Peptonin vesialusta, valmistus ja käyttö

peptonada vesi se on ei-selektiivinen nestemäisen rikastusaine, jota käytetään pääasiassa elintarvikenäytteiden tai muiden materiaalien laimennusaineena. Tämä tarkoittaa kemialliselta kannalta hyvin yksinkertaista, sisältää lihan peptonia, natriumkloridia ja vettä.

Sillä on tietty ravintoarvo, joka mahdollistaa näytteen rikastamisen. Jos bakteereja on pahoinpideltyjä, sillä on oikeus korjata elinkelpoisuus. Se on erityisen käyttökelpoinen Enterobacteriaceae-sukuun kuuluvien bakteerien talteenotossa.

Salmonellien talteenoton tapauksessa suositellaan puskuroidun peptonadan vesivariantin käyttöä; Tämä toimii keinona näytteen ennalta rikastamiseksi, tässä tapauksessa se sisältää muita elementtejä, kuten dinatriumfosfaattia ja dikaliumfosfaattia..

Normaalisti peptonada-vesi valmistetaan neutraalissa pH: ssa, mutta on muitakin vaihtoehtoja, joissa on välttämätöntä, että pH on 8,5 ± 0,2 (emäksinen), koska eristettävät bakteerit ovat alkalofiilisiä, kuten esimerkiksi Vibrio cholerae.

Toisaalta tätä elatusainetta voidaan käyttää perusaineena hiilihydraatti- fermentointitesteihin.

indeksi

• 1 Säätiö
• 2 Valmistelu
  • 2.1 Kodin valmistelu (ei-kaupallinen)
  • 2.2 Valmistus kaupallisella väliaineella
  • 2.3 Käyminen fermentointitesteihin
  • 2.4 Muut peptonada-vedet
• 3 Käytä
  • 3.1 Suolanäytteet
  • 3.2 Elintarvikenäytteet
• 4 Laadunvalvonta
• 5 Rajoitukset
• 6 Viitteet

perusta

Peptonit tarjoavat bakteerien kehitykseen tarvittavia ravintoaineita, erityisesti typpeä ja lyhytketjuisia aminohappoja, kun taas natriumkloridi ylläpitää osmoottista tasapainoa.

Lisäksi väliaine sallii hajottaa, homogenisoida ja korjata bakteerisolut, jotka ovat vaurioituneet teollisissa prosesseissa..

Laimennusaineena se on ihanteellinen, korvaamalla tehokkaasti fysiologinen liuos (SSF) tai fosfaattipuskuri (PBS).

Bakteerikasvu on ilmeistä havaitsemalla sen sameus.

valmistelu

Kotitekoinen valmistelu (ei-kaupallinen)

Punnitaan 1 g peptonia ja 8,5 g natriumkloridia, liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. PH tulisi säätää arvoon 7,0. Tätä varten voit käyttää 1 N natriumkloridia.

Valmistus käyttäen kaupallista elatusainetta

Punnitaan 15 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Homogenoi seos. Tarvittaessa seosta keitetään 1 minuutti täydellisen liukenemisen helpottamiseksi. Tarjoile 100 ml: n injektiopulloissa tai 10 ml: n putkissa tarvittaessa. Autoklaavi 121 ° C: ssa 15 minuuttia.

Jäähdytä ja käytä tai säilytä jääkaapissa. Väliaineen lopullinen pH on 7,2 ± 0,2.

Dehydratoidun väliaineen väri on vaalea beige ja valmistettu kevyesti keltaisena.

Käyminen fermentointitesteihin

Edelliseen valmisteeseen - ennen sterilointia - tulisi lisätä hiilihydraatti lopulliseen konsentraatioon 1%, plus Andrade-indikaattori (happo-fuksiini) tai fenoli punainen (0,018 g / l). Putkien päälle tulee asettaa Durham-kello kaasunmuodostuksen tarkkailemiseksi.

Muut peptonadan vesivariantit

-Peptonivesi, joka on puskuroitu tai puskuroitu

Se sisältää kaseiinin entsymaattista hydrolysaattia, natriumkloridia, kaliumdivetyfosfaattia ja natriumvetyfosfaatti dodekahydraattia. Lopullinen pH on 7,0 ± 0,2.

Sen valmistamiseksi punnitaan 20 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Anna seistä noin 5 minuuttia. Kuumenna 1 minuutti, kunnes se on täysin liuennut.

Kaada sopiviin pulloihin tarpeen mukaan. Steriloidaan käyttäen autoklaavia 121 ° C: ssa 15 minuuttia.

-Alkalinen peptonoitu vesi

Punnitaan 25 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan vettä. Toimi edellä kuvatulla tavalla. PH on 8,3 - 8,7.

käyttö

Inokulaatti tehdään sijoittamalla näyte suoraan.

Sitä käytetään näytteiden laimentamiseen, varsinkin silloin, kun epäillään, että bakteerit voivat vahingoittua. Tavallisesti laimennokset ovat 1:10 ja 1: 100.

Inkuboidaan 24 tuntia aerobioosissa 35 - 37 ° C: ssa.

Tuolan näytteet

Salmonellaa etsivien ulostenäytteiden osalta on suositeltavaa käyttää puskuroitua tai puskuroitua vettä rikastusaineena..

Voit tehdä tämän seuraavasti:

Jos uloste muodostuu, ota 1 g näytettä. Jos ne ovat nestemäisiä, ota 1 ml ulosteet ja suspendoidaan 10 ml: aan puskuroitua peptonoitua vettä. Peräsuolen pyyhkäisykappaleiden tapauksessa poistetaan vanupuhdistimessa oleva materiaali putkeen puskuroidulla peptonoidulla vedellä.

Sekoita ja homogenoi näyte kaikissa tapauksissa hyvin hyvin.

Inkuboidaan 37 ° C: ssa 18 - 24 tuntia. Tämän jälkeen viljellään rikastusliemessä, kuten seleeni-kystiiniliemessä tai tetrationaattiliemessä, 37 ° C: ssa 18 - 24 tuntia. Lopuksi viljellään selektiivisissä väliaineissa Salmonellaa, kuten SS-agaria, XLD-agaria, Hektoen-agaria, muun muassa.

Elintarvikenäytteet

Peptonivettä käytetään rikastusaineena tai yksinkertaisena laimennusaineena, mutta jos haetaan salmonellalajeja, sitä käytetään esirikastusväliaineena, kuten on jo kuvattu..

Elintarvikkeissa tapahtuu seuraavasti:

Kiinteille elintarvikkeille paino 25 g näytettä ja nestemäisten elintarvikkeiden osalta mitataan 25 ml sitä. Aseta mainittu osa pulloihin, jotka sisältävät 225 ml peptonoitua vettä. Sekoita ja homogenoi näyte.

Jos epäillään, että mikrobikuormitus on suuri, voidaan tehdä laimennoksia tai desimaaleja, jotta helpotetaan pesäkkeiden muodostavien yksiköiden (CFU) laskemista..

Laimennusmäärä riippuu näytteen tyypistä ja analyyttisestä kokemuksesta.

Jos päinvastoin epäillään, että mikrobikuormitus on hyvin pieni, ei ole tarpeen tehdä laimennoksia. Myöhemmin subkultivoidaan valikoivassa mediassa.

Jos kyseessä on merestä peräisin oleva ruoka, kuten merenelävät, kalaa etsitään muun muassa Vibrio cholerae tai muut Vibrio-lajit, tulisi käyttää peptonivettä, joka on säädetty pH-arvoon 8,5 (alkalinen peptonoitu vesi).

Laadunvalvonta

Jokaisesta valmistetusta erästä inkuboidaan yksi tai kaksi putkea ilman inokulaatiota 24 tunnin ajan aerobioosissa 37 ° C: ssa. Ajan päätyttyä ei tulisi havaita sameutta tai värinmuutosta.

Myös hyvin tunnettuja kontrollikantoja voidaan käyttää niiden tehokkuuden arvioimiseen:

Tätä varten voidaan käyttää seuraavia bakteerikantoja: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää mikrobiologista kehitystä, jota havaitsee väliaineen sameus.

rajoituksia

-Kuivattu väliaine on erittäin hygroskooppinen, joten se on pidettävä poissa kosteudesta.

-Väliainetta ei saa käyttää, jos havaitaan jonkinlaista huononemista.

-Dehydratoitu viljelyväliaine tulisi säilyttää välillä 10 - 35 ° C

-Valmistettu väliaine on säilytettävä kylmässä (2-8 ° C).

viittaukset

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. Elintarvikkeiden mikrobiologisen analyysin tekniikat. 2009, toinen ed. Kemian tiedekunta, UNAM. Meksikossa. Versio kemian tiedekunnan UNAM: n käsikirjojen ja asiakirjojen ylläpitäjälle (AMyD) 1. Saatavilla osoitteessa: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratories Britania. Puskuroitu peptonada-vesi. 2015. Saatavilla: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Peptonin vesi. Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
4. Laboratories Britania. Peptonin vesi. 2015. Saatavilla: britanialab.com
5. Merck Laboratories Puskuroitu peptonivesi. Saatavilla osoitteessa: merckmillipore.com
6. Laboratories Conda Pronadisa. Alkalinen peptonoitu vesi. Saatavilla osoitteessa: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scottin mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.