Kulttuurivälineiden valmistelu, mitä se koostuu, tavoitteet ja vaiheet

viljelyalustojen valmistus Se on rutiinimenetelmä, jota käytetään laboratorioissa haluttujen mikro-organismien kasvua varten. Viljelyväliaineet ovat kiinteitä, nestemäisiä tai puolikiinteitä valmisteita, joilla on kaikki mikrobipopulaation kehittämiseen tarvittavat ravintoaineet.

Yleensä keinot kasvaa mikro-organismeja ovat runsaasti proteiineja ja aminohappoja, ja ne sisältävät yleensä jotakin komponenttia, joka suosii sellaisen organismin kasvua, jota haluat tutkia, kuten vitamiineja, verta, seerumia..

Yleistä tai yleistä viljelyalustaa ei ole, koska sen koostumus vaihtelee kiinnostavan mikro-organismin tarpeiden mukaan. Jotkut bakteerit voivat kehittyä missä tahansa viljelyväliaineessa, mutta toisilla on erityisvaatimuksia.

indeksi

• 1 Mitä se koostuu??
  • 1.1 Agar
  • 1.2 Nesteet
  • 1.3 Uutteet
  • 1.4 Peptonit
  • 1.5 Iskunvaimentimet
• 2 Tavoitteet
• 3 Median tyypit
  • 3.1 Perustuu sen kokoonpanoon
  • 3.2 Mikro-organismityypin perusteella
• 4 vaihetta
• 5 Viitteet

Mitä se koostuu??

Mikro-organismeja, kuten sieniä ja bakteereja, ei voida tutkia erikseen niiden pienen koon vuoksi. Siksi niitä on kasvatettava keinotekoisilla keinoilla, jotka mahdollistavat väestön merkittävän kasvun.

Jos esimerkiksi haluamme tutkia bakteereja, meidän on tarjottava heille oikeat olosuhteet, jotta ne voivat lisääntyä ja muodostaa siirtomaa (jota voidaan havaita paljaalla silmällä).

Viljelyalustan valmistus vaihtelee suuresti riippuen mikro-organismin tyypistä, jota halutaan viljellä. Ennen valmistelua on välttämätöntä tietää työelämän perustarpeet.

Seuraavaksi kuvataan yleisimpiä viljelyväliaineissa käytettyjä komponentteja, joilla on yleinen ajatus niiden valmistamisesta:

agaria

Sitä käytetään kasveissa geeliytysaineena ja lisätään, kun etsit kiinteää tai puolikiinteää väliainetta. Elatusaineen valmistuksessa käytetty ensimmäinen kiinteytysaine oli gelatiini, mutta vuonna 1883 agar otettiin W. Hessenin bakteerien maailmaan..

Bakteriologisella agarilla on pääkomponenttina monimutkaisten oksojen polysakkaridi, joka on uutettu levistä. Tätä yhdistettä käytetään sakeuttimena tavallisiin elintarvikkeisiin, kuten jäätelöön ja hilloihin.

Se on erittäin tärkeä osa mikrobiologiaa useista syistä. Pääasiassa siksi, että mikro-organismit eivät voi hajottaa sitä, nesteytyy 100 ° C: n lämpötilassa ja pysyy nestemäisessä tilassa, kunnes saavutetaan 45 ° C tai vähemmän.

Jos haluat valmistaa kiinteän väliaineen, agarin pitoisuuden tulisi olla noin 1,5%, kun taas puolikiinteät aineet on valmistettava 0,3 - 0,5%..

nesteet

Patogeenisten organismien viljely vaatii kehon nesteitä, jotta ne voivat kehittyä sellaisina kuin ne olisivat luonnollisessa ympäristössään. Tästä syystä lisätään koko tai defibrilloitua verta. Neste uutetaan terveestä eläimestä ja sen jälkeen, kun se on steriloitu, se lisätään kasvualustaan.

otteita

Ne saadaan erilaisista eläinten osista (kuten lihasta tai maksasta) tai vihanneksista (siemeniä) ja käsitellään kiinteän konsentraatin saamiseksi pastan tai jauheen muodossa. Yleisimmät ovat hiiva, malta ja liha.

Peptonas

Nämä orgaaniset yhdisteet saadaan eläin- tai kasvikudosten entsymaattisella tai kemiallisella hydrolyysillä. Tarkoituksena on lisätä sisältöä, joka sisältää runsaasti aminohappoja, jotka ovat proteiinien perusyksiköitä.

Iskunvaimentimet

Puskurit tai puskurijärjestelmät välttävät äkillisiä pH-muutoksia ja auttavat ylläpitämään optimaalista kehon sietokykyä.

Useimmat organismit voivat kehittyä oikein pH: ssa 7, vaikka jotkin bakteerit suosivat emäksistä elatusainetta. On kuitenkin olemassa bakteereita, jotka vastustavat pH-vaihteluita arvojen 6 ja 9 välillä.

PH: n herkille lajeille vauriota ei tuota liiallinen määrä vetyä tai hydroksyyli-ioneja, vaan heikkojen happojen tai emästen lisääntyminen, jotka voivat tunkeutua soluun.

Lisätään myös indikaattoreita, jotka osoittavat pH: n seurantaa ja välttää fermentaation tai muiden prosessien aiheuttamat poikkeamat.

tavoitteet

Päätavoitteena viljelyalustan valmistelussa on lisätä kaikki tarvittavat komponentit, jotta organismi, joka haluaa eristää, onnistuu hyvin. Tehokkain komponenttien ja ravinteiden yhdistelmä on tunnistettava halutun väliaineen saavuttamiseksi.

Sekä alustan valmistaminen että varastointi ovat kriittisiä onnistuneen kasvun varmistamiseksi, koska nämä vaiheet riippuvat ympäristön koostumuksesta ja ravinteiden saatavuudesta..

On otettava huomioon, että mikro-organismien viljely on tehtävä, joka vaikuttaa useisiin kasvualustan ulkopuolisiin tekijöihin, kuten vastaanotetun valon intensiteettiin, lämpötilaan ja happamuuden tai emäksisyyden tasoon. Siksi jokainen näistä muuttujista on otettava huomioon.

Median tyypit

Perustuu sen kokoonpanoon

Sen koostumuksen perusteella on kolme päätyyppiä: luonnollisia tai empiirisiä, puolisynteettisiä ja määriteltyjä synteettisiä tai kemiallisia keinoja.

Luonnollinen ympäristö

Luonnollisissa ympäristöissä tarkka koostumus ei ole tiedossa. Näitä ovat ainesosat, kuten maito, laimennettu veri, vihannesmehut, lihat ja peptonien uutteet ja infuusiot. Taloudellisista syistä usein lisätään edullisia komponentteja, kuten soijauutetta, heraa, melassia jne..

Puolisynteettiset materiaalit

Sitä kutsutaan puolisynteettiseksi väliaineeksi, jos sen koostumus on osittain tunnettu. Mikä tahansa agaria sisältävä väliaine tulee puolisynteettiseksi väliaineeksi.

Näiden joukossa on muitakin esimerkkejä papa-dekstroosiagarista, czapek-dox-agarista, kauran agarista, peptoni-liha-agarista..

Synteettinen tai kemiallisesti määritelty väliaine

Tällöin väliaineen koostumus - hiilen, typen, rikin, fosforin ja muiden kasvutekijälähteiden määrän mukaan - on täysin tunnettu. On erittäin hyödyllistä, jos haluat saada toistettavia tuloksia muille tutkijoille.

Niin kutsuttuja "mikro-organismeja, joilla on erityisiä kasvuvaatimuksia" on tarpeen lisätä tarvittavat komponentit. Tällainen esimerkki on Lactobacillus.

Perustuu mikro-organismityyppiin

Samoin viljelyelatusaineiden luokittelu perustuu myös siihen kasvavaan mikro-organismityyppiin. Tämän periaatteen mukaisesti meillä on seuraavat yleiset keinot rikastamiseksi, valikoivaksi ja erotukseksi. Kukin niistä on kuvattu alla:

Yleiset keinot

Nämä myöntävät monenlaisia ​​mikro-organismeja. Jos jokin organismi tarvitsee kasvun erityisolosuhteita, se ei pysty kehittymään menestyksekkäästi tämäntyyppisessä viljelyssä.

Rikastusvälineet

Rikastusvälineet suosivat tietyntyyppisen mikro-organismin kasvua, mutta ainetta ei ole lisätty estämään muiden mikrobien kasvua siinä..

Valikoiva media

He etsivät mikro-organismin erityistä kasvua, nimeltään sieniä, bakteereja, alkueläimiä. Tätä varten ne estävät muiden kehitystä.

Tämän tavoitteen saavuttamiseksi voidaan lisätä tappavia kemiallisia yhdisteitä suurelle joukolle mikro-organismeja ja vaarattomia kiinnostaville organismeille tai lisätä energialähteitä, jotka voidaan rinnastaa vain haluttuun mikrobiin.

Selektiivisiä väliaineita käytetään otettaessa lääketieteellisiä näytteitä patogeenisen mikro-organismin kasvattamiseksi. Tällöin on välttämätöntä edistää patogeenin kasvua ja estää normaalin mikrobilääkkeen kehittyminen potilaalta.

Esimerkiksi vismuttisulfiittiagar ei salli grampositiivisten bakteerien kasvua ja suurta määrää bakteereja, jotka löytyvät ruoansulatuskanavan ontelosta. Siksi sitä käytetään viljellä gram-negatiivisia bakteereita, jotka aiheuttavat lavantauti, Salmonella typhi ulostenäytteissä.

Eri tiedotusvälineet

Tämä tyyppi käyttää jonkin kiinnostuksen kohteena olevan organismin diagnostista ominaisuutta (esimerkiksi sen aineenvaihdunnan erityispiirteet), jotta ne voisivat tunnistaa ne toisesta lajista, joka kasvaa samassa ympäristössä.

Sekä erilaiset tiedotusvälineet että selektiiviset aineet ovat erittäin hyödyllisiä kliinisen mikrobiologian ja kansanterveyden alalla, koska näiden tieteenalojen on havaittava erityiset mikro-organismit, jotka liittyvät huonoihin hygieniaolosuhteisiin tai -olosuhteisiin..

Viljelyyn voidaan lisätä indikaattoriaineita, jotka antavat halutulle pesäkkeelle ominaisen ominaispiirteen. Esimerkiksi agar-eosiini-metyleenisinisellä (lyhennetty EMB) ja MacConkey-agarilla lisätään laktoosia ja pH-indikaattoria.

Siten, kun näissä väliaineissa kehitetään pesäkettä, joka kykenee fermentoimaan laktoosia ja tuottamaan aldehydejä, ne voidaan havaita erityisellä värillä.

portaat

Tällä hetkellä viljelyalustaa voidaan ostaa lyofilisoidussa muodossa. Siksi valmistetta helpotetaan ja vain tuote rehydratoidaan. Sisältö on punnittava (ottaen huomioon valmistettavan lopullisen määrän) ja liuotettava tislattuun veteen noudattaen kaikkia tuotteen ohjeita..

Nestemäisten väliaineiden pitoisuus on jaettava haluttuihin säiliöihin (Petri-astiat, putket jne.) Myöhempää sterilointia varten. Kiinteän väliaineen jakamiseksi on välttämätöntä sulata se mikroaaltouunilla tai altistamalla materiaali vesihauteelle. Väliaineen pH on säädettävä.

Yleensä agaria käytetään koeputkissa tai Petri-astioissa. Jos agar jähmettyy kaltevassa asennossa sopivalla kulmalla niin, että lopullinen päätteen reuna on diagonaalinen, tämä järjestely tunnetaan huiluhuippuna tai kaltevina putkina. Kun agar jähmettyy täysin pystysuorassa asennossa, sitä kutsutaan "syväksi".

Sen jälkeen kun väliaine on steriloitu - autoklaavilla - annetaan jäähtyä. Niitä on käsiteltävä mikro-organismeista vapaassa ympäristössä. Yleisin on työskennellä valaistulla sytyttimellä, joka takaa aseptisen ympäristön sen läheisyydessä.

viittaukset

1. Celis, J. E. (2006). Solubiologia: laboratoriokäsikirja (Vol. 2). Elsevier.
2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G.. Bailey Scott: mikrobiologinen diagnoosi. Pan American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Mikrobiologian käytäntöjen käsikirja I ja II sekä parasiitologia. Ciudad Juárezin autonominen yliopisto.
4. Schlegel, H. G., ja Zaborosch, C. (1993). Yleinen mikrobiologia. Cambridge University Press.
5. Tortora, G. J., Funke, B. R. & Case, C. L. (2007). Johdatus mikrobiologiaan. Ed. Panamericana Medical.