1 ml ja suspendoidaan liemeen. Peräsuolipyyhkeitä varten pura vanupuikko materiaali liemeen.

Näytteissä kiinteät elintarvikkeet ottaa 1 gr ja keskeyttää seleniitti liemi.

Nestemäisissä elintarvikkeissa sekoitetaan samankaltaisissa osissa seleeni- liemi kaksoispitoisuudella.

Virtsanäytteiden sentrifugoimiseksi hävitä supernatantti, ota kaikki sedimentti ja suspendoi se seleniittiliemeen.

Liemiä inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 tunnin inkuboinnin ajan. Bakteerien kasvua osoittaa sameus. Lisäputki näytettä kohti voidaan myös sisällyttää inkuboimaan 42 ° C: ssa. Sen jälkeen kylvetään selektiiviset kiinteät elatusaineet seleeni- liemestä.

Laadunvalvonta

Steriliteetin kontrolloimiseksi kustakin panoksesta peräisin olevaa seleeni- liemiä inkuboidaan inkuboimalla 37 ° C: ssa 24 tuntia. On odotettavissa, ettei väliaine ole sameus tai väri.

Väliaineen hyvän toiminnan kontrolloimiseksi voidaan käyttää tunnettuja kantoja, kuten:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 ja Proteus mirabilis ATCC 43071.

Odotetut tulokset ovat:

  • Kolmen ensimmäisen bakteerikannan kasvun on oltava tyydyttävä.
  • että Escherichia coli osittainen esto.
  • Proteus kohtalainen kasvu.

rajoituksia

Keskipitkän seleeni-liemi on myrkyllistä ihmisen iholle, joten suoraa kosketusta on vältettävä.

viittaukset

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Natriumseliitin ja natriumtetrationaatin viljelyalustojen vertailu, molempia inkuboitiin 37 ° C: ssa ja 42 ° C: ssa eristäminen salmonella jakkara jakkara. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratories Britania. Selenito Caldo. 2015. Saatavilla: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenito-liemi Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
  4. González-Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández-Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Salmonella spp. ja molekyyliset välineet sen havaitsemiseksi. Terveys, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Saatavana osoitteesta: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.