Puoli SIM-pohja, valmistelu ja käyttö



puoli SIM Se on puolikiinteä ja erilaista agaria, joka on erityisesti suunniteltu auttamaan eräiden bakteerien tunnistamista, lähinnä Enterobacteriaceae-sukuista. Se koostuu tripteiinistä, peptonista, rautasulfaatista, ammoniumsulfaatista, natriumtiosulfaatista ja agarista.

Tämä väliaine mahdollistaa kolmen tärkeän testin suorittamisen: vetysulfidin (H2S), indolin muodostuminen ja liikkuvuus, siten lyhenne SIM. Suuren hyödyllisyytensä vuoksi sitä ei voi puuttua bakteriologian laboratoriossa.

Toisin kuin muilla väliaineilla, tämän on oltava puolikiinteä, jotta joidenkin bakteerien liikkumiskyky on havaittavissa. Tässä mielessä tämä testi toimii erittäin hyvin enterobakteereille, mutta ei gram-negatiivisissa, ei-fermentoivissa bakteereissa, joissa on edullista käyttää muita menetelmiä, kuten esimerkiksi odottavaa pudotusta.

SIM-väliaine mahdollistaa eräiden tiettyjen bakteerien ominaispiirteiden erottamisen suhteessa muihin. Esimerkiksi Escherichia coli se erottuu olemalla H2S (-), indoli (+) ja liikkuvuus (+) Proteus mirabilis se on H2S (+), indoli (-), liikkuvuus (+).

indeksi

  • 1 Säätiö
    • 1.1 Virtalähde
    • 1.2 Vetyisulfidin tuotanto
    • 1.3 Indolin muodostuminen
    • 1.4 Liikkuvuus
  • 2 Valmistelu
    • 2.1 Puoli SIM
    • 2.2 Kovacin reagenssi
    • 2.3 Erlich-reagenssi
  • 3 Käyttö
    • 3.1 Seeded
  • 4 Laadunvalvonta
  • 5 Rajoitukset
  • 6 Viitteet

perusta

Se on viljelyväliaine, jota pidetään differentiaalisena, koska sen käyttö onnistuu erottamaan mikro-organismit, jotka kykenevät tuottamaan vety- sulfidia niistä, jotka eivät ole; korostaa myös niitä, jotka muodostavat indolin niiden tryptofaanista, jotka eivät muodosta sitä, ja lopulta erottaa liikkeen liikkumattomista bakteereista.

Virtalähde

Kuten missä tahansa viljelyväliaineessa, sillä on elementtejä, jotka tarjoavat tarvittavat ravintoaineet niin, että ei-vaativat mikro-organismit voivat kehittyä. Näitä elementtejä edustavat peptonit ja tripteína.

Mikro-organismin kehittyminen ympäristössä on välttämätöntä, jotta voidaan tarkkailla tällä väliaineella arvioitujen ominaisuuksien läsnäolo tai puuttuminen.

Vety- sulfidin tuotanto

SIM-kirjaimen lyhenne S viittaa vetysulfidin tuotantoon (H2S). Bakterit, jotka kykenevät muodostamaan vetysulfidia, vievät natriumtiosulfaatin rikkiä.

Kun H on muodostettu2S - väritön kaasu - tämä reagoi väliaineessa olevan rautasuolan kanssa, jolloin muodostuu ferrosulfidia, joka on selvästi näkyvissä (musta saostuma). Bakteerit, jotka eivät muodosta H2S, jätä alkuperäisen värin keskelle (beige).

Mustan sakan läsnäolo voi estää liikkuvuuden tulkinnan. On kuitenkin tunnettua, että suurin osa H: tä tuottavista enterobakteereista2S on positiivinen liikkuvuus, kuten Salmonella, Proteus ja Citrobacter. Lisäksi melkein koko väliainetta sisältävä musta sakka viittaa positiiviseen liikkuvuuteen.

Indolin koulutus

Toisen kirjaimen lyhenne SIM on "I", joka edustaa indolin muodostumista.

Tässä mielessä tripteína, joka on ravintoaineen lähde, täyttää toisen perustavanlaatuisen tehtävän. Tämä peptoni sisältää runsaasti aminohappoa, jota kutsutaan tryptofaaniksi, ja siksi se voi näyttää tryptofanaasia tuottavat bakteerit.

Tämä entsyymi on vastuussa aminohapon tryptofaanin leikkaamisesta siten, että muodostuu indoli (väritön aine), pyruvihappo ja ammonium..

Tämän vuoksi tämän reaktion osoittamiseksi on tarpeen lisätä paljastava aine (Ehrlichin reagenssi tai Kovacin reagenssi). Kumpikin reagoi indolin kanssa muodostaen renkaanmuotoisen punaisen fukseja-aineen agarin pinnalle. Jos fuksiorengas näyttää, indolin testi tulkitaan positiiviseksi.

Bakteerit, joilla ei ole tätä entsyymiä, eivät muodosta rengasta ja tulkitaan negatiiviseksi indolitestiksi.

On tärkeää huomata, että indolin testin tulisi olla viimeisin tulkittava, koska kun reagenssi on lisätty, väliaine muuttuu sameaksi, jolloin liikkuvuuden visualisointi on vaikeaa.

liikkuvuutta

Lopuksi sanan "SIM" kirjain "M" tarkoittaa liikkuvuutta. Jotta liikkuvuus voitaisiin arvioida, tämä väliaine on strategisesti puolikiinteä, koska tämä ominaisuus on välttämätön, jotta voidaan havaita, onko bakteeriliikkeellä vai ei. Bakteerit, joilla on flagella, ovat sellaisia, jotka antavat tämän positiivisen testin.

Positiivinen testi on ilmeinen, kun havaitaan sameutta sekä alkuperäisessä inokulaatissa että sen ympärillä. Vaikka ei-liikkuvat bakteerit kehittyvät vain alkuperäisessä inokulaatioreitissä.

valmistelu

Puoli SIM

Punnitaan 30 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Seoksen annetaan seistä 5 minuuttia ja sitten kuumennetaan kiehuvaksi, samalla sekoittaen, kunnes se on täysin liuennut..

Seos jaetaan testiputkiin puuvillakannella ja autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuuttia. Irrota putkiteline autoklaavista ja anna sen kiinteytyä pystyasennossa niin, että väliaine on lohkon muotoinen..

Säilytys säilytetään jääkaapissa, kunnes sitä käytetään. Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n on oltava 7,3 ± 0,2.

Väliaineen istuttamisen hetkellä sen on oltava huoneenlämpötilassa. Väliaineen väri on beige.

Kovacin reagenssi

Mittaa 150 ml amyyli- tai isoamyyli- tai butyylialkoholia. (Käytä jotakin kolmesta mainituista).

Liuotetaan 10 g p-dimetyyliaminobentsaldehydiä. Sitten lisätään hitaasti 50 ml väkevää kloorivetyhappoa.

Käyttövalmis reagenssi on väritön tai vaaleankeltainen. Se on säilytettävä keltaisessa pullossa ja säilytettävä jääkaapissa. Älä käytä, jos se on tummanruskea; joka osoittaa, että se on vahingoittunut. Tämä reagenssi on edullinen käsiteltäessä enterobakteereja.

Erlichin reagenssi

Punnitaan 2 g p-dimetyyliaminobentsaldehydiä ja liuotetaan 190 ml: aan absoluuttista etyylialkoholia ja sekoitetaan hitaasti 40 ml: lla väkevää kloorivetyhappoa. Pidä Kovacin reagenssi samalla tavalla. Ehrlichin reagenssia käytetään enemmän ei-fermentoiviin ja anaerobisiin bakteereihin.

sovellukset

SIM-alustaa käytetään erittäin hyvin bakteriologian laboratorioissa. Sen etuna on, että samassa putkessa Enterobacteriaceae-tunnisteen tunnistamisessa voidaan havaita kolme olennaista ominaisuutta.

istutettu

Oikea tapa kylvää tämä elatusaine on neulan käyttö, jonka kanssa osa tutkittavasta puhdasta pesäkettä otetaan ja asetetaan keskipisteeseen pystysuoraan. On tehtävä yksi työntövoima. Puhkaisu ei saa päästä putken pohjaan, oikea asia on kattaa vain kaksi kolmasosaa syvyydestä.

Inokulaattia ei ole suositeltavaa toistaa, koska tämä voi johtaa vääriin positiivisen liikkuvuuden tulkintoihin. Inokuloitua elatusainetta inkuboidaan aerobioosissa 37 ° C: ssa 24 tuntia.

Lopetettiin aika, joka havaitaan, jos H: n tuotanto oli tai ei2S ja motiliteetti luetaan. Lopuksi indoli paljastuu, lisäämällä 3 - 4 tippaa Ehrlichiä tai Kovacin reagenssia, se sekoitetaan kevyesti ja tulkitaan.

Laadunvalvonta

Sterilisaatiokontrollina yhtä tai kahta putkea inkuboidaan ilman inokulaatiota uunissa 37 ° C: ssa 24 tuntia. Tämän jälkeen on odotettavissa, että värin kasvua tai muuttumista ei tapahdu.

Laadunvalvonnassa voidaan käyttää sertifioituja tunnettuja kantoja, kuten: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Odotetut tulokset ovat: Escherichia coli H2S negatiivinen, indoli ja positiivinen liikkuvuus, Enterobacter aerogenes vain positiivinen liikkuvuus, Salmonella typhimurium H2S ja positiivinen liikkuvuus negatiivisella indolilla. Proteus vulgaris kaikki positiiviset Klebsiella pneumoniae ja Shigella sonnei kaikki negatiivinen.

rajoituksia

-Jotkut Morganella morganii, muiden kantojen välillä voi tuottaa ruskean pigmentin tässä elatusaineessa melaniinin tuotannon vuoksi, tätä ei pidä sekoittaa rautasulfidin saostumiseen. Kokemattomilla ammattilaisilla tämä tilanne voi tuottaa vääriä positiivisia tuloksia H-testin tulkinnassa2S.

-Tiukat aerobiset bakteerit kasvavat vain putken pinnalla, mikä vaikeuttaa liikkuvuuden tulkitsemista.

viittaukset

  1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Saatavilla osoitteessa: bd.com
  2. Neogen Laboratories SIM-keskitaso. Saatavana osoitteessa: foodsafety
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM-keskitaso. 2009. Saatavilla osoitteessa: http://f-soria.es
  4. Brizuela-Lab-laboratorio SIM-keskitaso. Saatavilla osoitteessa: .brizuela-lab.com
  5. Laboratories Britania. SIM-keskitaso. 2015. Saatavilla osoitteessa: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5th ed. Toimituksellinen Panamericana S.A. Argentiina.